在洗滌劑中具有改善穩定性的蛋白酶制造技術

本發明專利技術涉及在洗滌劑中具有改善穩定性的蛋白酶。具體地，本發明專利技術涉及在洗滌劑組合物穩定性改善的蛋白酶。此外，本發明專利技術涉及包含本發明專利技術蛋白酶的清潔組合物或洗滌劑組合物以及此蛋白酶在洗滌劑組合物中的用途。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及具有在洗滌劑組合物中改善穩定性的蛋白酶。本專利技術還涉及編碼所述蛋白酶的分離多核苷酸、核酸構建體、重組表達載體、包含所述核酸構建體的宿主細胞和用于生產和使用本專利技術蛋白酶的方法。此外，本專利技術涉及包含本專利技術蛋白酶的清潔組合物和洗滌劑組合物以及涉及所述蛋白酶在洗滌劑組合物中的用途。專利技術背景 在洗滌劑工業中，向洗滌配方中添加酶的應用已超過30年。用于此類配方的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、甘露糖苷酶以及其它酶或其混合物。商業上最重要的酶是蛋白酶。在本領域內，例如在EP 130756 (GENENTECH)(對應于美國再公告專利號34，606(GENENCOR)) ；EP 214435(HENKEL) ；W0 87/04461(AMGEN) ；W0 87/05050(GENEX)；EP 260105 (GENENCOR) ;Thomas、Russell 和 Fersht (1985) Nature 318 375-376 ;Thomas、RusselI 和 Fersht(1987)J. Mol.Biol. 193803-813 ;Russel 和 Fersht Nature 328496-500(1987) ；W0 88/08028 (Genex) ；W0 88/08033(Amgen) ；W0 95/27049 (SOLVAYS. A.) ；W0 95/30011 (PROCTER&GAMBLE 公司)；W0 95/30010 (PROCTER&GAMBLE 公司)；W095/29979 (PROCTER&GAMBLE 公司)；US 5. 543. 302 (SOLVAY S. A.) ；EP 251 446 (GENENCOR)；WO 89/06279 (N0V0ZYMES A/S) ；W0 91/00345 (N0V0ZYMES A/S) ；EP 525 610 Al (SOLVAY)；WO 94/02618 (GIST-BROCADES N. V.)公開了為數眾多的此類蛋白酶變體。WO 89/06270 (Novozymes A/S)公開了包含有限底物特異性蛋白酶的洗滌劑組合物，其中所述蛋白酶是能夠斷裂賴氨酸或精氨酸的C-末端側肽鍵的胰蛋白酶樣蛋白酶。而WO 94/25583公開了編碼鐮孢霉屬(Fusarium)胰蛋白酶樣蛋白酶DNA序列的克隆并且從所述DNA序列中獲得了活性胰蛋白酶樣蛋白酶的表達。然而，即便已經描述了眾多有用的蛋白酶和蛋白酶變體，但是為了眾多的工業用途仍需要進一步改善蛋白酶或蛋白酶變體。具體而言，由于洗滌劑中存在的物質往往會降低蛋白酶的穩定性，所以蛋白酶在洗滌劑中的穩定性問題已經變得尤其明顯。因此，本專利技術的目標是提供改良的蛋白酶，所述蛋白酶適用于例如洗衣房和/或硬質表面清潔的洗滌劑中。專利技術簡沭本專利技術在第一個方面涉及具有在洗滌劑中穩定性改善的蛋白酶，所述蛋白酶選自a.具有與如SEQ ID NO: 2的第1_266位氨基酸所示氨基酸序列至少73%同一性的氨基酸序列的蛋白酶；b.由在低嚴格條件下與下列序列雜交的核酸序列所編碼的蛋白酶(i)如SEQ ID NO:1的第127-804位核苷酸所示的核酸序列的互補鏈，或(ii)至少100個核苷酸的⑴的亞序列；以及c.與如SEQ ID NO:2的第1_266位氨基酸所示氨基酸序列相比具有1_50、優選1-40或1-30、更優選1-20、最優選1-10個氨基酸替代的蛋白酶。本專利技術在第二個方面涉及包含編碼本專利技術蛋白酶的核酸序列的分離多核苷酸。本專利技術在第三個方面涉及編碼蛋白酶的分離多核苷酸，所述多核苷酸選自a.具有與如SEQ ID NO:1的第52-804位核苷酸所示核酸序列至少80%同一性的核酸序列；和b.在低嚴格條件下與下列序列雜交的核酸序列 (i)如SEQ ID NO:1的第52-804位核苷酸所示核酸序列的互補鏈；或(ii)至少100個核苷酸的⑴的亞序列。本專利技術在第四個方面涉及包含本專利技術核酸序列的核酸構建體，其中所述核酸序列與能夠指導蛋白酶在適宜宿主中表達的一種或多種控制序列有效連接。本專利技術在第五個方面涉及包含本專利技術核酸構建體、啟動子和轉錄終止信號及翻譯終止信號的重組表達載體。本專利技術在第六個方面涉及包含本專利技術核酸構建體的重組宿主細胞。本專利技術在第七個方面涉及生產本專利技術蛋白酶的方法，所述方法包括(a)在誘導產生所述蛋白酶的條件下培養本專利技術重組宿主細胞；和(b)回收蛋白酶。本專利技術在第八個方面涉及包含本專利技術蛋白酶的清潔組合物或洗滌劑組合物、優選衣物洗滌組合物或洗碟組合物。本專利技術的另一些方面涉及本專利技術蛋白酶在清潔組合物或洗滌劑組合物中的用途；用于清潔或洗滌硬質表面或衣物的方法，所述方法包括將硬質表面或衣物與本專利技術組合物接觸。定義在更詳細討論本專利技術之前，首先定義如下術語和慣例。氨基酸的命名A = Ala =丙氨酸V = Val =纈氨酸L = Leu =亮氨酸I = Ile =異亮氨酸P = Pro =脯氨酸F = Phe =苯丙氨酸W = Trp =色氨酸M = Met =甲硫氨酸G = Gly =甘氨酸S = Ser =絲氨酸T = Thr =蘇氨酸C = Cys =半胱氨酸Y = Tyr =酪氨酸N = Asn =天冬酰胺Q = Gln =谷氨酰胺D = Asp =天冬氨酸E = Glu =谷氨酸K = Lys =賴氨酸R = Arg =精氨酸H = His =組氨酸X = Xaa =任意氨基酸核酸的命名A =腺嘌呤G=鳥嘌呤C =胞卩密唳T =胸腺嘧啶(僅在DNA中)U =尿嘧啶(僅在RNA中)蛋白酶將斷裂蛋白質底物中酰胺鍵的酶歸類為蛋白酶或(可互換地為)肽酶(見Walsh，1979, Enzymatic Reaction Mechanisms, ff. H. Freeman and Company, San Francisco,第 3章)。絲氨酸蛋白酶絲氨酸蛋白酶是催化肽鍵水解并且在酶的活性位點內存在一個必需絲氨酸殘基的酶(White, Handler 和 Smith, 1973, “Principles of Biochemistry”,第五版，McGraw-Hi 11 Book Company, NY,第 271-272 頁)。細菌絲氨酸蛋白酶的分子量范圍為20，000-45, 000道爾頓。它們可被二異丙基氟磷酸抑制。細菌絲氨酸蛋白酶水解單純末端酯并且其活性類似于同樣為絲氨酸蛋白酶的真核胰凝乳蛋白酶。更狹義的術語堿性蛋白酶則含蓋一個亞類，其反映某些絲氨酸蛋白酶具有高的最佳 pH (9. 0-11. 0)(綜述見 Priest (1977) Bacteriological Rev. 41 711-753)。胰蛋白酶樣蛋白酶術語“胰蛋白酶樣蛋白酶”在本上下文中旨在指具有類似于胰蛋白酶活性的蛋白酶，即能夠斷裂位于賴氨酸或精氨酸的C末端側肽鍵的酶。如在以下材料和方法部分中實施例IV所述，基于胰蛋白酶底物斷裂的測定法測定胰蛋白酶樣蛋白酶活性。母體蛋白酶母體蛋白酶可以是從自然來源分離的蛋白酶，其中可以在保留蛋白酶特征的同時對此蛋白酶進行后續修飾。而且，母體蛋白酶還可以是通過如J. E. Nes本文檔來自技高網...

【技術保護點】
選自下列的蛋白酶：a.包含與如SEQ?ID?NO:2的第1?226位氨基酸所示氨基酸序列具有至少73%同一性的氨基酸序列的蛋白酶；和b.由在低嚴格條件下與下列序列雜交的核酸序列所編碼的蛋白酶：(i)如SEQ?ID?NO:1的第127?804位核苷酸所示核酸序列的互補鏈，或(ii)至少100個核苷酸的(i)的亞序列；和c.與如SEQ?ID?NO:2的第1?266位氨基酸所示氨基酸序列相比具有1?50、優選1?40或1?30、更優選1?20、最優選1?10個氨基酸替代的蛋白酶。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：吳文平，KV約庫姆森，MA斯特林格，
申請(專利權)人：諾維信公司，
類型：發明
國別省市：