生產(chǎn)流感疫苗組合物的方法技術(shù)

提供了用于在蛋和宿主細胞中優(yōu)化和生產(chǎn)適合作為流感疫苗的流感病毒，例如ca乙型流感病毒株的方法和組合物。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)專利申請是國際申請?zhí)枮镻CT/US2005/044267，國際申請日為2005年12月7 日，進入中國國家階段的申請?zhí)枮椤?00580047731.0”，專利技術(shù)名稱為“”的專利技術(shù)專利申請的分案申請。專利技術(shù)背景無論從社會健康的立場還是商業(yè)立場上看，抗流感的各種病毒株和演變病毒株的疫苗都是至關(guān)重要的，因為每年有許多個體感染不同病毒株和不同類型的流感病毒。嬰兒、 老年人、那些衛(wèi)生保健不足和免疫受損的人尤其面臨因這種感染而死亡的風險。流感感染問題因新型流感病毒株易于演變而愈加復(fù)雜，因此需要不斷制造新型疫苗。過去50年間生產(chǎn)了許多對不同流感病毒能產(chǎn)生特異性免疫保護應(yīng)答的疫苗，包括，例如全病毒疫苗、裂解病毒疫苗、表面抗原疫苗和減毒活病毒疫苗。然而，盡管任何這些疫苗類型的合適制劑能產(chǎn)生全身性免疫應(yīng)答，但減毒活病毒疫苗具有能刺激呼吸道局部粘膜免疫力的優(yōu)點。含減毒活病毒的疫苗還具有制備快速而經(jīng)濟、易于儲存和運輸?shù)膬?yōu)點，因此是十分適宜的疫苗。同樣理想的是提高這種病毒的產(chǎn)量，從而提高這種病毒疫苗產(chǎn)量，尤其是已被證實用傳統(tǒng)方法難以制造和/或大規(guī)模商業(yè)生產(chǎn)的病毒株的疫苗的產(chǎn)量的方法。迄今為止，在美國可商業(yè)購得的所有流感疫苗是在含胚雞蛋中增殖。雖然流感病毒株在雞蛋中生長良好，但疫苗的產(chǎn)量取決于這種雞蛋的可利用量。因為必須組織這種雞蛋的供應(yīng)，并在下一流感爆發(fā)季前數(shù)月選擇可用于疫苗生產(chǎn)的病毒株，所以此方法的靈活性有限，并且常導(dǎo)致生產(chǎn)和銷售滯后和短缺。同時，一些流感病毒株在蛋中的生長不及其它流感病毒毒株(例如，不以高效價產(chǎn)生)。因此急需找到提高產(chǎn)量，例如這種病毒所需毒株的產(chǎn)量以及疫苗產(chǎn)量的方法。近年來也開發(fā)了在細胞培養(yǎng)物中制備流感疫苗的系統(tǒng)(參見,例如Furminger, “疫苗生產(chǎn)”(Vaccine Production),刊于 Nicholson 等編，《流感教材》(Textbook of Influenza)，第324-332頁；Merten等，(1996)，“在用于疫苗制備的細胞培養(yǎng)物中生產(chǎn)流感疫苗，’(Production of influenza virus in cell cultures for vaccine preparation), 刊于Cohen和Shafferman編，《疫苗設(shè)計和生產(chǎn)的新方案》(Novel Strategies in Design and Production of Vaccines),第141-151頁)。然而,這些系統(tǒng)也可能遇到蛋中生產(chǎn)或放大的問題，并因此也可能遇到生產(chǎn)能力問題，尤其是涉及特定毒株時。因此，任何提高這些系統(tǒng)中的病毒/疫苗產(chǎn)量的方法也是急需的。本專利技術(shù)的專利技術(shù)人及其同事在生產(chǎn)用于疫苗制備的流感病毒方面作了大量的工作， 參見，例如，PCT申請WO 03/09140UW0 05/014862以及2005年5月20日提交的PCT專利申請PCT/US05/017734和2005年10月4日提交的PCT/US05/035614。本專利技術(shù)提供了提高用于疫苗組合物生產(chǎn)的流感病毒和病毒組合物產(chǎn)量方法。本專利技術(shù)的一些方面適用于傳統(tǒng)的用雞蛋制備疫苗的模式和包括在雞蛋中病毒生長步驟的新的細胞培養(yǎng)物疫苗產(chǎn)生模式 (以及組合系統(tǒng))，并包括許多其它益處，這些益處通過以下描述是顯而易見的。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)包括生產(chǎn)流感病毒顆粒的方法，該方法包括將眾多含有或編碼流感病毒基因組或部分基因組的載體(例如，質(zhì)粒、病毒等，見下文)引入一個或多個宿主蛋或其它宿主細胞(例如，MDCK和Vero)，并在低于33°C的溫度下孵育所述宿主蛋或其它宿主細胞 (例如，MDCK和Vero);并從所述宿主蛋或其它宿主細胞(例如，MDCK和Vero)回收所述流感病毒顆粒。本專利技術(shù)還包括提高流感病毒顆粒產(chǎn)量的方法，所述方法包括在低于33°C 的溫度(例如，31°C )下孵育所述宿主細胞(例如，MDCK或VeiO細胞的連續(xù)細胞培養(yǎng)物) 或含胚蛋中的所述病毒顆粒。在某些實施方案中，在低于33°C的溫度下生產(chǎn)的病毒顆粒的IogiciTCID5tlAiL滴度大于在33°C生產(chǎn)的相同病毒顆粒的滴度。在其它實施方案中，本專利技術(shù)的方法包括將流感病毒(例如，重配病毒)引入一個或多個能夠支持流感病毒復(fù)制的含胚蛋，從而感染所述含胚蛋。再在其它實施方案中，本專利技術(shù)的方法包括將流感病毒(例如，重配病毒)引入能夠支持流感病毒復(fù)制的宿主細胞(例如，MDCK和Vero)從而感染所述宿主細胞。所產(chǎn)生的病毒可以是乙型流感病毒株的病毒、減毒的流感病毒、冷適應(yīng)流感病毒、溫敏流感病毒、減毒的冷適應(yīng)溫敏流感病毒或其任意組合。一些實施方案中，所述病毒包含PR8骨架，而在其它實施方案中，所述病毒包含Ann Arbor B株流感病毒骨架、B/ Leningrad/14/17/55 骨架、B/14/5/1、B/USSR/60/69 骨架、B/Leningrad/179/86 骨架、B/ Leningrad/14/55骨架或B/England/2608/76骨架。一些實施方案中，所述病毒是caB/ Jilin/20/03。某些實施方案中，所述蛋是SPF雞蛋。一些實施方案中，所述宿主細胞是MDCK 細胞。同時，某些實施方案中，在低于33°C孵育包括在29-33°C之間、或在31_33°C之間、或在31-32°C之間、或在31 °C孵育所述蛋或其它宿主細胞(例如，MDCK和Vero)。本專利技術(shù)的其它方面包括通過上述方法生產(chǎn)的流感病毒以及含有這種病毒的組合物和含有這種病毒的流感疫苗(例如，液態(tài)的減毒鼻內(nèi)活疫苗)。這種可通過本專利技術(shù)生產(chǎn)的病毒可任選包括，例如，CAIV(冷適應(yīng)流感病毒，例如，在三價制劑中)、諸如PCT公開WO 05/014862 中描述的那些病毒、諸如在例如PCT公開W001/183794、W0 00/60050,USPN 6，544，785及USPN 6，649，372中描述的那些病毒、以及其它類似的或有關(guān)的病毒和病毒類型。通過閱讀下面的詳細描述并結(jié)合附圖和權(quán)利要求就可以更全面地理解本專利技術(shù)的這些目的和特征以及其他目的和特征。附圖說明圖I展示的表顯示了作為二次(secondary)孵育溫度函數(shù)的caB毒株的病毒產(chǎn)量 (TCID50/mL)。圖2顯示了作為二次孵育溫度函數(shù)的caB毒株的產(chǎn)量(TCID5(l/mL)的圖。圖3展示的表顯示了作為二次孵育溫度函數(shù)的caB/Ji I in/20/03的病毒產(chǎn)量 (TCID50/mL)。圖4展示的表顯示了當在29_33°C之間的溫度下孵育的蛋中生長時，表達特征性 ca和ts表型的各種ca乙型流感病毒株的表型。圖5展示的表顯示了在不同溫度下孵育并在感染72小時后收獲的感染的蛋尿囊液的HA滴度。圖6展示的表顯示了在不同溫度下孵育的感染的蛋尿囊液的HA病毒RNA量。圖7展示的表顯示了通過將拷貝數(shù)減去感染性顆粒數(shù)量(IogiciTCID5tl)測定的基因組拷貝與感染性病毒的比例。圖8展示的表顯示了當在31 °C和33 °C生長時caB/Ji I in/20/03和caB/ AnnArbor/1/94感染性顆粒的百分數(shù)。圖9展示的表顯示了在33 °C生長的caB/Ji I in/20/03 (I批)和在31 °C生長的caB/ Jilin/20/03 (2本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種提高減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B病毒顆粒的產(chǎn)量的方法，所述方法包括：a.將多種減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B病毒導(dǎo)入宿主蛋，所述宿主蛋是SPF含胚雞蛋；b.在31±0.5℃的溫度下孵育所述宿主蛋；和c.從所述宿主蛋回收流感病毒顆粒，其中孵育產(chǎn)生的回收的病毒顆粒產(chǎn)量大于所述減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B在宿主蛋中33℃下孵育所得到的產(chǎn)量。

【技術(shù)特征摘要】
2004.12.08 US 60/634,6901.一種提高減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B病毒顆粒的產(chǎn)量的方法，所述方法包括 a.將多種減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B病毒導(dǎo)入宿主蛋，所述宿主蛋是SPF含胚雞蛋； b.在31±0.5°C的溫度下孵育所述宿主蛋；和 c.從所述宿主蛋回收流感病毒顆粒， 其中孵育產(chǎn)生的回收的病毒顆粒產(chǎn)量大于所述減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B在宿主蛋中33°C下孵育所得到的產(chǎn)量。2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B含有AnnArbor B流感病毒株的至少一個vRNA基因組區(qū)段。3.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述重配流感病毒B含有caB/AnnArbor/1/94流感病毒株的1、2、3、4、5、6或7個vRNA區(qū)段。4.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B含有B/AnnArbor/1/66主供體病毒的1、2、3、4、5、6或7個vRNA區(qū)段。5.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B含有B/Leningrad/14/17/55 流感病毒株的 1、2、3、4、5、6 或 7 個 vRNA 區(qū)段。6.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述減毒冷適應(yīng)重配流感病毒B含有B/14/5/1流感病毒株的1、2、3、4、5、6或7個vRNA區(qū)段。7.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述減毒冷適...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：Q·黨，R·施瓦茨，
申請(專利權(quán))人：米迪繆尼有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：