治療性DLL4結合蛋白制造技術

本發明專利技術描述了DLL4結合蛋白，包括抗體、CDR嫁接的抗體、人源化抗體及其DLL4結合片段、以高親和力結合人DLL4的蛋白質、和中和DLL4和/或VEGF活性的DLL4結合蛋白。DLL4結合蛋白用于治療或預防癌癥和腫瘤且尤其用于治療或預防腫瘤血管生成。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
·本專利技術涉及DLL4結合蛋白的開發和使用及其在抑制、預防和/或治療癌癥、腫瘤、其他血管生成依賴性疾病、血管生成非依賴性疾病、以及特征在于異常DLL4表達或活性的黃斑變性和年齡相關的黃斑變性疾病中的用途。
技術介紹
細胞間通訊是許多生物學過程例如分化、增殖和穩態所需的。由廣泛范圍的真核細胞利用的一種系統是Notch信號傳導途徑。這個途徑尤其是Notch受體對于功能性腫瘤血管生成也是關鍵的。因此，Notch受體功能的抑制、Notch受體的阻斷和/或Notch信號傳導途徑的阻斷是抗癌組合物和療法的潛在策略。Notch受體的小分子抑制劑已證明是毒性的，因為它們抑制遍及機體的Notch受體的野生型(正常)組織表達。因此，Notch信號傳導途徑的不同成員應視為用于治療學的潛在靶。關于Notch受體的脈管系統配體是δ4或δ樣4(DLL4)。在脈管系統中大量表達的 DLL4 對于脈管發育是關鍵的(Yan 等人，Cancer Res.，13 (24):7243-7246 (2007)；Shutter 等人，(7(9/7(951 Dev. ,14 (11):1313-1318 (2000) ;Gale 等人，Natl. Acad.Sci. USAAQl (45):15949-15954 (2004) ;Krebs 等人，Dev. , 14 (11) :1343-1352(2000))。由于脈管發育中的主要缺陷，對于DLL4雜合的小鼠是胚胎致死的(Gale等人，Proc. Natl. Acad. Sci. "5 ，101 (45) : 15949-15954 (2004) ;Duarte 等人，ifer.，18 (20):2474-2478 (2004) ;Krebs 等人，ifeK , 18 (20):2469-2473 (2004))。DLL4的表達可以通過 VEGF 誘導(Liu 等人，#o7. Cell Biol., 23 (1):14-25 (2003) ;Lobov 等)κ，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104 (9) :3219-3224 (2007))。總之，DLL4 可以負面調節VEGF信號傳導，部分通過阻遏VEGFR2且誘導VEGFRl (Harrington等人，Microvasc.Tfes.，75 (2) :144-154 (2008) ;Suchting 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104 (9)3225-3230 (2007))。在DLL4和VEGF之間的巧妙配合對于功能性血管生成是必需的。除其生理學作用外，DLL4在腫瘤血管中是上調的(Gale等人，Proc. Natl. Acad.Sci. USAAQl (45):15949-15954 (2004) ;Mailhos 等 k, Differentiation,m (2-3)135-144 (2001);Patel 等人，Tfes.，65 (19):8690-8697 (2005);Patel 等人，CZi/ .Cancer Res. ,12 (16):4836-4844 (2006) ；Noguera-Troise 等人，Tfeiare,444 (7122)1032-1037(2006))。DLL4的阻斷潛在抑制多重模型中的原發性腫瘤生長(Noguera-Troise等人，艙i re，444 (7122):1032-1037 (2006)；Ridgway 等人，艙iare，444 (7122):1083-1087(2006) ；Scehnet 等人，Blood, 109 (11) :4753-4760 (2007))。DLL4 的抑制甚至針對對于抗VEGF療法有抵抗力的腫瘤也是有效的。DLL4和VEGF的組合抑制提供了增強的抗腫瘤活性。有趣的是，與減少腫瘤脈管形成的VEGF抑制不同，DLL4阻斷導致腫瘤脈管系統密度中的增加，其中脈管是異 常的，不能支持有效的血液運輸，并且是有效地無功能的。因此，DLL4提供了用于癌癥治療的潛在靶。本領域需要能夠靶向DLL4_Notch途徑并且從而抑制或甚至預防腫瘤血管生成和生長的治療劑。專利技術概沭 本專利技術提供了結合人DLL4的蛋白質。本專利技術的DLL4結合蛋白包括但不限于大鼠單克隆抗體、嵌合抗體、cDNA嫁接抗體(⑶R grafted antibody)、人源化抗體、靈長類化的(primate-ized)抗體、親和力成熟的抗體、及其能夠結合人DLL4的片段。優選地,本文描述的結合蛋白以高親和力結合人DLL4。更優選地，根據本專利技術的結合蛋白能夠中和人DLL4。本專利技術還提供了制備且使用DLL4結合蛋白的方法。本專利技術的一個方面提供了能夠結合人DLL4的結合蛋白，其中所述結合蛋白包含選自下述氨基酸序列的至少一種氨基酸序列SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158, SEQ IDNO:159,SEQ ID NO:160,SEQ ID N0:161、SEQ ID NO:162,SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164。本專利技術的一個方面涉及包含抗原結合結構域的結合蛋白，其中所述結合蛋白能夠結合人DLL4，所述抗原結合結構域包含至少一個或多個(即，兩個、三個、四個、五個或六個)CDRs，其中 CDR-Hl 選自 X1-X2-X3-X4-X5 (SEQ ID NO: 151)，其中； 乂1是隊!1或Y; 乂2是卩； X3 是P;乂4 是 M ; X5是A或S ; SEQ ID NO: 157 的殘基 31-35 (CDR-Hl 38H12)； SEQ ID NO: 161 的殘基 31-35 (CDR-Hl 37D10)； SEQ ID NO: 163 的殘基 31-35 (CDR-Hl 32C7)； SEQ ID NO: 165 的殘基 31-35 (CDR-Hl 14G1)； SEQ ID NO: 167 的殘基 31-35 (CDR-Hl 14A11)； SEQ ID NO: 169 的殘基 31-35 (CDR-Hl 15D6)；SEQ ID NO: 171 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. I 1A11)；SEQ ID NO: 172 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. Ia 1A11)；SEQ ID NO: 173 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. Ib 1A11)；SEQ ID NO: 174 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. 2a 1A11)；SEQ ID NO: 179 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. I 38H12)；SEQ ID NO: 180 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. IA 38H12)；SEQ ID NO: 181 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. Ib 38H12)；SEQ ID NO: 182 的殘基 31-35 (CDR-Hl VH. 2a 38H12)；SEQ ID NO: 187 的殘基 31-35 (CDR-Hl hlAllVH. I)；SEQ ID NO本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：Y李，JJ顧，S摩根拉普，M陳，CM謝，
申請(專利權)人：ABBVIE公司，
類型：
國別省市：