本發明專利技術提供了一種水稻抗稻瘟病基因Pigm的分子標記方法，共篩得4個特異性分子標記G1408、G2997、G2723和G5301。利用這4個與抗稻瘟病基因共分離的特異性分子標記，對水稻親本或雜交后代的基因組DNA進行PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳檢測，凡檢測到含有4個特異分子標記中任意一個標記的水稻植株則可作為含高抗稻瘟病Pigm基因的育種材料。該方法操作簡便，檢測結果準確，可滿足高通量分子標記輔助育種的要求。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及農作物分子遺傳育種學領域，具體地說，涉及一種。
技術介紹
稻痕病是一種世界性的水稻病害，其危害面積與危害程度日趨嚴重，被稱為水稻的癌癥。利用分子育種技術選育含有抗稻瘟病基因的品種被認為是控制稻瘟病危害最經濟有效的方法。在已公布的抗稻瘟病基因中，水稻品種‘谷梅4號’的Pigm基因是抗譜廣且抗性持久的基因之一，對不同地區和國家的30多個強致病菌株中的29個表現出高抗或免疫，效果顯著優于目前應用的廣譜抗瘟基因Pil、Pi2、Ρ 9等，經湖南稻瘟病病圃多年鑒定，‘谷梅4號’ 一直為高抗品種。目前含Pigm基因的水稻資源非常少，加大對Pigm基因的利 用將促進水稻品種的抗稻瘟病能力。常規的抗稻瘟病育種方法費時費力，且結果不太可靠，而利用分子標記輔助選擇育種簡單有效，可以降低育種成本，縮短選育周期，亦可進行有目的的多基因聚合，提高育種效率，帶來巨大的社會經濟效益。在分子輔助育種中，如果分子標記能滿足以下三點則可高效準確應用于分子育種(1)該分子標記為共顯性分子標記，如SSR，STS等標記。因為共顯性分子標記可以區分雜合體和純合體，這在下一步的材料雜交選育中可以提供便利，節省選育時間；(2)該分子標記為共分離標記，與目的基因緊密連鎖共分離，因為非緊密連鎖分子標記與目的基因有一定距離，在育種中可能因為分離而導致檢測結果不準確；(3)特異性標記，一些非特異性標記只能區分部分親本，如果擴大選育親本的范圍，則不能將其用于分子輔助選育，而特異性分子則能用于該基因供體親本與其他不含該基因親本的雜交選育，更適用于產業化分子育種。Pigm基因被定位于水稻品種‘谷梅4號’第6號染色體C5483和C0428之間70Kb的片段內，其基因序列尚無相關報道，而有關該基因的分子標記或為顯性標記或為非緊密連鎖標記，如果能建立與抗稻瘟病基因Pigm共分離的特異性分子標記，則對促進Pigm基因在育種中的應用具有重要意義。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種。通過檢測與抗稻瘟病基因Pigm緊密連鎖的分子標記，可以確定水稻親本或雜交后代是否含有高抗稻瘟病基因Pigm，預測水稻植株的稻瘟病抗性，加快抗稻瘟病水稻新品種的選育進度。為了實現本專利技術目的，本專利技術的一種，包括以下步驟I)提取待測水稻的基因組DNA ；2)用選自下表中的一對或多對引物，對水稻基因組DNA進行PCR擴增；權利要求1.水稻抗稻瘟病基因Pigrn的分子標記方法，其特征在于，包括以下步驟 1)提取待測水稻的基因組DNA； 2)用選自下表中的一對或多對引物，對水稻基因組DNA進行PCR擴增； 分子標記I引物名· I引物細則 G1408F ATAGGCAAGTGCAGGTTG IZG1408 -—-----392G1408R GATGGCTAATACTGAACAAGAA G2997F ATCTC ATCC ACGAAACAT ~ZG2997 ———--679 _ G2997R CAGCGACAACTTGAACTA__ G2723F CCACGCTCATCCATTCCT^ ' G2723R ^^GCcACCTCwrCATCCACTA __mm G530IF CAGTG Λ Λ ACGAACGCTAT. G5301 -^--485 j G5301R ATCTCCACAAGGGACACC 3)檢測PCR擴增產物，如果擴增出對應大小的特異性分子標記片段，則表明抗稻瘟病基因Pigm的存在。2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，PCR反應體系以25μ I計為=IOXPCR反應緩沖液 2. 5 μ l,25mM MgCl2 2 μ I, IOmM dNTPO. 5 μ 1，25mM 引物 F 和 R 各 O. 5 μ 1，DNA 20ng,Taq DNA 聚合酶 O. 2 μ I，加 ddH20 補足至 25 μ I。3.根據權利要求I或2所述的方法，其特征在于，PCR反應條件為95°C8分鐘；95°C30秒，55°C 30秒，72°C I分鐘，共35個循環；72°C 10分鐘。4.權利要求1-3任一項所述方法在水稻抗稻瘟病分子育種中的應用。5.用于檢測水稻抗稻瘟病基因Pigm的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括選自以下引物對中的一對或多對引物i ) G1408F 5' -ATAGGCAAGTGCAGGTTG-3'G1408R 5/ -GATGGCTAATACTGAACAAGAA-3'；ii ) G2997F 5' -ATCTCATCCACGAAACAT-3'G2997R 5/ -CAGCGACAACTTGAACTA-3'；iii) G2723F 5/ -CCACGCTCATCCATTCCT-3' G2723R 5/ -TGCCACCTCATCATCCACTA-3';以及 iν ) G5301F 5' -CAGTGAAACGAACGCTAT-3'G5301R 5/ -ATCTCCACAAGGGACACC-3'。6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反應緩沖液中的一種或多種。7.根據權利要求5或6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。全文摘要本專利技術提供了一種，共篩得4個特異性分子標記G1408、G2997、G2723和G5301。利用這4個與抗稻瘟病基因共分離的特異性分子標記，對水稻親本或雜交后代的基因組DNA進行PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳檢測，凡檢測到含有4個特異分子標記中任意一個標記的水稻植株則可作為含高抗稻瘟病Pigm基因的育種材料。該方法操作簡便，檢測結果準確，可滿足高通量分子標記輔助育種的要求。文檔編號C12Q1/68GK102899400SQ20121032587公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月5日 優先權日2012年9月5日專利技術者戴小軍, 楊遠柱, 陳良碧, 胡小淳, 秦鵬, 符辰建 申請人:袁隆平農業高科技股份有限公司, 湖南師范大學, 湖南亞華種業科學研究院本文檔來自技高網...
【技術保護點】
水稻抗稻瘟病基因Pigm的分子標記方法，其特征在于，包括以下步驟：1）提取待測水稻的基因組DNA；2）用選自下表中的一對或多對引物，對水稻基因組DNA進行PCR擴增；3）檢測PCR擴增產物，如果擴增出對應大小的特異性分子標記片段，則表明抗稻瘟病基因Pigm的存在。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：戴小軍，楊遠柱，陳良碧，胡小淳，秦鵬，符辰建，
申請(專利權)人：袁隆平農業高科技股份有限公司，湖南師范大學，湖南亞華種業科學研究院，
類型：發明
國別省市：
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