用于胃癌檢測的標記物制造技術

腫瘤的早期檢測是患有腫瘤（包括胃腫瘤）的患者存活的主要決定因素。GTM基因家族成員在胃腫瘤組織和其它腫瘤組織中過表達，因此其可以用作胃癌和其它類型癌癥的標記物。GTM蛋白質可以從癌細胞中釋放出來，并在血清和/或其它體液中達到足夠高的濃度從而得以檢測它們。因此，用于GTM檢測和定量的方法和檢測試劑盒能夠提供胃癌診斷的有價值的工具。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及癌癥的檢測。具體而言，本專利技術涉及用于癌癥檢測的遺傳標記物和/或蛋白質標記物的用途，并且更加具體而言涉及到遺傳標記物和/或蛋白質標記物用于胃 癌檢測的用途。
技術介紹
癌癥的早期檢測和治療能顯著提高癌癥患者的存活。以胃癌為例，診斷為疾病早期的患者5年存活率為90%，而診斷為疾病晚期的患者5年存活率約為10%。然而，絕大多數胃癌患者通常處于疾病晚期。因此，開發胃癌早期診斷方法能夠改善患者的預后。在包括體液如血液、尿液、腹膜灌洗液和糞便提取物在內的生物標本中的特異性癌癥相關標記物的鑒定能提供有價值的癌癥早期診斷方法，以便早期治療并改善預后。特異性癌癥標記物還能提供用于監測疾病進展的方法，從而能跟蹤外科手術、放射治療和化學治療的功效。然而，對于許多主要癌癥，可利用的標記物缺乏足夠的敏感性和特異性。例如，用于胃癌的最常用標記物cal9_9、ca72_4和癌胚抗原(CEA)僅檢測到大約15-50%的任何階段的胃腫瘤，對于疾病早期的檢測則降至大約2-11%。因此，出現假陰性檢測的頻率非常高，這導致患者和健康護理工作者認為不存在疾病，而事實上，患者可能患有嚴重的需要立即注意的癌癥。而且，使用這些標記物可能對高達1/3的患有良性胃疾病個體給出假陽性信號。專利技術簡述因此，迫切需要更好的檢測癌癥存在的方法。本專利技術方面提供了能夠檢測早期癌癥和降低假陽性和假陰性測試結果頻率的方法、成分和裝置。在某些實施方案中，可以使用分子分析來鑒定與非惡性胃組織相比在胃腫瘤組織中過表達的基因。此分析包括微陣列和定量聚合酶鏈反應(qPCR)方法。癌基因和由那些基因編碼的蛋白質在本文中稱作胃腫瘤標記物(GTM)。需要理解的是術語GTM并不要求標記物僅僅對于胃腫瘤是特異的。而是應當解釋為GTM可以在包括惡性或非惡性腫瘤在內的其他類型腫瘤中表達增加，其中所述腫瘤除此之外包括胃癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、皮膚癌(例如黑素瘤)、肝癌、食道癌、子宮內膜癌和腦癌。無論如何應當這樣理解，即術語GTM不包括在先技術標記物cal9-9、ca72_4和CEA。一些GTM的過表達足以高度可靠地診斷胃癌，而且在其它情況下，兩種或多種GTM的過表達能提供胃癌的可靠診斷。在某些實施方案中，可以用微陣列方法來檢測一種或多種癌相關基因的過表達模式。在其它實施方案中，可以用定量聚合酶鏈反應(qPCR)來鑒定腫瘤或其它生物樣品中過表達標記物的存在。在本文公開的一些GTM檢測的實施方案中，GTM在腫瘤細胞內以高度選擇方式過表達而在非腫瘤細胞即使表達也是很少，從而能夠只檢測一種過表達的GTM來對癌癥進行敏感和精確檢測。在其它實施方案中，可以在樣品中檢測兩種、三種或更多GTM的過表達并從而能提供更大的診斷確定性。所選擇基因編碼的蛋白質能夠被細胞分泌出來或從細胞中穿透出來。這些蛋白質可以單獨或彼此聯合用作診斷胃癌的血清或體液標記物或者作為監測所確定疾病進展的標記物。可以使用本領域已知的方法開展蛋白質標記物的檢測，并且所述方法包括單克隆抗體、多克隆抗血清等的使用。·附圖簡述關于其特定實施方案和圖在本專利技術中進行了描述，其中圖I描述了本專利技術的胃癌標記物及其寡核苷酸序列列表。圖2描述了用微陣列方法進行研究獲得的結果列表。圖3描述了用定量PCR進行研究獲得的結果列表。圖4a_4d描述了用微陣列方法和qPCR方法獲得的倍數的log2數值結果之間的關系，其中對于四種胃癌標記物數據集中于中間的正常值。灰色方塊對應非惡性腫瘤(“正常”)樣品，而黑色三角對應腫瘤樣品。圖4a =ASPN0圖4b =SPPl0圖4c :SPARC。圖4d MMP12。圖5a_5w描述了顯示從定量PCR研究獲得的多種腫瘤標志物的相對頻率對變化倍數的 log2 數值的柱狀圖。圖 5a =ASPN ;圖 5b :CST1、2 和 4 ;圖 5c CSPG2 ;圖 5d IGFBP7 ;圖5e :INHBA ;圖 5f L0XL2 ;圖 5g :LUM ;圖 5h SFRP4 ;圖 5i :SPARC ;圖 5j SPP1 ;圖 5k THBS2 ；圖 51 TIMP1 ;圖 5m adlican ;圖 5n PRS11 ;圖 5o ASAH1 ;圖 5p SFRP2 ;圖 5q :GGH ;圖 5r MMP12 ;圖 5s KLK10 ;圖 5t =LEPREl ;圖 5u :TG ;圖 5v EFEMP2 和圖 5w TGFBL·圖6是顯示表達高于中間正常表達的第95百分位數的腫瘤標記物數量的柱狀圖。結果以qPCR數據為基礎并分別顯示了每一份腫瘤樣品的結果。圖7a_7c描述了與腫瘤標記物CEA基因表述相比，在單個腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品中標記物的相對的log2表達圖。CEA是當前最常用的用于監測胃癌進展的血清標記物。圖8顯示的是圖3的補充列表。圖8總結了用qPCR檢測候選腫瘤標記物的表達水平，但是使用的是配對數據(即腫瘤(“T”)和非惡性腫瘤(“N”)樣品來自同一個體)從而提供T : N比。圖8還包括了圖3中未包括的其它標記物，即麗 2，061 11，丁6 81，？051(5，SERPINB5, SERPINH1。為了比較，也顯示了已經建立的血清標記物基因CEACAM5 (CEA)的表達水平。在29個標記物中有27個具有高于或等于CEA的T N差異中值。此外，與CEA相比，全部29個標記物在配對樣品中具有較高的百分比，其中在腫瘤樣品中標記物的表達超過在正常樣品中的表達。CST1，2，4、ASPN和SFRP4三種標記物在配對的腫瘤樣品和正常樣品之間的表達顯示出100%的差異。本文顯示了這三種標記物的基因序列以及用來檢測它們的引物和探針位置。圖9a_9d描述了 29種胃癌標記物在40位患者的配對樣品中的單個的及中值的T N變化倍數數據。圖IOa-IOad描述了 CEA和本專利技術中其它GTM表達在腫瘤分期和變化倍數的log2數值間的關系圖。圖 IOa adlican ;圖 IOb :ASPN ;圖 IOc CSPG2 ;圖 IOd :CST1，2，4 ;圖 IOe EFEMP2 ;圖 IOf :GGF ;圖 IOg :INHBA ;圖 IOh IGFBP7 ;圖 IOi =KLKlO ;圖 IOj =LEPREl ;圖 IOk :LUM ；圖 101 L0XL2 ；圖 IOm =MMPl2 ；圖 IOn ；TIMP1 ；圖 IOo =ASAHl ；圖 IOp =SPPl ;圖 IOq :SFRP2 ；圖 IOr SFRP4 ；圖 IOs =SPARC ；圖 IOt =PRSSll ；圖 IOu THBS2 圖 IOv TG ;圖 IOw :TGFBI ;圖 IOx =CGRll ;圖 IOy SERPINH1 ;圖 IOz MMP2 ;圖 IOaa PCSK5 ;圖 IOab SERPINB5 ；圖 IOac : TGFBI 和圖 IOad CEA (CEACAM5)。圖I la-1 Iad描述了本專利技術的29種GTM和CEA表達在腫瘤類型(擴散型⑶和腸型(I))和變化倍數的log2數值間的關系圖。圖Ila adlican ;圖lib :ASPN ;圖lie CSPG2 ;圖lid :CST1，2，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
用于檢測胃癌的方法，其包括：（a）準備生物學樣品；和（b）檢測上述樣品中GTM家族成員的過表達。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：P·J·吉爾福德，A·J·霍利約克，
申請(專利權)人：環太平洋生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：