緩釋核酸基質(zhì)組合物制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了用于延長釋放核酸藥劑，一種可生物降解聚合物的組合物。本發(fā)明專利技術(shù)還提供了生產(chǎn)基質(zhì)組合物的方法和用于利用基質(zhì)組合物來提供核酸藥劑的控釋的方法。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)提供了用于延長釋放和/或控釋基于核酸的藥物/藥劑(試劑)的組合物，該組合物包含含有生物相容性聚合物的基于脂質(zhì)的基質(zhì)(脂質(zhì)類基質(zhì))。本專利技術(shù)還提供了制備基質(zhì)組合物(matrix compositions)的方法以及利用基質(zhì)組合物來提供核酸活性劑的控釋的方法。
技術(shù)介紹
治療性核酸基因療法是藥物開發(fā)中的主要研究領域。已認為基因療法是這樣的期望的機制，其用來糾正導致與無法產(chǎn)生某些蛋白質(zhì)有關(guān)的疾病的遺傳缺損并且用來克服獲得性疾病如自身免疫病和癌癥。基因療法可以為許多疾病的治療提供新的預防途徑。然而，基因療法的商業(yè)化的技術(shù)障礙在于，對于多核苷酸的遞送以及緩釋和/或控釋，需要實用、有效和安全的方式。由于在帶負電荷的細胞膜和在多核苷酸上的高負電荷之間的電荷排斥，多核苷酸并不容易滲透細胞膜。因此，多核苷酸具有較差的生物利用度，并且攝取進入細胞，通常〈1%。在動物模型中，基于病毒的載體已成功用來將基因給予期望的組織。在一些情況下，這些途徑已導致治療水平的蛋白質(zhì)的長期(>2年)表達。然而，已廣泛地報告了基于病毒途徑的限度。例如，借助于這些載體的重新給予是不可能的，這是由于相對于病毒蛋白產(chǎn)生的體液免疫反應。除為獲得適當?shù)目芍貜偷妮d體供應所面臨的制造挑戰(zhàn)以外，還存在與病毒載體有關(guān)的顯著的安全問題，尤其是對于那些靶向肝用于基因表達的病毒載體。盡管存在與病毒基因療法有關(guān)的問題，但許多人已認為病毒比非病毒遞送載體更有效。通過寡核酸并利用稱作反義療法、RNA干擾(RNAi)、和酶核酸分子的技術(shù)，可以影響在細胞中特定基因表達的沉默或下調(diào)。反義療法是指通過使用互補DNA或RNA寡核酸來滅活靶DNA或mRNA序列從而抑制基因轉(zhuǎn)錄或翻譯的方法。反義分子可以是單鏈、雙鏈或三鏈螺旋。能夠抑制表達的其它藥劑是例如酶核酸分子如DNA酶和核酶，其能夠特異性地切割感興趣的mRNA轉(zhuǎn)錄物。DNA酶是單鏈脫氧核糖核苷酸，其能夠切割單和雙鏈靶序列。核酶是催化核糖核酸分子，其越來越多地用于基因表達的序列特異性抑制，其中通過編碼感興趣的蛋白質(zhì)的mRNA的切割。RNA干擾是基因表達的轉(zhuǎn)錄后抑制的方法，其中上述基因表達在許多真核生物體中是保守的。它有助于控制哪些基因是主動的以及它們是如何主動的。對于RNA干擾來說，兩種類型的小RNA分子-微RNA (miRNA)和小分子干擾RNA (siRNA)-是重要的。RNA是基因的直接產(chǎn)物，并且這些小RNA可以結(jié)合于特定的其它RNA并增加或降低它們的活性，例如通過防止信使RNA產(chǎn)生蛋白質(zhì)。RNA干擾在防衛(wèi)細胞以抵抗寄生基因(病毒和轉(zhuǎn)座子)方面以及一般地在引導擴生和基因表達方面具有重要作用。雖然RNA干擾效應(其是通過小分子干擾RNA (siRNA)或微RNA加以介導)對人類治療具有潛在的應用，但通常用于寡核苷酸的快速給予的流體力學方法不適用于人類。對于制藥業(yè)來說，基于RNAi的療法的開發(fā)是相對較新的。雖然已克服開發(fā)上述藥物的許多障礙，但RNAi化合物到適當組織并進入細胞的最佳遞送仍然是一種挑戰(zhàn)。核酸的遞送非病毒基因療法的一個問題是實現(xiàn)足夠核酸的遞送和表達以導致有形的、生理有關(guān)的表達。雖然數(shù)年以前已表明，在等滲鹽水中的DNA質(zhì)粒(所謂的“裸’DNA)可以體內(nèi)轉(zhuǎn)染各種細胞，但這樣的未受保護的質(zhì)粒易被酶降解，從而導致在動物模型中攝取的不可重現(xiàn)性以及高度可變的表達和生物反應。在大多數(shù)組織中“裸”質(zhì)粒的非常低的生物利用度還需要給予高劑量的質(zhì)粒以產(chǎn)生藥理反應。因而，非病毒基因遞送的領域已被引向開發(fā)更加有效的合成遞送系統(tǒng)，其能夠增加質(zhì)粒遞送的效率、賦予長期表達并提供儲存穩(wěn)定劑型(如其它藥劑劑型所預期的)。促進細胞攝取DNA的化學方法包括使用DEAE-葡聚糖。然而，這可以導致細胞活力的喪失。磷酸鈣也是常用的化學藥劑，當 和DNA共沉淀時，其將DNA引入細胞。引入DNA的物理方法已變成用來再現(xiàn)地轉(zhuǎn)染細胞的有效方式。直接微注射是一種這樣的方法，其可以將DNA直接遞送到細胞核(Capecchi 1980，Cell, 22，479)。這便于分析單細胞轉(zhuǎn)染子。所謂的“生物導彈”方法利用涂布有DNA的高速顆粒物理上將DNA插入到細胞和/或細胞器中。電穿孔是用來轉(zhuǎn)染DNA的最常用的方法之一。該方法涉及使用高電壓電荷來瞬間通透細胞膜，從而使它們可滲透大分子復合物。然而，由于細胞內(nèi)損傷，用來引入DNA的物理方法確實會導致細胞活力的相當大的喪失。最近一種稱作免疫穿孔的方法已變成用于將核酸引入細胞的公認的技術(shù)(Bildirici et al 2000，Nature, 405，298)。取決于所使用的核酸，可以實現(xiàn)40-50%的轉(zhuǎn)染效率。因而這些方法需要廣泛的優(yōu)化并且還需要昂貴的設備。為了克服核酸(通常質(zhì)粒DNA( “pDNA”)、或siRNAs/微RNA)的降解問題和增強基因轉(zhuǎn)染的效率，已開發(fā)了陽離子縮合劑(如多聚季銨鹽、樹狀聚物、殼聚糖、脂質(zhì)、和肽)來保護核酸，其中通過借助于靜電相互作用來縮合它。然而，與“裸”DNA的轉(zhuǎn)染相比，縮合質(zhì)粒顆粒用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染大量的例如肌細胞并不成功。另外的策略，其包括通過與保護性的、可相互作用的非縮合系統(tǒng)的相互作用來調(diào)節(jié)質(zhì)粒表面電荷和疏水性，已顯示出優(yōu)越于使用“裸"DNA來直接給予實體組織(例如，國際申請公開號WO 96/21470)。封裝核酸的生物可降解微球體也已用于基因遞送。例如，國際申請公開號WO00/78357披露了包括透明質(zhì)酸的基質(zhì)、薄膜、凝膠和水凝膠，其用二肼加以衍生化并交聯(lián)于核酸，以形成緩慢釋放微球體。基于脂質(zhì)的藥物遞送系統(tǒng)在醫(yī)藥科學領域中是眾所周知的。通常它們用來配制具有較差的生物利用度或高毒性或兩者的藥物。在已獲得接受的流行的劑型中，有許多不同類型的脂質(zhì)體，其包括小單層囊泡、多片層囊泡和許多其它類型的脂質(zhì)體；不同類型的乳液，其包括油包水乳液、水包油乳液、水中油包水雙重乳液、亞微米乳液、微乳狀液；膠束和許多其它疏水性藥物載體。這些類型的基于脂質(zhì)的遞送系統(tǒng)可以高度專門用來允許靶向藥物遞送或降低的毒性或增加的代謝穩(wěn)定性等。在數(shù)天、數(shù)周和更長時間內(nèi)的延長釋放并不是通常伴隨基于脂質(zhì)的體內(nèi)藥物遞送系統(tǒng)的分布。對于體外和體內(nèi)基因遞送，由兩親陽離子分子構(gòu)成的脂質(zhì)體是有用的非病毒載體。在理論上，脂質(zhì)的陽離子頭締合于DNA的帶負電荷的核酸主鏈以形成脂質(zhì)核酸復合物。作為基因轉(zhuǎn)移載體，脂質(zhì)核酸復合物具有許多優(yōu)點。不同于病毒載體，脂質(zhì)核酸復合物可以用來轉(zhuǎn)移基本上大小不受限制的表達盒。因為上述復合物缺乏蛋白質(zhì)，所以它們可以誘發(fā)很少免疫原性和炎性反應。另外，它們不能復制或重組以形成傳染劑并且具有低整合頻率。陽離子脂質(zhì)(例如脂質(zhì)體)的使用已變成常用方法，因為它并不具有化學方法所顯示的毒性度。存在許多出版物，通過顯示在體外培養(yǎng)細胞中報道基因的可檢測表達，其令人信服地表明，兩親陽離子脂質(zhì)可以體內(nèi)和體外介導基因遞送。由于脂質(zhì)核酸復合物有時并不和病毒載體同樣有效地實現(xiàn)成功的基因轉(zhuǎn)移，所以很多努力已致力于發(fā)現(xiàn)具有增加的轉(zhuǎn)染效率的陽離子脂質(zhì)(Gao et al. , 1995, Gene Therapy 2,710-722)。許多工作已報道了在動物中以及在人類中兩親陽離子脂質(zhì)核酸復合物用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染(在 Thierry et al.本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：諾姆·埃馬努埃爾，優(yōu)素福·波森菲爾德，
申請(專利權(quán))人：波利皮得有限公司，
類型：
國別省市：