本發(fā)明專利技術(shù)在水泡性口炎病毒的包膜蛋白G（VSV?G）基因的特定位點引入琥珀密碼子TAG，利用正交的氨酰tRNA合成酶-tRNA將具有光交聯(lián)性質(zhì)的非天然氨基酸DiZPK定點突變到VSV?G的特定位點。在病毒與宿主細(xì)胞相互作用過程中，用365nm紫外光引發(fā)DiZPK的光交聯(lián)反應(yīng)，在VSV?G與相互作用蛋白間形成共價鍵，避免了相互作用的解離，為病毒與宿主間蛋白相互作用的研究提供有力的手段。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
專利技術(shù)涉及在水泡性口炎病毒的包膜蛋白G (VSV G)基因的特定位點引入琥珀密碼子TAG，利用正交的氨酰tRNA合成酶-tRNA將具有光交聯(lián)性質(zhì)的非天然氨基酸DiZPK定點突變到VSV G的特定位點。在病毒與宿主細(xì)胞相互作用過程中，用365nm紫外光引發(fā)DiZPK的光交聯(lián)反應(yīng)，在VSV G與相互作用蛋白間形成共價鍵，避免了相互作用的解離，為病毒與宿主間蛋白相互作用的研究提供有力的手段。
技術(shù)介紹
水泡件口炎病毒及其臘蛋白VSVG水泡性口炎病毒(VSV)是彈狀病毒科(Rhabdoviridae)的一種，其是單負(fù)鏈RNA包 膜病毒，基因組大小在11，000-12，000個堿基；編碼5個蛋白質(zhì)分子L蛋白，磷酸蛋白，M蛋白，N蛋白，G蛋白；這五種蛋白的組成VSV結(jié)構(gòu)如圖I所示。其中G蛋白(VSV G)被命名為III型病毒融合蛋白，在病毒表面形成釘狀三聚體結(jié)構(gòu)，介導(dǎo)病毒與宿主細(xì)胞受體的識別和宿主細(xì)胞對病毒的內(nèi)吞，以及病毒包膜與宿主細(xì)胞膜的融合，在VSV的感染過程中起到首要作用。VSV G (Indiana)共有495個氨基酸殘基，其中N端的446個氨基酸殘基在病毒膜外，該部分也是病毒抗體的識別區(qū)域。編碼VSVG基因的序列AAGTTCACCATAGTTTTTCCACACAACCAAAAAGGAAACTGGAAAAATGTTCCTTCTAATTACCATTATTGCCCGTCAAGCTCAGATTTAAATTGGCATAATGACTTAATAGGCACAGCCTTACAAGTCAAAATGCCCAAGAGTCACAAGGCTATTCAAGCAGACGGTTGGATGTGTCATGCTTCCAAATGGGTCACTACTTGTGATTTCCGCTGGTATGGACCGAAGTATATAACACATTCCATCCGATCCTTCACTCCATCTGTAGAACAATGCAAGGAAAGCATTGAACAAACGAAACAAGGAACTTGGCTGAATCCAGGCTTCCCTCCTCAAAGTTGTGGATATGCAACTGTGACGGATGCCGAAGCAGTGATTGTCCAGGTGACTCCTCACCATGTGCTGGTTGATGAATACACAGGAGAATGGGTTGATTCACAGTTCATCAACGGAAAATGCAGCAATTACATATGCCCCACTGTCCATAACTCTACAACCTGGCATTCTGACTATAAGGTCAAAGGGCTATGTGATTCTAACCTCATTTCCATGGACATCACCTTCTTCTCAGAGGACGGAGAGCTATCATCCCTGGGAAAGGAGGGCACAGGGTTCAGAAGTAACTACTTTGCTTATGAAACTGGAGGCAAGGCCTGCAAAATGCAATACTGCAAGCATTGGGGAGTCAGACTCCCATCAGGTGTCTGGTTCGAGATGGCTGATAAGGATCTCTTTGCTGCAGCCAGATTCCCTGAATGCCCAGAAGGGTCAAGTATCTCTGCTCCATCTCAGACCTCAGTGGATGTAAGTCTAATTCAGGACGTTGAGAGGATCTTGGATTATTCCCTCTGCCAAGAAACCTGGAGCAAAATCAGAGCGGGTCTTCCAATCTCTCCAGTGGATCTCAGCTATCTTGCTCCTAAAAACCCAGGAACCGGTCCTGCTTTCACCATAATCAATGGTACCCTAAAATACTTTGAGACCAGATACATCAGAGTCGATATTGCTGCTCCAATCCTCTCAAGAATGGTCGGAATGATCAGTGGAACTACCACAGAAAGGGAACTGTGGGATGACTGGGCACCATATGAAGACGTGGAAATTGGACCCAATGGAGTTCTGAGGACCAGTTCAGGATATAAGTTTCCTTTATACATGATTGGACATGGTATGTTGGACTCCGATCTTCATCTTAGCTCAAAGGCTCAGGTGTTCGAACATCCTCACATTCAAGACGCTGCTTCGCAACTTCCTGATGATGAGAGTTTATTTTTTGGTGATACTGGGCTATCCAAAAATCCAATCGAGCTTGTAGAAGGTTGGTTCAGTAGTTGGAAAAGCTCTATTGCCTCTTTTTTCTTTATCATAGGGTTAATCATTGGACTATTCTTGGTTCTCCGAGTTGGTATCCATCTTTGCATTAAATTAAAGCACACCAAGAAAAGACAGATTTATACAGACATAGAGATGAACCGACTTGGAAAGTGA (SEQ ID NO :1)VSVG蛋白氨基酸序列MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETffSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELffDDffAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK (SEQ ID NO :2)病毒蛋白相互作用病毒是人類面臨的重大威脅之一，在病毒的進(jìn)化過程中，不斷產(chǎn)生基因的變異和 蛋白的改變，產(chǎn)生新的病毒亞型，從而獲得在動物和人之間傳播的能力，進(jìn)而可能引發(fā)嚴(yán)重全球性傳染病。人類對病毒研究和抗病毒的實驗從未停止，病毒與宿主間蛋白相互作用是抗病毒藥物研究在重要靶點，目前，用于病毒與宿主間蛋白相互作用的研究方法大致有cDNA文庫技術(shù)；噬菌體展示技術(shù)；酵母雙雜交技術(shù)；免疫沉淀和免疫共沉淀技術(shù)；病毒蛋白鋪覆蛋白免疫印跡技術(shù)等。而以上的研究的蛋白間相互作用是以非共價鍵結(jié)合的形式存在的，例如鹽鍵、疏水作用等，在蛋白質(zhì)發(fā)揮生物功能，特別是在受體識別與信號傳遞過程中，蛋白質(zhì)間的結(jié)合是弱結(jié)合并且動態(tài)變化的，因此用傳統(tǒng)的蛋白間相互作用的研究方法，往往無法解決蛋白間瞬時作用和弱作用的難題，病毒與宿主間蛋白相互作用正是難題之O密碼子擴(kuò)展技術(shù)Lei Wang等人開發(fā)了基因密碼子擴(kuò)展技術(shù)，實現(xiàn)了在活細(xì)胞內(nèi)位點特異性地將非天然氨基酸插入到蛋白質(zhì)分子中。基因密碼子擴(kuò)展技術(shù)體系中包含三個要素氨酰本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
定點突變的水泡性口炎病毒的VSV？G蛋白，其在特定位點的1個氨基酸被突變?yōu)榉翘烊话被幔龇翘烊话被釣樗镜腄iZPK；所述特定位點選自：示于SEQ？ID？NO：1的序列的第I37位，Q42位，Y77位，Y116位，D121位，V161位，Y174位，K242位，R249位，I339位，R342位，M346位，N20位，K172位，D185位，P362位中的1個位點。FDA00001805227400011.jpg
【技術(shù)特征摘要】
2011.06.23 CN 201110171750.11.定點突變的水泡性口炎病毒的VSVG蛋白，其在特定位點的I個氨基酸被突變?yōu)榉翘烊话被幔龇翘烊话被釣?.定點突變的VSVG蛋白，其與示于SEQ ID NO :I的序列的區(qū)別在于在SEQ ID NO I所示的序列的第N位的氨基酸被突變?yōu)長ys-diazirine，所述突變氨基酸與SEQ ID NO : I所示的序列的連接方式如下式所示3.定點突變的VSVG蛋白，其與示于SEQ ID NO :1的序列的區(qū)別在于在SEQ ID NO:I所示的序列的第N位的氨基酸被突變?yōu)镈iZPK，所述突變氨基酸與SEQ ID NO :1所示的序列的連接方式如下式所示4.編碼突變的VSVG蛋白的核酸分子，所述核酸分子與編碼SEQID NO :I的核酸分子SEQ ID NO 2的區(qū)別在于，其中編碼SEQ ID N O 1的第137位，Q42位，Y77位，Yl 16位，D121 位，V161 位，Y174 位，K242 位，R249 位，1339 位，R342 位，M346 位，N20 位，K172 位，D185位，P362位的氨基酸中的一個氨基酸的密碼子被突變?yōu)門AG。5.核酸載體，其可操作地連接有權(quán)利要求5的核酸分子。6.權(quán)利要求5的核酸載體，其還可操作地連接有標(biāo)簽序列。7.權(quán)利要求6的核酸載體，其中的標(biāo)簽序列是Flag標(biāo)簽序列。8.宿主細(xì)胞,其中含有權(quán)利要求5- 7中任一項的核酸載體。9.權(quán)利要求8的宿主細(xì)胞，其中還含有表達(dá)甲烷球菌的tRNA(tRNAPyl)和吡咯賴氨酰-tRNA合成酶(tRNAPyl)的質(zhì)粒。10.權(quán)利要求8或9的宿主細(xì)胞，其為真核...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周德敏，鄭永祥，趙傳科，張傳領(lǐng)，俞飛，肖蘇龍，張禮和，
申請(專利權(quán))人：北京大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。