一株具備植物促生作用的耐鹽芽孢桿菌制造技術(shù)

本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)屬于微生物應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一株具備植物促生作用的耐鹽芽孢桿菌。具體的技術(shù)方案為：提供了一株鹽生芽孢桿菌，于2018年7月30日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCC?No.16172。該菌不僅可以分泌ACC脫氨酶和吲哚乙酸，從而促進(jìn)植物生長(zhǎng)，而且還具有優(yōu)異的解鉀、解磷作用，更重要的是，該菌還具有較強(qiáng)地耐鹽耐高pH能力，可以實(shí)際應(yīng)用到鹽堿地等環(huán)境惡劣處的土壤改良上。

A Salt-tolerant Bacillus with Plant Growth Promotion

The invention belongs to the field of microbial application, in particular to a salt-tolerant bacillus with plant growth promoting effect. The specific technical scheme is as follows: A Bacillus halophytes strain is provided and stored in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation and Management Committee on July 30, 2018. The storage number is CGMCC No. 16172. The bacteria can not only secrete ACC deaminase and indole acetic acid, thus promoting plant growth, but also have excellent potassium and phosphorus solubilization. More importantly, the bacteria also have strong salt tolerance and high pH tolerance, which can be applied to soil improvement in saline-alkali soil and other adverse environments.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一株具備植物促生作用的耐鹽芽孢桿菌
本專(zhuān)利技術(shù)屬于微生物應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一株具備植物促生作用的耐鹽芽孢桿菌。
技術(shù)介紹
土壤鹽漬化是近年來(lái)阻礙農(nóng)業(yè)發(fā)展的一大重要因素。鹽堿地是指一個(gè)種類(lèi)鹽所聚合的一個(gè)地理區(qū)域，該地理區(qū)域的鹽分含量較高，而這些鹽分會(huì)影響并且抑制該區(qū)域的植物以及農(nóng)作物的正常生長(zhǎng)以及新陳代謝。因此，鹽堿地的改良成為迫在眉睫的問(wèn)題。鹽堿地改良的現(xiàn)行方法包括物理法、化學(xué)法以及生物法。生物改良法主要包括植物改良和微生物改良，其中微生物改良法因其成本低、操作簡(jiǎn)單以及可持續(xù)性，成為如今的研究熱點(diǎn)。其中，植物促生菌的概念被頻繁提及。植物根際促生菌(plantgrowthpromotingrhizobacteria，PGPR)是指能夠促進(jìn)植物對(duì)礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的吸收和利用，或者產(chǎn)生能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)的代謝物，甚至抑制有害微生物的，能夠直接或間接促進(jìn)植物生長(zhǎng)的根際有益細(xì)菌。通過(guò)篩選鹽堿地原生植被根際土壤中的耐鹽根際促生菌，將其利用于要改良的鹽漬土中，可以有效的改良鹽堿土，并且對(duì)該區(qū)域的植物以及農(nóng)作物的生長(zhǎng)以及新陳代謝起到促進(jìn)的作用。植物促生菌是通過(guò)直接以及間接的作用來(lái)達(dá)到植物促生的目的。其中直接的促生作用是指通過(guò)合成一些可供植物利用或者有利于植物從外界吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括合成植物生長(zhǎng)激素(如吲哚乙酸)、溶解土壤中的難溶磷以及難溶鉀、生物固氮以及合成一些植物生長(zhǎng)過(guò)程中所需要的一些酶(如ACC脫氨酶)等；間接作用是指對(duì)植物生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)起到抑制作用的病原微生物的生物防治作用，比如產(chǎn)生抗生素、分泌鐵載體、競(jìng)爭(zhēng)生態(tài)位以及誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性等。因此在鹽堿地改良中，應(yīng)用一些具備植物促生作用的耐鹽菌，將其與有機(jī)質(zhì)以及改性后呈酸性的生物炭相結(jié)合，可以在為土壤排鹽的同時(shí)，起到調(diào)節(jié)以及促進(jìn)植物生長(zhǎng)的作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供一株具備植物促生作用的耐鹽芽孢桿菌。為實(shí)現(xiàn)上述專(zhuān)利技術(shù)目的，本專(zhuān)利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是：一株鹽生芽孢桿菌，于2018年7月30日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCCNo.16172。相應(yīng)的，一株鹽生芽孢桿菌，其16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示。相應(yīng)的，一種獲得所述鹽生芽孢桿菌的方法，包括如下步驟：(1)制備根基土壤原液：無(wú)菌環(huán)境下，以水為介質(zhì)，使用鹽堿地原生植被根際表面附著的土壤制備懸液，即得根基土壤原液；(2)將所述根基土壤原液涂布到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，30℃恒溫培養(yǎng)1～4天，即得所述鹽生芽孢桿菌。相應(yīng)的，所述的鹽生芽孢桿菌在促進(jìn)植物生長(zhǎng)中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述應(yīng)用中，所述鹽生芽孢桿菌的菌濃度為104～105CFU/ml。優(yōu)選的，所述應(yīng)用的溫度為4～37℃，所述應(yīng)用的pH為5.0～8.0。優(yōu)選的，所述應(yīng)用的溫度為28℃，所述應(yīng)用的pH為8.0。相應(yīng)的，所述的鹽生芽孢桿菌在改良鹽堿地中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述應(yīng)用中鹽堿地的可溶性總鹽濃度為0～200g/L。優(yōu)選的，所述可溶性總鹽濃度為70g/L。本專(zhuān)利技術(shù)具有以下有益效果：本專(zhuān)利技術(shù)提供了一種新的耐鹽芽孢桿菌，該菌不僅可以分泌ACC脫氨酶和IAA，從而促進(jìn)植物生長(zhǎng)，而且還具有優(yōu)異的解鉀、解磷作用，更重要的是，該菌還具有較強(qiáng)地耐鹽耐高pH能力，可以實(shí)際應(yīng)用到鹽堿地等環(huán)境惡劣處的土壤改良上。附圖說(shuō)明圖1為菌株YZX8的電鏡掃描示意圖；圖2為菌株YZX8的菌落形態(tài)示意圖；圖3為菌株YZX8生長(zhǎng)曲線(xiàn)圖；圖4為菌株YZX8的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)示意圖；圖5為α-丁酮酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖；圖6為牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖；圖7為IAA標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖；圖8為磷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖；圖9為解磷效果展示中溶液的速效磷含量變化示意圖；圖10為鉀標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖；圖11為不同pH對(duì)菌株YZX8生長(zhǎng)情況影響示意圖；圖12為不同NaCl濃度對(duì)菌株YZX8生長(zhǎng)情況影響示意圖；圖13為菌株YZX8的菌濃度為104個(gè)/ml時(shí)，培養(yǎng)三天后小黃白的平均的根長(zhǎng)和莖長(zhǎng)示意圖；圖14為菌株YZX8的菌濃度為105個(gè)/ml時(shí)，培養(yǎng)三天后小黃白的平均的根長(zhǎng)和莖長(zhǎng)示意圖；圖15為菌株YZX8的不同菌濃度對(duì)小黃白平均鮮重影響示意圖；圖16為菌株YZX8的不同菌濃度對(duì)小黃白平均種子萌發(fā)率影響示意圖；圖17為菌株YZX8菌濃度為104CFU/ml時(shí)小黃白萌芽示意圖。具體實(shí)施方式本文涉及的培養(yǎng)基和試劑如下：1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL，pH＝7.0，121℃滅菌20min。2、DF鹽培養(yǎng)基：KH2PO44g，Na2HPO46g，MgSO4·7H2O0.2g，(NH4)2SO42g，F(xiàn)eSO4·7H2O1mg，硼酸10μg，ZnSO470μg，CuSO450μg，MoO310μg，葡萄糖2g，葡萄糖酸2g，檸檬酸2g，去離子水1L，pH7.2，115℃，滅菌30min。3、ADF鹽培養(yǎng)基：把ACC溶于超純水，用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾滅菌，加入到不含有(NH4)2SO4且預(yù)先滅菌的DF鹽培養(yǎng)基中，pH＝7.2。ACC添加的終濃度為3.0mmol/L。4、CCM液體培養(yǎng)基：MgSO4·7H2O0.2g；KH2PO40.2g；甘露醇5.0g；K2HPO40.8g；CaCl2·2H2O0.06g；蔗糖5.0g；NaMoO4·2H2O2.5mg；酵母粉0.1g；乳酸0.5mL；NaCl0.1g；1.64％乙二胺四乙酸鈉鐵(Na·Fe·EDTA)4mL；總體積1000mL(蒸餾水補(bǔ)足)；pH＝7.0。注：滅菌時(shí)將MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O和Na·Fe·EDTA分開(kāi)滅菌，否則會(huì)產(chǎn)生沉淀。5、解磷篩選培養(yǎng)基：葡萄糖10g，NaCl0.3g，KCl0.3g，(NH4)2SO40.5g，MgSO4·7H2O0.3g，MnSO4·4H2O0.03g，F(xiàn)eSO4·7H2O0.03g，Ca3(PO4)25g，去離子水1L，pH7.0～7.2。6、解鉀篩選培養(yǎng)基：蔗糖5g，Na2HPO42g，(NH4)2SO41g，MgSO4·7H2O0.5g，F(xiàn)eCl30.005g，CaCO30.1g，鉀長(zhǎng)石粉5g，去離子水1L，pH7.0～7.2。7、鉬銻抗貯存劑：(1)A液：5g/L酒石酸氧銻鉀溶液：取酒石酸氧銻鉀(K(SbO)C4H4O6)0.5g,溶解于100ml水中。(2)B液：鉬酸銨-硫酸溶液：稱(chēng)取鉬酸銨10g，溶于450ml水中，緩慢加入153ml濃硫酸，邊加邊攪拌。再將上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L.充分搖勻，貯于棕色瓶中，即為鉬銻抗貯存液。8、鉬銻抗混合顯色劑(速效磷測(cè)定試劑)：稱(chēng)取1.50g抗壞血酸(左旋，旋光度+12～+22，分析純)溶于100ml鉬銻抗貯存液中，混勻，此試劑有效期為24h，隨配隨用。9、鉀標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作試劑：1mol/L中性NH4OAc(pH＝7)溶液。稱(chēng)取化學(xué)純CH3COONH477.09g加水稀釋?zhuān)盟峄騈H4OH調(diào)至pH＝7.0，然后稀釋至1L，即得。10、Salkowski試劑：準(zhǔn)確稱(chēng)取FeCl34.5g，溶于10.8MH2SO4中，冷卻后定容至1L，即得。實(shí)施例一：菌株的分離和鑒定1、菌株分離：將從山東寧夏等地區(qū)采集的鹽堿地原生植被(鹽角草、芒草、玉米等)的根際進(jìn)行處理：小心抖落根系表面土壤，將根際表面緊緊附著的土壤用滅過(guò)菌的軟毛刷輕本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一株鹽生芽孢桿菌，其特征在于：于2018年7月30日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCC?No.16172。

【技術(shù)特征摘要】
1.一株鹽生芽孢桿菌，其特征在于：于2018年7月30日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCCNo.16172。2.一株鹽生芽孢桿菌，其特征在于：其16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示。3.一種獲得權(quán)利要求1或2所述鹽生芽孢桿菌的方法，其特征在于：包括如下步驟：(1)制備根基土壤原液：無(wú)菌環(huán)境下，以水為介質(zhì)，使用鹽堿地原生植被根際表面附著的土壤制備懸液，即得根基土壤原液；(2)將所述根基土壤原液涂布到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，30℃恒溫培養(yǎng)1～4天，即得所述鹽生芽孢桿菌。4.權(quán)利要求1或2所述的鹽生芽孢桿菌在促進(jìn)植物生長(zhǎng)中的應(yīng)用。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述鹽生芽孢桿菌在促進(jìn)植物生長(zhǎng)中的應(yīng)...

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李東，孫曉瑩，劉曉風(fēng)，陳意超，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：四川,51