樺木酸作為機體鎘清除劑的應用制造技術

本發明專利技術涉及樺木酸的新用途，尤其涉及樺木酸在制備清除機體內鎘的藥物、保健品及食品中的應用。本發明專利技術通過體外及體內實驗證實樺木酸對正常細胞及小鼠沒有明顯的毒副作用，能減少小鼠肝、腎和睪丸中的鎘殘留量，能促進尿液中鎘的排出；能減輕鎘造成的小鼠肝腎和睪丸組織損傷。樺木酸具備治療機體鎘積累的作用，安全有效，優于傳統的治療藥物，從而擴寬了其應用范圍，也為治療重金屬鎘中毒提供了新途徑。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及樺木酸的新用途，具體涉及樺木酸在制備清除機體內鎘的藥物中的應用。
技術介紹
鎘是銀白色有光澤的金屬，鎘不是人體的必需元素。人體內的鎘是出生后從外界環境中吸取的﹐普通人鎘接觸主要有四個途徑：空氣，水，食物和煙草。80%的食物鎘來自于谷類和蔬菜，這些食物源于富集鎘的土壤；另外由于煙草能夠選擇性地從土壤中吸收鎘，吸煙者血液中血鎘的濃度明顯大于不吸煙者。鎘進入體內以后，由于其10-30年的生物半衰期以及極低的體外排出率，因此對人體產生很大的毒性。體內的鎘約50%富集在肝和腎里，對肝和腎的損害極大，表現為尿中含大量低分子量蛋白，由于腎小管功能受損，造成鈣、磷和維生素D代謝障礙，進而造成骨質軟化和疏松，嚴重者極易發生病理性骨折；其余分布于肺﹑胰﹑甲狀腺﹑睪丸﹑毛發等處。相關的流行病學研究，提示慢性鎘中毒患者可能出現神經系統、免疫系統、生殖系統損害等。鎘污染的現實危害，在于目前還沒有特效的解毒藥物可供使用。目前報道過的作用于鎘中毒的藥物主要包括：1）傳統的驅鎘藥物：氨基羧酸類化合物EDTA，巰基類化合物和DDTC類化合物，此類藥物藥物選擇性不高，長時間使用有較強的腦、腎毒副作用。2）維生素B和維生素C和E，通過抗氧化起一定的保護作用，不能促鎘排出。3）鋅、鐵、鈣和硒等營養素防治，與特定蛋白結合來拮抗鎘的毒性，長期攝入鈣會有精神副作用，鋅過量會導致免疫能力傷害，鐵作用于轉運蛋白，受蛋白量的限制；此方式拮抗鎘的效率有限，并且并不能減少組織內鎘的殘留量。樺木酸（betulinic acid，BA）是一種萃取自白樺樹的五環三萜類化合物，生物效應特別廣泛，目前研究的熱點主要集中在樺木酸的抗腫瘤、抗艾滋、抗病毒、抗炎癥、抗瘧原蟲，特別是在抗腫瘤方向。實驗已經證實樺木酸對腫瘤細胞有很強的殺傷作用而對正常細胞幾乎沒有副作用。目前，尚未見關于樺木酸用于治療重金屬鎘中毒的報道。
技術實現思路
為了解決現有技術中存在的問題，本專利技術的第一個目的是提供樺木酸在制備清除機體內鎘的藥物中的應用。本專利技術的第二個目的是提供樺木酸在制備清除機體內鎘的保健品中的應用。本專利技術的第三個目的是提供樺木酸在制備清除機體內鎘的食品中的應用。以上目的通過如下實驗加以驗證：1）體外實驗：用樺木酸和氯化鎘聯合處理三種正常的肝、腎和睪丸細胞，通過CCK-8細胞增殖實驗和流式細胞儀檢測細胞凋亡情況，確定最佳給藥時間和給藥濃度；同時觀察到樺木酸能在一定程度上拮抗氯化鎘引起的細胞凋亡。2）體內實驗：（1）昆明小鼠分成四組，一組空白對照組，其他三組分別為3mg/kg,10mg/kg和30mg/kg三個劑量樺木酸組，灌胃。觀測體重變化，10天后處死小鼠，分析數據，檢測HE染色，確定樺木酸在ABC三個劑量對小鼠的毒副作用。（2）昆明小鼠分成五組，空白對照組，氯化鎘模型組和三組不同劑量樺木酸預處理組，氯化鎘采取1 mg/kg濃度腹腔注射。每天提前1小時進行灌胃處理再腹腔注射，觀測體重變化，連續10天，然后饑餓24小時，處死小鼠。HE染色，石墨原子吸收光譜，分析數據，確定樺木酸預處理對小鼠鎘中毒的保護效果。結論：樺木酸在3mg/kg，10mg/kg和30mg/kg三個劑量對小鼠沒有明顯的組織毒副作用，僅輕微減輕小鼠體重；樺木酸能減少小鼠肝、腎和睪丸中的鎘殘留量，能促進尿液中鎘的排出；能減輕鎘造成的小鼠肝腎和睪丸組織損傷。本專利技術的積極進步效果在于：首次發現了樺木酸對機體鎘積累所致的組織損傷的保護作用；在治療機體鎘積累時，無組織毒副作用，能減少組織的鎘殘留，減少鎘所致的組織損傷，安全有效，優于傳統的治療藥物，從而擴寬了其應用范圍，也為治療重金屬鎘中毒提供了新途徑。附圖說明圖1不同劑量氯化鎘對TM3、293T和LO-2細胞增殖的影響圖；圖2不同劑量樺木酸對TM3、293T和LO-2細胞增殖的影響圖；圖3樺木酸、氯化鎘及樺木酸與氯化鎘同時作用對細胞凋亡的影響圖；圖4不同劑量樺木酸（BA）對小鼠體重和臟器系數的影響圖；A為不同劑量的樺木酸對小鼠體重的影響；B為不同劑量的樺木酸對小鼠睪丸臟器系數的影響；C為不同劑量的樺木酸對小鼠肝臟臟器系數的影響；D為不同劑量的樺木酸對小鼠腎臟臟器系數的影響；圖5不同劑量樺木酸對小鼠肝腎生化指標的影響圖；A為不同劑量的樺木酸對小鼠谷草轉氨酶的影響；B為不同劑量的樺木酸對小鼠谷丙轉氨酶的影響；C為不同劑量的樺木酸對小鼠尿素氮的影響；圖6不同劑量樺木酸對小鼠肝組織病理變化的影響；A為空白對照；B為3 mg/kg BA組；C為10 mg/kg BA組；D為30 mg/kg BA組；圖7不同劑量樺木酸對小鼠腎組織病理變化的影響；A為空白對照；B為3 mg/kg BA組；C為10 mg/kg BA組；D為30 mg/kg BA組；圖8不同劑量樺木酸對小鼠睪丸組織病理變化的影響；A為空白對照；B為3 mg/kg BA組；C為10 mg/kg BA組；D為30 mg/kg BA組；圖9不同劑量樺木酸預處理對氯化鎘中毒小鼠體重與臟器系數的影響圖；A不同劑量的樺木酸預處理對鎘中毒小鼠的體重的影響B不同劑量的樺木酸預處理對鎘中毒小鼠肝臟臟器系數的影響C不同劑量的樺木酸預處理對鎘中毒小鼠腎臟臟器系數的影響D不同劑量的樺木酸預處理后小鼠睪丸的直接形態大小E不同劑量的樺木酸預處理對鎘中毒小鼠睪丸臟器系數的影響圖10不同劑量樺木酸預處理對鎘中毒小鼠肝腎睪丸組織中鎘殘留量與尿液中鎘含量的影響圖；A小鼠肝臟中鎘殘留量；C小鼠睪丸中鎘殘留量；B小鼠腎臟中鎘殘留量；D小鼠尿液中鎘含量；圖11不同劑量樺木酸預處理對鎘中毒小鼠肝組織病理變化的影響圖；圖12不同劑量樺木酸預處理對鎘中毒小鼠腎組織病理變化的影響圖；圖13不同劑量樺木酸預處理對鎘中毒小鼠睪丸組織病理變化的影響圖；圖14不同劑量樺木酸預處理對鎘中毒小鼠肝腎生化指標的影響圖。具體實施方式通過以下詳細說明結合附圖可以進一步理解本專利技術的特點和優點。所提供的實施例僅是對本專利技術方法的說明，而不以任何方式限制本專利技術揭示的其余內容。本專利技術中，所述的樺木酸為植物白樺樹中提取的三萜類化合物，市售可得。本實驗中，昆明小鼠皆來自湖北省疾病控制中心的潔凈鼠。293T：正常腎上皮細胞、LO-2：正常肝細胞、TM3：正常睪丸間質細胞，均來自武漢大學中國典型培養物保藏中心。樺木酸溶解于玉米油中灌胃處理，氯化鎘進行腹腔注射。樺木酸分為低中高三個劑量，氯化鎘采取低劑量注射。除特殊說明外，本專利技術所用試劑和原料均市售可得?！緦嵤├?】樺木酸對氯化鎘誘導正常細胞凋亡的影響通過CCK-8細胞增殖實驗從時間梯度和濃度梯度檢測氯化鎘對三種正常細胞TM3、293T和LO-2細胞的活性抑制，確定急性低劑量中毒的最佳給藥劑量和作用時間，然后用這個時間梯度來選擇最佳給藥樺木酸濃度，再用樺木酸和氯化鎘聯合作用于細胞，流式檢測。1、不同劑量氯化鎘對TM3、293T和LO-2細胞增殖的影響三種正常細胞TM3、293T和LO-2細胞與不同濃度氯化鎘溶液分別孵育12h、24h和48h后CCK-8檢測細胞活性，所得結果如圖1。從圖中可以看到，24小時，氯化鎘在10 μm/l對三種正常細胞產生了明顯的活性抑制，48小時時這種抑制更加明顯，由于本專利技術偏重于急本文檔來自技高網...

【技術保護點】
樺木酸在制備清除機體內鎘的藥物中的應用。

【技術特征摘要】
1.樺木酸在制備清除機體內鎘的藥物中的應用。2.樺木酸在制備清除機...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊芳，樊榮，羅大級，胡鵬超，王瑩，
申請(專利權)人：武漢大學，
類型：發明
國別省市：湖北;42