本發(fā)明專利技術(shù)公開了大蒜素抗菌效果的檢測(cè)方法，包括以下步驟：所需培養(yǎng)基的準(zhǔn)備，標(biāo)準(zhǔn)品制備，樣品制備，接種培養(yǎng)過程，指示劑顯色過程，本發(fā)明專利技術(shù)是一種高效快速的檢測(cè)方法，具有較高的經(jīng)濟(jì)實(shí)用價(jià)值。本發(fā)明專利技術(shù)為飼料添加劑中大蒜素的選擇提供了有力依據(jù)，在飼料生產(chǎn)和檢測(cè)中得到了廣泛的應(yīng)用。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)設(shè)及微生物檢測(cè)
，尤其是設(shè)及到一種 和最低抑菌濃度的確定。
技術(shù)介紹
大蒜素是從大蒜的球形鱗莖中提取的揮發(fā)性的油狀物質(zhì)，有強(qiáng)烈的刺激味和辛辣 味。大蒜具有很強(qiáng)的抑菌和殺菌作用，對(duì)多種致病菌，如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等 均有明顯抑制和殺滅作用，大蒜還含有豐富的有機(jī)營養(yǎng)成分，具有改善飼料適口性、促進(jìn) 食欲、健胃殺菌、驅(qū)蟲保健、促進(jìn)生長、改善動(dòng)物產(chǎn)品肉質(zhì)等特點(diǎn)。此外，大蒜在動(dòng)物體內(nèi)無 殘留，無耐藥性，無致崎、致癌、致突變等不良反應(yīng)。因此，大蒜素是飼料生產(chǎn)中抗菌素的 理想替代品，且使用劑量較低，價(jià)格較低，因此在飼料生產(chǎn)中得到了廣泛的應(yīng)用。飼料微生 物檢測(cè)方法是飼料質(zhì)量管理必不可少的重要組成部分，一般是貫徹"預(yù)防為主"的方針，通 過該檢測(cè)可W有效的保障飼料的衛(wèi)生安全，是權(quán)衡飼料質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。通過微生物 檢測(cè)，能夠?qū)︼暳系募?xì)菌污染程度做出正確評(píng)價(jià)，為各項(xiàng)衛(wèi)生管理提供科學(xué)依據(jù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種。 1.材料 所需培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂、稀松的營養(yǎng)瓊脂(含0. 15%瓊脂的營肉湯)、0. 9%氯 化鋼溶液。對(duì)照品：大蒜素標(biāo)準(zhǔn)品。樣品：大蒜素粉末。 菌種：大腸埃希菌。 試劑：0. 1%濃度刃天青指示劑、麥?zhǔn)媳葷峁堋000引用具：滅菌的小試管，96孔板，5ml、2ml、1ml移液槍，滅菌的5ml、2ml、1ml槍頭。 2.儀器設(shè)備 電子天平，冰箱，37°C培養(yǎng)箱，生物安全柜，真空脈動(dòng)滅菌柜。 3.實(shí)驗(yàn)方法 用接種環(huán)薩取大腸埃希菌菌種在營養(yǎng)瓊脂平板劃線，在37Γ培養(yǎng)18~24h，刮取少量 培養(yǎng)物于0. 9%氯化鋼溶液中，搖勻，與麥?zhǔn)媳葷峁軐?duì)比，稀釋，直至濁度與0. 5管號(hào)濁度(麥 氏比濁管）一致。 吸取100μL上述稀釋液接種至10ml營養(yǎng)肉湯中，37°C培養(yǎng)1她，接種50μL培養(yǎng) 肉湯至10ml稀松的營養(yǎng)瓊脂中作為大腸埃希菌的起始培養(yǎng)物。 取大蒜素適量，加稀松的營養(yǎng)瓊脂制成濃度為0. 5%的供試品溶液，依次稀釋，濃 度分別為 0. 25%、0. 125%、0. 0625%、0. 03125%、0. 016%、0. 008〇/〇。 分別取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和各個(gè)濃度100μL供試品溶液，分別混 勻，作為供試液。[001引取850 μ L起始接種物，50 μ L指示劑，和100 μ L 20mg/ml的蒜素溶液，混勻，作為 陽性對(duì)照。 取850μL起始接種物，50μL指示劑，和100μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，混勻，作為陰性 對(duì)照。 取200μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，100μL指示劑，混勻，作為空白對(duì)照。 轉(zhuǎn)移200μL供試液至96孔板，每個(gè)稀釋度加2個(gè)孔；37 °C培養(yǎng)化，觀察培養(yǎng)過程 中的顏色變化。【具體實(shí)施方式】 第一實(shí)施例； 來源于臨巧萬德福食品有限公司的1%的大蒜素的抑菌效果的檢測(cè)。 第一步：稀松的營養(yǎng)瓊脂的制備：稱取0. 3g瓊脂溶于200ml營養(yǎng)肉湯中，制成 0. 15%瓊脂的營養(yǎng)肉湯。[002。 第二步：本專利技術(shù)所用的培養(yǎng)基譜養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂、稀松的營養(yǎng)瓊脂冷0. 15%瓊 脂的營養(yǎng)肉湯)、0. 9%氯化鋼溶液）使用前在真空脈動(dòng)滅菌柜中12rC滅菌15分鐘，所有用 具(試管，96孔板，51111、21111、11111移液槍，51111、21111、11111槍頭）在真空脈動(dòng)滅菌柜中121°(：滅 菌30分鐘。 第Ξ步：對(duì)照品的制備：稱取大蒜素標(biāo)準(zhǔn)品（來源：北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究 院）約20mg，溶于1ml稀松的營養(yǎng)瓊脂中，制成約20mg/ml的對(duì)照品溶液。 第四步：樣品的制備：稱取原料大蒜素0. 25g，溶于50ml稀松的營養(yǎng)瓊脂中，制成 0. 5%的樣品溶液，依次稀釋，制成濃度分別為0. 25%、0. 125%、0. 0625%、0. 03125%、0. 016〇/〇、 0.008%〇 第五步：實(shí)驗(yàn)過程：用接種環(huán)薩取大腸埃希菌菌種在營養(yǎng)瓊脂平板劃線，在37Γ 培養(yǎng)18~2地，刮取少量培養(yǎng)物于0. 9%氯化鋼溶液中，搖勻，與麥?zhǔn)媳葷峁軐?duì)比，稀釋，直至 濁度與0. 5管號(hào)濁度(麥?zhǔn)媳葷峁埽┮恢隆002引吸取100μL上述稀釋液，接種至10ml營養(yǎng)肉湯中，37°C培養(yǎng)1她，接種50μL培養(yǎng) 肉湯至10ml稀松的營養(yǎng)瓊脂中作為大腸埃希菌的起始培養(yǎng)物。 分別取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和各個(gè)濃度100μL供試品溶液，混勻， 作為供試液。 取850 μ L起始培養(yǎng)物，50 μ L指示劑，和100 μ L 20mg/ml的蒜素溶液，混勻，作為 陽性對(duì)照。[002引取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和100μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，混勻，作為陰性 對(duì)照。[002引取200μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，100μL指示劑，混勻，作為空白對(duì)照。轉(zhuǎn)移200μL混合物至96孔板，每個(gè)稀釋度加2個(gè)孔。37°C培養(yǎng)化，觀察培養(yǎng)過程中的顏色變化。其結(jié)果如表1所示： 該結(jié)果表明，0. 5%和0. 25%濃度的供試品溶液具有抑菌效果，其他濃度的供試品溶液 無抗菌效果。[00礎(chǔ)第二實(shí)施例； 來源于宜興天石有限公司的25%的大蒜素的抑菌效果的檢測(cè)。[003引具體步驟同第一實(shí)施例，其結(jié)果如表2所示:_該結(jié)果表明，0.5%濃度的供試品溶液具有抑菌效果，其他濃度的供試品溶液無抗菌效 果。 第；實(shí)施例； 來源于江蘇雅博動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司一種含有大蒜素添加劑的雞飼料的抑菌效 果的檢測(cè)。 具體步驟同第一實(shí)施例，其結(jié)果如表3所示：該結(jié)果表明，0.5%濃度的供試品溶液具有抑菌效果，其他濃度的供試品溶液無抗菌效 果。 W上所述的具體實(shí)施例，對(duì)本專利技術(shù)解決的技術(shù)方案和技術(shù)效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì) 說明，肯定了大蒜素的抑菌效果，同時(shí)也確定了其最低抑菌質(zhì)量百分濃度為0.5%。本專利技術(shù)比 傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)方法快速簡(jiǎn)便，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。 W上所述并不用于限制本專利技術(shù)，凡在本專利技術(shù)的精神和原則之內(nèi)所做的任何修改、 等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本專利技術(shù)保護(hù)范圍之內(nèi)。【主權(quán)項(xiàng)】1. ，其特征在于，包括如下步驟： 1) 用接種環(huán)蘸取大腸埃希菌菌種在營養(yǎng)瓊脂平板劃線，在37°c培養(yǎng)18~24h，刮取 少量培養(yǎng)物于〇. 9%質(zhì)量濃度的氯化鈉溶液中，搖勻，與麥?zhǔn)媳葷峁軐?duì)比，稀釋，直至濁度與 0.5號(hào)麥?zhǔn)媳葷峁軡岫纫恢拢? 2) 吸取100yL上述稀釋液接種至10ml營養(yǎng)肉湯中，37°C培養(yǎng)18h，接種50yL培養(yǎng)后 的營養(yǎng)肉湯至l〇ml稀松的營養(yǎng)瓊脂中作為大腸埃希菌的起始培養(yǎng)物； 3) 取大蒜素適量，加稀松的營養(yǎng)瓊脂制成質(zhì)量濃度為0. 5%的供試品溶液，依次稀釋， 質(zhì)量濃度分別為 〇· 25%、0· 125%、0· 0625%、0· 03125%、0· 016%、0· 008% ; 4) 分別取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和各個(gè)濃度100μL供試品溶液，分別混 勻，作為供試液； 5) 取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和100μL20mg/ml的蒜素溶液，混勾，作為陽 性對(duì)照； 6) 取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和100μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，混勾，作為陰性對(duì) 昭. 7) 取200μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，100μL指示劑，混勻，作為空白對(duì)照； 8) 轉(zhuǎn)移200μL供試液本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
大蒜素抗菌效果的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：1）用接種環(huán)蘸取大腸埃希菌菌種在營養(yǎng)瓊脂平板劃線,在37℃培養(yǎng)18～24h，刮取少量培養(yǎng)物于0.9%質(zhì)量濃度的氯化鈉溶液中，搖勻，與麥?zhǔn)媳葷峁軐?duì)比，稀釋，直至濁度與0.5號(hào)麥?zhǔn)媳葷峁軡岫纫恢拢?）吸取100μL上述稀釋液接種至10ml營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)18h，接種50μL培養(yǎng)后的營養(yǎng)肉湯至10ml稀松的營養(yǎng)瓊脂中作為大腸埃希菌的起始培養(yǎng)物；3）取大蒜素適量，加稀松的營養(yǎng)瓊脂制成質(zhì)量濃度為0.5%的供試品溶液，依次稀釋，質(zhì)量濃度分別為0.25%、0.125%、0.0625%、0.03125%、0.016%、0.008%；4）分別取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和各個(gè)濃度100μL供試品溶液，分別混勻，作為供試液；5）取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和100μL?20mg/ml的蒜素溶液，混勻，作為陽性對(duì)照；6）取850μL起始培養(yǎng)物，50μL指示劑，和100μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，混勻，作為陰性對(duì)照；7）取200μL稀松的營養(yǎng)瓊脂，100μL指示劑，混勻，作為空白對(duì)照；8）轉(zhuǎn)移200μL供試液至96孔板，每個(gè)稀釋度加2個(gè)孔,37℃培養(yǎng)3h，觀察培養(yǎng)過程中的顏色變化。...
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：倪靜，黃彬，薛紅芬，邵海艷，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江蘇雅博動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32
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