本發明專利技術公開了一種檢測黃酒中耐乙醇污染微生物的培養基及其應用，屬于黃酒技術領域。本發明專利技術的黃酒中耐乙醇污染微生物檢測培養基是采用無機營養成分、有機營養成分、碳水化合物、生長因子、抑制非有害菌的物質、天然提取物、表面活性劑通過混合調配、分裝、滅菌等步驟配置而成。本發明專利技術的培養基針對性強，能夠準確培養黃酒中高酒精耐受性的酸敗微生物，適合于黃酒釀造、生產及貯存過程中污染微生物的監控。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及，屬于黃酒
技術介紹
黃酒是我國名族特色酒精飲料，是以稻米、黍米等為主要原料，經加曲、酵母等糖化發酵劑釀制而成的發酵酒。黃酒具有低酒精度、營養豐富的特征深受我國消費者的喜愛，是國家重點扶植的傳統產業。黃酒，又稱老酒，其典型特征是越陳越香。因此黃酒產品上市前一般都要經過長時間貯存陳釀以提高黃酒的風味品質。雖然黃酒在貯存前都要經過滅菌處理以殺死其中的所有微生物，但在整個黃酒生產貯存過程中貯存設備、管道、空氣等諸多因素都可能導致有害微生物進入黃酒中。因此在黃酒貯存陳釀過程中，由于微生物引起的黃酒酸敗變質現象時有發生，直接影響其外觀、風味、營養物質含量，造成黃酒渾濁、酒精度下降、酸度下降，產生一種刺鼻的酸臭味，嚴重影響了黃酒的質量。而且隨著黃酒大罐貯存技術的普遍使用，大罐中污染微生物造成的酸敗現象對企業帶來經濟損失更加突出。黃酒一般酒精含量在15% -20%之間，pH在3.0-5.0之間，貯存過程中處于相對厭氧的環境中，這種較高乙醇含量、低PH、厭氧環境中一般微生物難以生長。但在黃酒生產環境中卻存在少數微生物能夠在黃酒環境中生長繁殖，使黃酒腐敗變質。因此對黃酒貯存過程中耐乙醇污染微生物的檢測對于保障陳釀過程中黃酒的品質具有重要意義。但目前還沒有針對黃酒貯存陳釀過程中微生物分析檢測的專用培養基和培養方法，對黃酒中這類耐乙醇污染微生物也缺乏深入的分析研究。因此為了更及時的監控黃酒陳釀過程中微生物的狀況，黃酒行業急需開發一種針對性強、快速、簡單的黃酒耐乙醇污染微生物培養檢測培養基。
技術實現思路
為了解決上述問題，本專利技術針對黃酒貯存過程中污染微生物分析檢測的緊迫性，提供一種培養速度快、便于觀察計數、適合于高酒精度黃酒環境的檢測黃酒中耐乙醇污染微生物的培養基及其制備方法與應用。本專利技術的培養基是采用無機營養成分、有機營養成分、碳水化合物、生長刺激物質、天然提取物、表面活性劑通過混合調配、分裝、滅菌等步驟配制而成。本專利技術提供了一種檢測黃酒中耐乙醇污染微生物的培養基，每L中含有:(1)碳源物質 20_60g ；(2)氮源物質 20_35g ；(3)表面活性劑 0.3-lg ；(4) B族維生素及其他微量元素類物質:酵母提取物2-10g，番茄汁3-8g或含有等量番茄汁的番茄汁培養基；(5)抑制黃酒非有害厭氧菌生長類物質:三水合乙酸鈉3_6g，無水乙醇50_200mL ；(6)加快各種黃酒有害厭氧菌生長類物質，為以下任意一種或者兩種以上的混合:甲瓦龍酸內酯2-50mg、甲瓦龍酸2-50g、濃縮黃酒10_200mL ；(7)無機營養物質:七水合硫酸鎂0.1-1.0g，四水合硫酸猛0.01-1.0g，磷酸氫二鉀l_5g，檸檬酸三銨l_5g;(8)水:補加至 1L;在本專利技術的一種實施方式中，所述培養基為固體培養基時，添加瓊脂15_20g。在本專利技術的一種實施方式中，所述碳源物質包括葡萄糖、果糖、麥芽糖。在本專利技術的一種實施方式中，所述碳源物質為葡萄糖10_30g，果糖5_15g，麥芽糖4-15go在本專利技術的一種實施方式中，所述碳源物質為葡萄糖10.3-10.4g，果糖5.1-7.3g，麥芽糖 4.6-5.0g。在本專利技術的一種實施方式中，所述氮源物質包括酪蛋白胨、牛肉提取物、胰蛋白胨。在本專利技術的一種實施方式中，所述氮源物質為酪蛋白胨10g，牛肉提取物5-10g，胰蛋白胨5_15g。在本專利技術的一種實施方式中，所述氮源物質為酪蛋白胨10g，牛肉提取物7.6-7.8g，胰蛋白胨 12.5g。在本專利技術的一種實施方式中，所述表面活性劑為吐溫80，亦可用吐溫60。在本專利技術的一種實施方式中，所述B族維生素及其他微量元素類物質為酵母提取物3.7-4.2g，番茄汁6g(或含有等量番茄汁的番茄汁培養基)。在本專利技術的一種實施方式中，所述抑制黃酒非有害厭氧菌生長類物質為三水合乙酸鈉4.5-5.8g，無水乙醇50-200mL ；在本專利技術的一種實施方式中，所述濃縮黃酒是由正常普通黃酒經旋蒸濃縮10倍可得。在本專利技術的一種實施方式中，所述加快各種黃酒有害厭氧菌生長類物質為以下任意一種:甲瓦龍酸內酯50mg、甲瓦龍酸50g、濃縮黃酒100mL。本專利技術還提供一種所述培養基的配置方法，包括如下步驟:(1)將除乙醇外的其他成分混合，溶解于水中；(2)條件 pH 至 4.0-5.0 ；(3) 115-121。。滅菌 12_20min ；(4)使用時，在無菌條件下加入無水乙醇。在本專利技術的一種實施方式中，培養基為固體培養基時，是在步驟(3)之前加入瓊脂；步驟⑷之后傾倒平板。在本專利技術的一種實施方式中，培養基為液體試管培養基時，在步驟(2)之后進行試管分裝，然后在進行滅菌；液體試管的總裝液量要在試管容量的1/2左右。本專利技術還提供一種利用所述培養基在黃酒污染微生物檢測或篩選方面的應用。所述應用，是將黃酒樣接種于培養基中，于厭氧條件下培養。所述培養是在30°C進行；液體培養基一般需要3-4天，固體培養基一般需要4-5天。本專利技術的有益效果:(1)采用本專利技術的培養基，通過合理搭配、協同作用，提高了培養基的選擇度，可以有效培養和檢測到黃酒耐乙醇污染微生物，而非污染微生物在培養基中不生長，檢測準確性高、可靠度高。使用本專利技術的培養基，3-5天就可以實現污染微生物的檢測，可以及時地監控黃酒陳釀過程中微生物的狀況，減少企業損失；(2)本專利技術的培養基，原料成本低、配制方法簡單；培養基采用葡萄糖、果糖、麥芽糖等多種碳源，可以滿足污染微生物對各類碳源的需求；酪蛋白胨、牛肉提取物和胰蛋白胨可以提供成分更豐富的氮源；表面活性劑，可以幫助微生物更有效的接觸和吸收營養物質；酵母提取物和番茄汁，為污染微生物的生長提供必不可少的B族維生素及其他微量元素；三水合乙酸鈉和乙醇，可以抑制非黃酒污染微生物的增殖，提高培養基的選擇度；甲瓦龍酸和/或甲瓦龍酸內酯，是酸敗黃酒中污染微生物的生長因子，可以促進微生物的生長；無機物為污染微生物的生長提供必要的無機營養物質；水和/或瓊脂，不作為營養物質，用來溶解、凝固培養基成分。(3)本專利技術的培養基可以用于液體試管培養、平板涂布培養和平板劃線培養，既可用于黃酒中耐乙醇污染微生物的檢測分析，也可用于黃酒中耐乙醇污染微生物培養研究?！靖綀D說明】圖1.采用實施例1的固體培養基檢測到的黃酒中耐乙醇污染微生物菌落；圖2.采用實施例2的固體培養基檢測到的黃酒中耐乙醇污染微生物菌落；圖3.采用實施例3的固體培養基檢測到的黃酒中耐乙醇污染微生物菌落；圖4.采用實施例4的固體培養基檢測到的黃酒中耐乙醇污染微生物菌落；圖5.采用實施例5的固體培養基檢測到的微生物菌落；圖6.采用實施例6的固體培養基檢測到的微生物菌落?！揪唧w實施方式】結合如下實施例對本專利技術進行進一步說明。實施例1:培養基配方及配制方法一種檢測黃酒中耐乙醇污染微生物的培養基，其液體配方1L的添加量如下:(1)碳源物質:葡萄糖10.3g，果糖7.3g，麥芽糖4.6g ； (2)氮源物質:酪蛋白胨10g，牛肉提取物7.6g，胰蛋白胨12.5g ; (3)表面活性劑:吐溫800.5g ; (4)B族維生素及其他微量元素類物質:酵母提取物3.7g，番茄汁6g ; (5)抑制黃酒非有害厭氧菌生長類物質:三水合乙酸鈉5本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種檢測黃酒中耐乙醇污染微生物的培養基，其特征在于，所述培養基每L中，含有：(1)碳源物質20?60g；(2)氮源物質20?35g；(3)表面活性劑0.3?1g；(4)B族維生素及其他微量元素類物質：酵母提取物2?10g，番茄汁3?8g或含有等量番茄汁的番茄汁培養基；(5)抑制黃酒非有害厭氧菌生長類物質：三水合乙酸鈉3?6g，無水乙醇50?200mL；(6)加快各種黃酒有害厭氧菌生長類物質：甲瓦龍酸內酯2?50mg，甲瓦龍酸2?50g，濃縮黃酒10?200mL；(7)無機營養物質：七水合硫酸鎂0.1?1.0g，四水合硫酸錳0.01?1.0g，磷酸氫二鉀1?5g，檸檬酸三銨1?5g；(8)水：補加至1L；當培養基為固體培養基時，添加瓊脂15?20g。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳雙，徐巖，劉文容，
申請(專利權)人：江南大學，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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