一種同卵雙生仔豬快速鑒定方法技術

本發明專利技術公開了一種同卵雙生仔豬快速鑒定方法，采用SEQ?ID?NO：1-SEQ?ID?NO：20所示的10對引物，首先使用1其中的兩對引物對1,201個仔豬個體進行毛細管電泳檢測，如果同一窩號中的仔豬同時滿足這兩對引物的毛細管電泳峰值一致，則繼續進行下一對引物的檢測；如果不能同時滿足一對引物的毛細管電泳峰值一致，這樣的個體將被直接剔除，不進行下一組引物的檢測；以此類推，當同一窩號的兩個個體完成五組共十對引物的PCR產物檢測，十對引物的毛細管電泳峰值均一致時，才能推斷這兩個個體是同卵雙生的仔豬。本發明專利技術采用十對優化的帶有熒光染料的微衛星標記，建立一種高效、經濟、簡便的方法鑒定同卵雙生仔豬。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及的是。
技術介紹
豬在形態學、生理學和病理學上與人類具有高度相似性，加之樣本采集方便可行，是十分理想的生物醫學模型。同卵雙生仔豬含有完全相同的遺傳背景，具有相同的代謝特征、心血管系統以及形狀大小相似的組織器官，是生理學、心理學、病理學、遺傳學等方面十分寶貴的研究對象。隨著分子生物學技術的發展，越來越多的DNA分子標記技術被廣泛運用到遺傳育種、物種親緣關系鑒別、基因克隆等方面，但是由于豬的商業化選育導致其外表高度相似，并且屬于復雜的多胎動物，鑒定同卵雙生仔豬仍然存在較大困難。Moore 等人在 1991 年結合 PCR (Polymerase Chain Reaction)技術創建了串聯重復序列STR (simple tandem repeats)標記技術。STR也稱微衛星DNA、簡單重復序列SSR(Simple Sequence Repeat)、SSRP (Simple Sequence Repeat Polymorphisms)或者STMS (Sequence-tagged microsatellites),是由多個喊基組成的基序(motif )串聯重復而成的DNA序列。其串聯重復的核心序列為l_6bp，其中最常見是雙核昔酸重復，S卩(CA)n和(TG) η,每個微衛星DNA的核心序列結構相同，重復單位數目10-60個，其高度多態性主要來源于串聯數目的不同。不同的遺傳個體其重復次數不同。在豬的基因組當中，每30-46kb間隔就存在一個微衛星DNA序列。SSR標記的基本原理:根據微衛星序列兩端的特定短序列設計引物，通過PCR反應擴增微衛星片段，由于核心序列串聯重復數目不同，因而能夠用PCR的方法擴增出不同長度的PCR產物，將擴增產物進行凝膠電泳，根據分離片段的大小檢測DNA的多態性。該技術操作程序較復雜；準確性欠佳；不能實現高通量進行大規模檢測。SNP標記是美國學者Lander E于1996年提出的第三代DNA遺傳標記。SNP是指同一位點的不同等位基因之間僅有個別核苷酸的差異或只有小的插入、缺失等。從分子水平上對單個核苷酸的差異進行檢測，SNP標記可幫助區分兩個個體遺傳物質的差異。人類基因組大約每IOOObp就出現一次SNP，已有2000多個標記定位于人類染色體。對于SNP的檢測可以通過經典的凝膠電泳法以及高通量的檢測方法，最佳的檢測方法是SNP芯片技術。該技術鑒定成本高，一張定制的豬的SNP芯片的平均報價為5000元人民幣；只能識別已知SNP位點；準確度偏低，需要第二種方法驗證；多數SNP是二等位基因性的(biallelic)，其信息含量低于多等位基因性(多至10個等位基因)的微衛星，不適宜多樣本、少數SNP位點的檢測。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是針對現有技術的不足提供一種同卵雙生仔豬快速鑒定方法。本專利技術的 技術方案如下:，采用SEQ ID NO =1-SEQ ID NO:20所示的10對引物，首先使用I其中的兩對引物對1，201個仔豬個體進行毛細管電泳檢測，如果同一窩號中的仔豬同時滿足這兩對引物的毛細管電泳峰值一致，則繼續進行下一對引物的檢測；如果不能同時滿足一對引物的毛細管電泳峰值一致，這樣的個體將被直接剔除，不進行下一組引物的檢測；以此類推，當同一窩號的兩個個體完成五組共十對引物的PCR產物檢測，十對引物的毛細管電泳峰值均一致時，才能推斷這兩個個體是同卵雙生的仔豬。本專利技術采用十對優化的帶有熒光染料的微衛星標記，建立一種高效、經濟、簡便的方法鑒定同卵雙生仔豬。與此同時，此方法還可以推廣到克隆豬的快速有效鑒定，以及豬肉品質安全追溯等生產領域，是一種信價比很高的監測手段。同時本專利技術將鑒定成本減小到最低；簡化操作步驟；提高檢測準確性。針對現有技術的不足提供一種經濟、簡單的可用于同卵雙生鑒定、克隆豬鑒定、豬肉質量安全追溯等方面的方法。附圖說明圖1-圖10為十對引物的毛細管電泳峰值圖。每對引物展示的是兩個個體的檢測結果，每組配對的引物(如IA和1B)展示的是相同兩個個體的不同熒光檢測結果。A組引物檢測結果峰值使用的是HEX熒光，B組引物檢測結果峰值使用的是FAM熒光。 圖11為同一窩號仔豬的檢測步驟；深色柱子代表檢測個數，淺色柱子代表經過本組引物檢測后被剔除的個體數；被分數是累計剔除率，是用剔除的總個體數除以檢測總個體數。具體實施例方式以下結合具體實施例，對本專利技術進行詳細說明。本專利技術提供熒光引物10對(引物序列見表1)，需要-20°c避光保存。DNA抽提以及PCR反應所需材料等需自行準備。表1.微衛星標記及其熒光染料權利要求1.，其特征在于，采用SEQ ID NO a-SEQ ID N0:20所示的10對引物，首先使用I其中的兩對引物對1，201個仔豬個體進行毛細管電泳檢測，如果同一窩號中的仔豬同時滿足這兩對引物的毛細管電泳峰值一致，則繼續進行下一對引物的檢測；如果不能同時滿足一對弓丨物的毛細管電泳峰值一致，這樣的個體將被直接剔除，不進行下一組引物的檢測；以此類推，當同一窩號的兩個個體完成五組共十對引物的PCR產物檢測，十對引物的毛 細管電泳峰值均一致時，才能推斷這兩個個體是同卵雙生的仔豬。全文摘要本專利技術公開了，采用SEQ ID NO1-SEQ ID NO20所示的10對引物，首先使用1其中的兩對引物對1,201個仔豬個體進行毛細管電泳檢測，如果同一窩號中的仔豬同時滿足這兩對引物的毛細管電泳峰值一致，則繼續進行下一對引物的檢測；如果不能同時滿足一對引物的毛細管電泳峰值一致，這樣的個體將被直接剔除，不進行下一組引物的檢測；以此類推，當同一窩號的兩個個體完成五組共十對引物的PCR產物檢測，十對引物的毛細管電泳峰值均一致時，才能推斷這兩個個體是同卵雙生的仔豬。本專利技術采用十對優化的帶有熒光染料的微衛星標記，建立一種高效、經濟、簡便的方法鑒定同卵雙生仔豬。文檔編號C12Q1/68GK103194538SQ201310102160公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月27日 優先權日2013年3月27日專利技術者劉瀛鍇, 李明洲, 賀伸, 于淑珍, 周怡, 李學偉 申請人:四川農業大學本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種同卵雙生仔豬快速鑒定方法，其特征在于，采用SEQ?ID?NO：1?SEQ?ID?NO：20所示的10對引物，首先使用1其中的兩對引物對1,201個仔豬個體進行毛細管電泳檢測，如果同一窩號中的仔豬同時滿足這兩對引物的毛細管電泳峰值一致，則繼續進行下一對引物的檢測；如果不能同時滿足一對引物的毛細管電泳峰值一致，這樣的個體將被直接剔除，不進行下一組引物的檢測；以此類推，當同一窩號的兩個個體完成五組共十對引物的PCR產物檢測，十對引物的毛細管電泳峰值均一致時，才能推斷這兩個個體是同卵雙生的仔豬。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉瀛鍇，李明洲，賀伸，于淑珍，周怡，李學偉，
申請(專利權)人：四川農業大學，
類型：發明
國別省市：