本發明專利技術公開了一種綠臭蛙抗氧化肽odorranain-H-OM，它是具有序列表中SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的蛋白，或者是將SEQIDNO：2的氨基酸殘基序列經過一個以上氨基酸殘基的取代、缺失或添加，且具有與SEQIDNO：2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQIDNO：2衍生的蛋白質。本發明專利技術克隆得到綠臭蛙抗氧化肽odorranain-H-OM的編碼基因，并利用化學合成的方法合成了綠臭蛙抗氧化肽odorranain-H-OM，它具有極強的抗氧化活性、分子量小、結構簡單、溶血活性低、制備方法簡單等有益特點。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分子遺傳學領域,尤其是一種綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM及編碼序列的基因與應用。
技術介紹
任何包含一個未成對電子的原子或原子團，均稱之為自由基。生物體系主要遇到的是氧自由基，例如超氧陰離子自由基、羥自由基、過氧化氫、脂質過氧自由基、二氧化氮自由基、一氧化氮自由基、單線態氧和臭氧。細胞內的自由基來源包括紫外線的照射，電離輻射，藥物，環境毒素，黃嘌呤氧化酶，內質網上的細胞色素P-450酶類和質膜NADPH氧化酶等。線粒體內膜上的氧化呼吸鏈被認為是細胞內氧自由基的主要來源。在較高濃度下，活性氧自由基對生物細胞的細胞結構、核酸、脂類和蛋白質造成損傷。造成DNA損傷，進一步引起復制錯誤、基因組不穩定、轉錄意外起始或終止，從而導致生物體變異或疾病發生；弓丨起細胞膜流動性和通透性改變，導致細胞結構和功能改變；引起蛋白質氧化，導致蛋白質變性和失活。目前一些變異實驗表明，慢性的氧化損傷尤其是來自炎癥的慢性氧化損傷跟腫瘤發生有關。例如，潰瘍性結腸炎常常伴隨高發的結腸直腸癌。在自由基與神經系統疾病方面，由于大腦用氧量極高，外加富含多不飽和脂肪酸和參與氧化還原反應的金屬離子如鐵和銅，導致大腦成為容易被氧離子自由基攻擊的器官。抗氧物目前在國內外應用廣泛，需求量逐漸增多，現在被用于預防治療多種疾病，如心血管疾病、腫瘤、關節炎、腎功能損傷、糖尿病、自身免疫性疾病等。此外，抗氧化物近年在化妝品領域的應用興起，尤其是天然抗氧化物。由于皮膚的光老化作用是由于紫外線誘導皮膚細胞產生大量的氧自由基堆積而造成的。現在許多護膚品中加入抗氧化劑，有減少雀斑、防輻射、延緩衰老、調節免疫和提高皮膚自我保護的作用。關于衰老的學說有很多種，其中自由基學說是較為廣泛認可的一種。有研究發現氧氣消耗和衰老之間存在聯系，例如低耗氧可以解釋為什么蜂王壽命能比會飛的工蜂壽命長50倍；大型動物單細胞耗氧量平均比小型動物細胞少所以壽命一般較長；長壽物種的抗氧化系統往往較為強大，如動物中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽、類胡蘿卜素類和維生素E含量較高。除此之外，活性氧自由基還與多種人類疾病有關，如心腦血管疾病、缺血再灌注損傷、類風濕性關節炎和糖尿病等。為了抵抗活性氧自由基對機體的損害，在漫長的進化過程中生物體形成多種不同的自由基清除系統，包括非基因編碼的小分子物質，如尿酸、維生素C、維生素E、胡蘿卜烯類、硫辛酸和輔酶Q等；基因編碼的大分子抗氧化酶類，如超氧化物歧化酶(S0D)、過氧化氫酶、過氧化物酶、硫氧還蛋白酶系統和谷胱甘肽酶系統；基因編碼的小分子抗氧化肽類，如從兩棲類蛙科動物皮膚中發現的各種小分子抗氧化多肽。各種不同類型的自由基清除劑在醫藥和化妝品領域具有極大的應用潛力，如維生素C、超氧化物歧化酶(SOD)和小分子抗氧化多肽。綠臭娃margaratae)屬于兩棲綱無尾目娃科臭娃屬。目前關于綠臭娃來源抗氧化多肽的研究還沒有報道。
技術實現思路
技術要求 本專利技術所要解決的技術問題是提供一種綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM。本專利技術還要解決的技術問題是提供上述蛋白的編碼序列。本專利技術還要解決的技術問題是提供上述蛋白在制備抗氧化藥物或化妝品添加劑的應用。本專利技術是這樣實現的:一種綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM,它是具有序列表中SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的蛋白，或者是將SEQ ID NO:2的氨基酸殘基序列經過一個以上氨基酸殘基的取代、缺失或添加，且具有與SEQ ID NO:2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQ ID NO:2衍生的蛋白質。所述的綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM具有序列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；該綠臭蛙抗氧化肽odorranain-H-OM為直鏈多肽，含有27個氨基酸殘基，分子量為2995.71 Da，等電點為 9.78。綠臭娃抗氧化 肽odorranain-H-OM的編碼基因，它是下列核苷酸之一: (1)序列表中SEQID NO:1所不的核昔酸序列； (2)編碼序列表中SEQID NO:2所示的氨基酸序列的多核苷酸； (3)在高嚴謹條件下可與序列表中SEQID NO:1限定的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM的編碼基是序列表中SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM在制備抗氧化藥物或化妝品添加劑中的應用。有益效果 本專利技術克隆得到綠臭蛙抗氧化肽odorranain-H-OM的編碼基因，并利用化學合成的方法合成了綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM,它具有極強的抗氧化活性、分子量小、結構簡單、溶血活性低、制備方法簡單等有益特點。具體實施例方式根據下述實施例，可以更好地理解本專利技術。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的僅用于說明本專利技術，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本專利技術。本專利技術的實施例1:綠臭娃抗氧化肽odorranain-H-OM基因克隆。I)綠臭蛙皮膚總RNA提取: ①取300 mg綠臭蛙皮膚組織，放入研缽中加入液氮研磨成粉末，轉移到EP管中，加入Iml總RNA提取緩沖液(Trizol，美國Invitrogen公司產品)，充分混勻，而后于4°C，12000rpm 離心 10 min。②離心取上清，加入0.2 ml氯仿溶液，劇烈混勻，室溫放置10分鐘，而后以4°C，12000 rpm離心10分鐘，棄除沉淀。③上清加入等體積的異丙醇，室溫放置10分鐘，以4°C，12000 rpm離心10分鐘，收集沉淀用75% (V/V)乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即為綠臭蛙皮膚總RNA。2)綠臭蛙皮膚cDNA文庫構建:采用CL0NTECH公司In-Fusion SMARTer Directional cDNA Library Construction Kit。(l)cDNA第一鏈合成(mRNA反轉錄): ①經DEPC處理(DEPC處理是在含0.1% (V/V) DEPC的水浸泡過夜，高壓滅菌，烘干)的離心管中加入I P I綠臭娃皮膚總RNA、1 μ I 3’端一鏈合成引物(3’In-Fusion SMARTerCDS Primer)和2.5 μ I DEPC處理的水(DEPC處理的水是含0.1% DEPC (V/V)的水，放置過夜，高壓滅菌)使總體積達到4.5 μ 1，混勻后短暫離心(2000 rpm, 30 S)，離心后于72°C保溫3分鐘；保溫后再將離心管在42°C孵育2分鐘。②在上述離心管中加入以下試劑(均為CL0NTECH公司In-Fusion SMARTer Directional cDNA Library Construction Kit 建庫試劑盒中配備)，2.0 μ I 5 X第一鏈緩沖液、0.25 μ I 100 mM DTTU.0 μ I 10 mM dNTP Mix、1.0 μ I SMARTerV Oligonucleotide、。.25 μ I RNase Inhibitor 和 1.0 μ I SMARTScribe ReverseTranscriptase反轉錄酶,混合離心管中試劑并短暫離心(2000 rpm, 3本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種綠臭蛙抗氧化肽odorranain?H?OM，其特征在于：它是具有序列表中SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列的蛋白，或者是將SEQ?ID?NO：2的氨基酸殘基序列經過一個以上氨基酸殘基的取代、缺失或添加，且具有與SEQ?ID?NO：2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQ?ID?NO：2衍生的蛋白質。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：周江，凌桂英，高久香，李莉，王義鵬，
申請(專利權)人：貴州師范大學，
類型：發明
國別省市：
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