一種務川臭蛙抗氧化肽wuchuanin-B2及其編碼序列的基因與應用制造技術

本發明專利技術公開了一種務川臭蛙抗氧化肽wuchuanin-B2，它是具有序列表中SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的蛋白，或者是將SEQIDNO：2的氨基酸殘基序列經過一個以上氨基酸殘基的取代、缺失或添加，且具有與SEQIDNO：2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQIDNO：2衍生的蛋白質。本發明專利技術提供的務川臭蛙抗氧化肽wuchuanin-B2具有極強的抗氧化活性、分子量小、結構簡單、溶血活性低、制備方法簡單的特點，將其應用在抗氧化藥物或化妝品添加劑中，可以提高藥物或化妝品添加劑的抗氧化效果。由于該基因是務川臭蛙本身存在的內源基因，因此，該基因的超量表達不會影響其安全性，可廣泛應用于藥物或化妝品添加劑生產中。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及分子遺傳學領域,尤其是一種務川臭娃抗氧化肽wuchuanin-B2及及編碼序列的基因與應用。
技術介紹
自由基指任何包含一個未成對電子的原子或原子團。生物體與外界接觸和自身產生的自由基主要是活性氧自由基，包括超氧陰離子自由基、羥自由基、過氧化氫、脂質過氧自由基、二氧化氮、一氧化氮自由基、單線態氧和臭氧。在較高濃度下，活性氧自由基對生物細胞的細胞結構、核酸、脂類和蛋白質造成損傷。造成DNA損傷，進一步引起復制錯誤、基因組不穩定、轉錄意外起始或終止，從而導致生物體變異或疾病發生；引起細胞膜流動性和通透性改變，導致細胞結構和功能改變；引起蛋白質氧化，導致蛋白質變性和失活。目前發現，活性氧自由基與多種人類疾病有關,如癌癥、心腦血管疾病、缺血再灌注損傷、類風濕性關節炎、糖尿病、阿爾茨海默病、帕金森病和衰老等。為了抵抗活性氧自由基對機體的損害，在漫長的進化過程中生物體形成多種不同的自由基清除系統，包括非基因編碼的小分子物質，如尿酸、維生素C、維生素E、胡蘿卜烯類、硫辛酸和輔酶Q等；基因編碼的大分子抗氧化酶類，如超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶、過氧化物酶、硫氧還蛋白酶系統和谷胱甘肽酶系統；基因編碼的小分子抗氧化肽類，如從兩棲類蛙科動物皮膚中發現的各種小分子抗氧化多肽。各種不同類型的自由基清除劑在醫藥和化妝品領域具有極大的應用潛力，如維生素C、超氧化物歧化酶(SOD)和小分子抗氧化多肽?？寡跷锬壳霸趪鴥韧鈶脧V泛，需求量逐漸增多，現在被用于預防治療多種疾病，如心血管疾病、腫瘤、關節炎、腎功能損傷、糖尿病、自 身免疫性疾病等。此外，抗氧化物近年在化妝品領域的應用興起，尤其是天然抗氧化物。由于皮膚的光老化作用是由于紫外線誘導皮膚細胞產生大量的氧自由基堆積而造成的。現在許多護膚品中加入抗氧化劑，有減少雀斑、防輻射、延緩衰老、調節免疫和提高皮膚自我保護的作用。務川臭娃fracAwafleflsis)屬于兩棲綱無尾目娃科臭娃屬，為中國特有種，僅分布于貴州省務川仡佬族苗族自治縣。目前關于務川臭蛙來源抗氧化多肽的研究還沒有報道。
技術實現思路
技術要求 本專利技術所要解決的技術問題是提供一種務)11臭娃抗氧化肽wuchuanin-B2。本專利技術還要解決的技術問題是提供上述蛋白片段的編碼序列。本專利技術還要解決的技術問題是提供上述基因片段在制備抗氧化藥物或化妝品添加劑的應用。本專利技術是這樣實現的:一種務川臭娃抗氧化肽wuchuanin_B2,它是具有序列表中SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的蛋白，或者是將SEQ ID NO:2的氨基酸殘基序列經過一個以上氨基酸殘基的取代、缺失或添加，且具有與SEQ ID NO:2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQ ID NO:2衍生的蛋白質。所述的務川臭娃抗氧化肽wuchuanin_B2具有序列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；該務川臭蛙抗氧化肽wuChuanin-B2是直鏈多肽，含有16個氨基酸殘基，分子量為1833.17 Da，等電點為 11.26。務川臭娃抗氧化肽wuchuanin-B2的編碼基因，它是下列核苷酸之一: (1)序列表中SEQID NO:1所不的核昔酸序列； (2)編碼序列表中SEQID NO:2所示的氨基酸序列的多核苷酸； (3)在高嚴謹條件下可與序列表中SEQID NO:1限定的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。務川臭娃抗氧化肽wuchuanin-B2的編碼基是序列表中SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。 務川臭蛙抗氧化肽wuchuanin_B2在制備抗氧化藥物或化妝品添加劑的應用。有益效果 通過基因工程的方法將本專利技術提供的務川臭蛙抗氧化肽wuChuanin-B2具有極強的抗氧化活性、分子量小、結構簡單、溶血活性低、制備方法簡單的特點，將其應用在抗氧化藥物或化妝品添加劑中，可以提高藥物或化妝品添加劑的抗氧化效果。由于該基因是務川臭蛙本身存在的內源基因，因此，該基因的超量表達不會影響其安全性，可廣泛應用于藥物或化妝品添加劑生產中。具體實施例方式根據下述實施例，可以更好地理解本專利技術。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的僅用于說明本專利技術，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本專利技術。本專利技術的實施例1:務川臭娃抗氧化肽wuchuanin_B2基因克隆。I)務川臭蛙皮膚總RNA提取: ①取300 mg務川臭蛙皮膚組織，放入研缽中加入液氮研磨成粉末，轉移到EP管中，加入I ml總RNA提取緩沖液(Trizol,美國Invitrogen公司產品)，充分混勻，而后于4°C,12000 rpm 離心 10 min。②離心取上清，加入0.2 ml氯仿溶液，劇烈混勻，室溫放置10分鐘，而后以4°C，12000 rpm離心10分鐘，棄除沉淀。③上清加入等體積的異丙醇，室溫放置10分鐘，以4°C，12000 rpm離心10分鐘，收集沉淀用75% (V/V)乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即為務川臭蛙皮膚總RNA。2)務川臭蛙皮膚cDNA文庫構建:采用CL0NTECH公司In-Fusion SMARTer Directional cDNA Library Construction Kit。(l)cDNA第一鏈合成(mRNA反轉錄): ①經DEPC處理(DEPC處理是在含0.1% (V/V)DEPC的水浸泡過夜，高壓滅菌，烘干)的離心管中加入I μ I務川臭蛙皮膚總RNA、1 μ I 3’端一鏈合成引物(3’In-Fusion SMARTerCDS Primer)和2.5 μ I DEPC處理的水(DEPC處理的水是含0.1% DEPC (V/V)的水，放置過夜，高壓滅菌)使總體積達到4.5 μ 1，混勻后短暫離心(2000 rpm, 30 S)，離心后于72°C保溫3分鐘；保溫后再將離心管在42°C孵育2分鐘。 ②在上述離心管中加入以下試劑(均為CL0NTECH公司In-Fusion SMARTer Directional cDNA Library Construction Kit 建庫試劑盒中配備)，2.0 μ I 5 X第一鏈緩沖液、0.25 μ I 100 mM DTTU.0 μ I 10 mM dNTP Mix、1.0 μ I SMARTerVOligonucleotide、。.25 μ I RNase Inhibitor 和 1.0 μ I SMARTScribe ReverseTranscriptase反轉錄酶,混合離心管中試劑并短暫離心(2000 rpm, 30 s),在42°C保溫90 min，然后68°C保溫10 min。保溫處理后將離心管置于冰上中止第一鏈的合成。從離心管取2 μ I所合成的cDNA第一鏈備用。(2)采用長末端聚合酶鏈式反應(LD- PCR)方法擴增第二鏈(所用試劑均為CL0NTECH 公司 In-Fusion SMARTer Directional cDNA Library Construction Kit 建庫試劑盒中配備) ①將 2 μ I cDNA 第一鏈(mRNA 反轉錄)、80 μ I 去離子水、10 μ I IOXAdvantage 2PCR 緩沖液、2 μ I 50XdNTP 混合物、2本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種務川臭蛙抗氧化肽wuchuanin?B2，其特征在于：它是具有序列表中SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列的蛋白，或者是將SEQ?ID?NO：2的氨基酸殘基序列經過一個以上氨基酸殘基的取代、缺失或添加，且具有與SEQ?ID?NO：2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQ?ID?NO：2衍生的蛋白質。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：周江，凌桂英，高久香，李莉，王義鵬，
申請(專利權)人：貴州師范大學，
類型：發明
國別省市：