一種制備復合乳酸菌制劑的方法及應用技術

本發明專利技術屬于動物飼料技術領域，具體公開了一種制備復合乳酸菌制劑的方法及應用。所述方法包括菌株擴大培養、復合菌株液態培養、農副產品廢渣預處理、復合菌株液固態耦聯發酵。該發明專利技術克服了當前益生菌飼料添加劑產品存在的性能穩定性差、生產成本高的問題，其不僅使復合乳酸菌制劑產品中的菌株競爭力增強，宿主定植率得到提高，而且，該方法能大幅度減小成本，并有效利用農副產品廢渣資源，使其成為飼料添加劑成分中的重要組成部分，在一定程度上解決了資源浪費和環境污染等突出問題，可成功應用于飼料方面。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及微生物學和飼料添加劑
，更為具體地，涉及一種制備復合乳酸菌制劑的方法及應用。
技術介紹
益生菌制劑(微生態制劑)是基于飼用抗生素安全性問題應運而生的一種安全、無毒副作用、能促進畜禽生長、改善畜產品肉質風味、有利于生態環境和出口貿易的綠色飼料添加劑。乳酸菌屬是益生菌制劑中重要的菌種，其大部分是厭氧或兼性厭氧的革蘭氏陽性菌，生長在礦物質和有機營養物豐富的環境中，耐酸，在ρΗ3.(Γ4.5時仍可生長，適應于胃腸的酸性環境； 眾所周知，使用工業化生產的益生菌在進入畜禽腸道后可能會發生較大差異結果，性能與效果不盡如意，究其原因，可能主要與2個因素有關，第一個是選用的菌株在進入宿主過程中定植不成功；第二個是沒有足夠數量的菌株作用。生產廠家以及相關科研單位為了提升產品穩定性，做了大量的工作。中國專利ZL201010168634.X公布了一種干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制劑，但該方法制備的成品中乳酸菌濃度較低，同時，采用飼料原料作為載體，微生物極易在儲存中消耗飼料中的營養物質，造成能量及有效成分的缺失；中國專利ZL201110085520.3公開了一種濃漿制做發酵蛋白濃縮飼料工藝，該方法雖然在一定程度上降低了現有烘干技術生產濃漿飼料的成本，提高了產品的穩定性，但飼料營養缺失問題還是沒有得到根本解決；中國專利ZL200810197944.7公開了一種液態轉固態發酵的益生菌活性濕拌飼料制備方法，但該方法的液態發酵基料的原料要求苛刻，同時，濕拌過程也就是飼料營養物質缺失過程；中國專利ZL201110269745.4公布了一種乳酸菌微膠囊及其制備方法，雖然提高了益生菌的穩定性和抗逆性，但制備工藝復雜，成本加大，并不適合畜牧業大眾化生產；中國專利ZL201210144048.0公開了一種乳酸菌及其凍干菌粉與應用，雖然能夠提高生長豬的日增重，降低料肉比，但設備成本偏高。目前我國生產益生菌制劑的發酵基料成分中大多有玉米蛋白粉、麩皮、豆柏以及功能性名貴中藥等，雖然能使微生物快速發酵并聚集，但顯然也增加了其生產成本。與此同時，我國是農業大國，每年農產品加工后遺留下的農副產品廢渣，由于富含不能再直接利用的纖維素、木質素、果膠等物質而被廢棄。被譽為“淀粉之王”的木薯，在生產淀粉后留下的木薯渣殘余，每年達30萬噸；大豆生產豆奶或者豆腐后剩下的豆腐廢渣，年產量居然超過2000萬噸；這些數字中還不包括甘蔗渣、菠蘿渣等其他農副產品廢渣。這些廢渣如不加以處理而直接丟棄既造成極大浪費又占土地，而且極易產生腐敗氣味污染周邊環境。利用微生物來發酵降解農副產品廢渣是一研究熱點。中國專利ZL201210155158.7提供了一種混合菌發酵玉米秸桿生產益生菌顆粒飼料的方法，其充分利用了新收割干燥的玉米秸桿資源，并加入麩皮、玉米粉等物質,混入混合菌株進行發酵,但該方法設備成本高,另外由于產品是較大的顆粒狀，很難與其他飼料混勻，造成其適口性不足；中國專利ZL200610123892.X公布了一種采用農副產品開放式曲種固體發酵方法，其產品富 含植物性蛋白飼料原料，但該方法獲得的活菌數偏低，另外雜菌污染率很高，導致產品不穩定。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是克服現有技術益生菌飼料添加劑產品中存在的穩定性差、生產成本高的不足，提供一種制備復合乳酸菌制劑的方法。該方法得到的乳酸菌制劑中的菌株競爭力增強，提高其宿主定植率，而且，該方法能有效利用農副產品廢渣資源，使其成為飼料添加劑成分中的重要組成部分，在一定程度上解決了資源浪費和環境污染等突出問題。本專利技術的另一個目的是提供一種復合乳酸菌制劑的應用。本專利技術通過以下技術方案予以實現上述目的: 一種復合乳酸菌制劑的制備方法，包括以下步驟: 51.將各乳酸菌擴大培養； 52.將SI中各乳酸菌擴大培養后的培養液混合得復合乳酸菌，將復合乳酸菌加入裝有液態培養基料的發酵裝置中，發酵得到發酵菌液；當發酵菌液的PH值為3.2^3.7，活菌總數達5.4 6.2 X IO9 cfu/ml時停止發酵； 53.農副產品廢渣預處理:選取農副產品廢渣，采用質量百分數為0.Γ0.5% HNO3水溶液9(Tl00°C高溫預處理l(T20min，撈起廢渣，降溫至常溫備用； 54.將S3中預處理后的廢渣加入到S2中進行液固態耦聯發酵，同時加入酶制劑輔助酶解，當發酵菌液的PH值為3.Γ3. 4，活菌總數達7.8 8.5 X IO9 cfu/ml時停止發酵，得復合乳酸菌制劑。具體地，SI所述乳酸菌擴大培養的具體步驟為: Sll.各乳酸菌斜面復壯；從各保藏的斜面菌種挑取相應菌落擴培復壯，分別接種于MRS培養基上，于35 40°C培養2Γ72 h，使其處于對數中后期，得復壯菌株；其中，所述的培養基為MRS斜面固體培養基。S12.各乳酸菌搖床培養:將步驟Sll中復壯的乳酸菌株分別用無菌水沖洗下來制成菌懸菌液，接種到裝有改良MRS培養液的三角瓶中，三角瓶編好號，控制溫度40°C，密封培養24 h，制備乳酸菌搖床培養液。S13.各乳酸菌種子罐培養:將步驟S12中搖床培養的菌種分別用生理鹽水沖洗下來制成懸菌液，全部接種到裝有改良MRS培養液的種子罐中，編好號，控制溫度35 °C，密封培養48 h,制備乳酸菌種子培養液。其中，步驟S12和S13中所述的改良MRS培養液成分含量相同:酪蛋白胨10.0 g，牛肉浸取物10.0 g，酵母提取液5.0 g，葡萄糖5.0 g，乙酸鈉5.0 g，檸檬酸二胺2.0 g，吐溫3.2 g，磷酸氫二鉀2.0 g，七水硫酸錳0.05 g，七水硫酸鎂0.2 g，碳酸鈣21 g，瓊脂24g，蒸餾水1000 ml，在彡100 °C下滅菌，隨后降溫到35°C左右，pH 6.8。優選地，S2所述復合乳酸菌為干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌、屎腸球菌或植物乳桿菌中的任意兩種、多種或全部；復合乳酸菌的接種量占發酵培養液總體積的5 10%。優選地，S2中所述發酵的條件為35 40°C，發酵48 72h ；S4中所述發酵的條件為35 40°C，發酵 72 96 h。優選地，S2中所述液態培養基料含有15 30重量份數的發酵基料、8(Γ95重量份數的水和(Γ0.5重量份數的生長促進因子。優選地，所述發酵基料的制備方法為:按重量份數計，將4(Γ60份玉米、2(Γ40份黃豆和1(Γ15份麩皮分別粉碎成廣3 mm，篩片后分別烘炒20 min, 30 min和15min，三者混勻得發酵基料。優選地，所述生長促進因子為木瓜、胡蘿卜、糊精、麥芽糖、酸化酪蛋白水解物、胰蛋白胨、濃縮乳清蛋白、酵母浸膏、低聚麥芽糖、低聚半乳糖或低聚果糖中的一種，多種或者全部。優選地，S3中所述農副產品廢渣為木薯渣、豆腐渣、菠蘿渣或甘蔗渣；廢渣與HNO3水溶液的固液比為1: 12 18。優選地，S4中所述酶制劑為纖維素酶、果膠酶、葡聚糖酶的一種或多種；酶制劑加入量占總發酵總量的0.οΓο.1%。一種如上所述復合乳酸菌制劑的應用，所述應用為將復合乳酸菌制劑直接與生豬日食飼料按1:2 10的比例混合即時飼用；或者將復合乳酸菌制劑與生豬日食飼料混合，使含水量降低到25 35%，并混入0.05%果寡糖，真空包裝儲存備用。本專利技術的有益效果是。(I)本專利技術所制備本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種復合乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S1.將各乳酸菌擴大培養；S2.將S1中各乳酸菌擴大培養后的培養液混合得復合乳酸菌，將復合乳酸菌加入裝有液態培養基料的發酵裝置中，發酵得到發酵菌液；當發酵菌液的pH值為3.2~3.7，活菌總數達5.4~6.2×109?cfu/ml時停止發酵；S3.農副產品廢渣預處理：選取農副產品廢渣，采用質量百分數為0.1~0.5%?HNO3水溶液90~100℃高溫預處理10~20min，撈起廢渣，降溫至常溫備用；S4.將S3中預處理后的廢渣加入到S2中進行液固態耦聯發酵，同時加入酶制劑輔助酶解，當發酵菌液的pH值為3.1~3.4，活菌總數達7.8~8.5×109?cfu/ml時停止發酵，得復合乳酸菌制劑。

【技術特征摘要】
1.一種復合乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 51.將各乳酸菌擴大培養； 52.將SI中各乳酸菌擴大培養后的培養液混合得復合乳酸菌，將復合乳酸菌加入裝有液態培養基料的發酵裝置中，發酵得到發酵菌液；當發酵菌液的PH值為3.2^3.7，活菌總數達5.4 6.2 X IO9 cfu/ml時停止發酵； 53.農副產品廢渣預處理:選取農副產品廢渣，采用質量百分數為0.Γ0.5% HNO3水溶液9(Tl00°C高溫預處理l(T20min，撈起廢渣，降溫至常溫備用； 54.將S3中預處理后的廢渣加入到S2中進行液固態耦聯發酵，同時加入酶制劑輔助酶解，當發酵菌液的PH值為3.Γ3.4，活菌總數達7.8 8.5 X IO9 cfu/ml時停止發酵，得復合乳酸菌制劑。2.根據權利要求1所述復合乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，SI所述乳酸菌擴大培養的具體步驟為: 511.各乳酸菌斜面復壯； 512.各乳酸菌搖床培養； 513.各乳酸菌種子罐培養。3.根據權利要求1所述復合乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，S2所述復合乳酸菌為干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌、屎腸球菌或植物乳桿菌中的任意兩種、多種或全部；復合乳酸菌的接種量占發酵培養液總體積的5 10%。4.根據權利要求1所述復合乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，S2中所述發酵的條件為35 40°C，發酵48 72h ；S4中所述發酵的條件為35...

【專利技術屬性】
技術研發人員：黎小兵，胡杰，楊星，江彬強，黃升科，
申請(專利權)人：廣東壹號食品股份有限公司，
類型：發明
國別省市：