一株枯草芽孢桿菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一株枯草芽孢桿菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用，枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)JUWEI001已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC?NO.7034，保藏時(shí)間為2012年12月24日。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及該枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)方法與應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)篩選的枯草芽孢桿菌JUWEI001抗逆性強(qiáng)，在生長(zhǎng)過(guò)程中可產(chǎn)生豐富的具有高活力和植物病害防治功能的生理活性物質(zhì)，具有促進(jìn)土壤有機(jī)質(zhì)分解，提高土壤控肥能力和土壤酶活性，改善土壤中微生物菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)，抑制有害真菌、細(xì)菌、病毒和菌原體等作用。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一株枯草芽孢桿菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用，屬于微生物

技術(shù)介紹
枯草芽孢桿菌，是芽孢桿菌屬的一種，單個(gè)細(xì)胞，0.7 0.8X2 3微米，著色均勻。無(wú)莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。革蘭氏陽(yáng)性菌，芽孢0.6 0.9X1.0 1.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，常 形成皺醭。需氧菌。可利用蛋白質(zhì)、多種糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遺傳學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，對(duì)此菌的嘌呤核苷酸的合成途徑與其調(diào)節(jié)機(jī)制研究較清楚。廣泛分布在土壤及腐敗的有機(jī)物中，易在枯草浸汁中繁殖。目前對(duì)枯草芽孢桿菌的研究報(bào)道非常多。如中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1554744A(申請(qǐng)?zhí)?00310104195.6)公開(kāi)了一種枯草芽孢桿菌菌株，將其命名為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)B9601-Y2,保藏單位:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏H:2003年6月18日，保藏號(hào):CGMCC N0.0954。該枯草芽孢桿菌B9601-Y2，可用于防治植物不同類型病害及食用菌污染，并能有效地促進(jìn)植物生長(zhǎng)和生根，對(duì)許多土傳植物病原物具有較好的控制作用、兼顧月季切花保鮮作用，能耐貯藏、抗逆性好，重新施入環(huán)境中也不會(huì)導(dǎo)致環(huán)境污染。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102517235A (申請(qǐng)?zhí)?01110443948.0)公開(kāi)了枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CH-001，已于2011年4月8日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。保藏編號(hào)為=CCTCC NO:M2011111o該菌株具有廣譜降解角蛋白的特性，產(chǎn)酶活性高，穩(wěn)定性好。不僅能產(chǎn)生高活性角蛋白酶，同時(shí)可降解膠原蛋白，對(duì)金黃色葡萄球菌等致病菌有拮抗作用，具有益生菌特性，適用于動(dòng)物蛋白飼料添加劑、角蛋白酶發(fā)酵生產(chǎn)等。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102515891A (申請(qǐng)?zhí)?01210003711.5)公開(kāi)了一種微生物肥料，包含下列比例的微生物發(fā)酵液:光合細(xì)菌、乳酸菌、放線菌、康寧木霉菌、枯草芽孢桿菌發(fā)酵液體積比為1: 0.8 1: 1.2 1.4:0.6 0.8:1 1.2。該專利技術(shù)制備的肥料，可以提高肥料的利用效率，并且還能夠起到防治植物枯死、病害的作用。因此研究枯草芽孢桿菌新菌株對(duì)于開(kāi)發(fā)新的微生物肥料具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JUffEIOOl及培養(yǎng)方法與應(yīng)用。本專利技術(shù)技術(shù)方案如下:一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JUWE1001已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC N0.7034，保藏時(shí)間為2012年12月24日，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JUffEIOOl為革蘭氏陽(yáng)性菌，細(xì)胞桿狀，0.8 1.0X 1.2 1.8 μ m，30 35°C培養(yǎng)24 48h可形成大量芽孢，無(wú)伴胞晶體，芽孢大小為0.7 0.9 X 1.0 1.5 μ m，不膨大，長(zhǎng)圓形或圓柱形；在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上30 35°C培養(yǎng)I 3d可大量形成菌落，呈污白色，粗糙有皺褶，不透明，不閃光，蔓延，邊緣不規(guī)則；在肉湯培養(yǎng)基中30 35°C培養(yǎng)24 48h，可在液面形成菌膜，液體內(nèi)部渾濁；營(yíng)養(yǎng)瓊脂穿刺培養(yǎng)時(shí)菌體在表面生長(zhǎng)，底部不生長(zhǎng)；接觸酶反應(yīng)、甲基紅實(shí)驗(yàn)、VP實(shí)驗(yàn)均呈陽(yáng)性，氧化酶反應(yīng)與厭氧培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)呈陰性，可發(fā)酵葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖，可利用檸檬酸鹽、液化明膠、水解淀粉與酪素，硝酸鹽還原反應(yīng)陽(yáng)性。上述枯草芽孢桿菌JUWE1001的培養(yǎng)方法，步驟如下:①將枯草芽孢桿菌JUWE1001接種于牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，在35°C 39°C條件下，培養(yǎng)45 50h ；②挑取菌體接種于玉米粉液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度35°C 39°C，180 200rpm，培養(yǎng)時(shí)間22 26h,制得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液；③以I 5% (w/w)的接種量將步驟②制得的枯草芽孢桿菌JUWEI培養(yǎng)液接種于玉米粉發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵條件為:35 38°C,罐壓:0.05Mpa,通風(fēng)0.8 lvvm,攪拌速度180 200rpm，培養(yǎng)時(shí)間為2 3天，即得。根據(jù)本專利技術(shù)優(yōu)選的，所述步驟①中的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基每百毫升組分如下:牛肉膏0.3g、蛋白胨lg、氯化鈉0.5g、瓊脂2g、pH7.0 7.2 ;根據(jù)本專利技術(shù)優(yōu)選的，所述步驟②中的玉米粉液體培養(yǎng)基每百毫升組分如下:玉米粉 1.5g，豆柏粉 0.9g，磷酸氫二鈉 0.4g，磷酸二氫鉀 0.03g, MgSO40.1%，ρΗ6.8 7.0 ;根據(jù)本專利技術(shù)優(yōu)選的，所述步驟③中的玉米粉發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為重量百分比:玉米粉2.00% (w/w),豆柏粉7.00% (w/w),磷酸氫二鈉0.40% (w/w),磷酸二氫鉀0.03%(w/w), MgSO40.1% (w/w),消泡劑 0.02 0.05% (w/w), ρΗ6.8 7.0。上述試劑如無(wú)特別說(shuō)明，均為本領(lǐng)域常規(guī)市售產(chǎn)品。上述枯草芽孢桿菌JUWE1001在制備微生物有機(jī)肥中的應(yīng)用。有益效果本專利技術(shù)篩選的枯草芽孢桿菌JUWE1001抗逆性強(qiáng)，在生長(zhǎng)過(guò)程中可產(chǎn)生豐富的具有高活力和植物病害防治功能的生理活性物質(zhì)，具有促進(jìn)土壤有機(jī)質(zhì)分解，提高土壤控肥能力和土壤酶活性，改善土壤中微生物菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)，抑制有害真菌、細(xì)菌、病毒和菌原體等作用。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)的技術(shù)方案做進(jìn)一步說(shuō)明，但本專利技術(shù)所保護(hù)范圍不限于此。枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JUWE1001已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC N0.7034，保藏時(shí)間為2012年12月24日，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)， 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。實(shí)施例1枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) JUWE1001已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC N0.7034，保藏時(shí)間為2012年12月24日，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。上述枯草芽孢桿菌JUWE1001由植株根際土壤中分離出的枯草芽孢桿菌原始菌株，經(jīng)過(guò)紫外線誘變(I X IO7個(gè)/ml的菌懸液放于直徑9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)，紫外燈預(yù)熱20min,將培養(yǎng)皿至于磁力攪拌器上并使培養(yǎng)皿在20W紫外燈垂直距離30cm左右，照射150S)篩選出生長(zhǎng)速度快、β-甘露聚糖酶、β葡聚糖酶、蛋白酶和抑菌活性較高的菌株經(jīng)過(guò)平板試驗(yàn)、拮抗試驗(yàn)，篩選出生長(zhǎng)速度快、產(chǎn)酶能力高、抑菌活性較強(qiáng)的菌株。枯草芽孢桿菌JUWE1001為革蘭氏陽(yáng)性菌，細(xì)胞桿狀，0.8 1.0X1.2- 1.8ym,30 35°C培養(yǎng)24 48h可形成大量芽孢，無(wú)伴胞晶體，芽孢大小為0.7 0.9 X 1.0 1.5 μ m,不膨大,長(zhǎng)圓形或圓柱形；在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上30 35°C培養(yǎng)I 3d可大量形成菌落，呈污白色，粗糙有皺褶，不透明，不閃光，蔓延，邊緣不規(guī)則；在肉湯培養(yǎng)基中30 35°C培養(yǎng)24 48h，可在液面形成菌膜，液體內(nèi)部渾濁；營(yíng)本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一株枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)JUWEI001已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC?NO.7034，保藏時(shí)間為2012年12月24日，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。

【技術(shù)特征摘要】
1.一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)JUWE1001已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC N0.7034，保藏時(shí)間為2012年12月24日，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。2.如權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌JUWE1001的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟如下: ①將枯草芽孢桿菌JUWE1001接種于牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，在35°C 39 °C條件下，培養(yǎng)45 50h ； ②挑取菌體接種于玉米粉液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度35°C 39°C，180 200rpm，培養(yǎng)時(shí)間22 26h，制得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液； ③以I 5%(w/w)的接種量將步驟②制得的枯草芽孢桿菌JUWEI培養(yǎng)液接種于玉米粉發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵條件為:35 38°C，罐壓:0.05Mpa,通風(fēng)0.8 lvvm，攪拌速度180 200rpm，培養(yǎng)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：趙欽剛，孫中濤，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：濟(jì)南巨微生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：