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    用多個微生物學指標對生物修復海區進行評價的方法技術

    技術編號:8761191 閱讀:321 留言:0更新日期:2013-06-06 22:57
    本發明專利技術提供一種用多個微生物學指標對生物修復海區進行評價的方法,本發明專利技術應用熏蒸提取-容量分析法測定沉積物樣品的微生物生物量碳,靜態氣室法測定沉積物樣品的微生物基礎呼吸,埋布片法測定沉積物樣品的微生物纖維素分解作用,平板計數法對沉積物樣品進行細菌總數的測定,MPN-PCR方法來進行沉積物樣品硝化細菌的計數,MPN-PCR方法來進行沉積物樣品反硝化細菌的計數,PCR結合DGGE技術進行了微生物群落多樣性分析,并根據上述微生物學指標數據對海區的生物修復效果進行評價。所需儀器設備簡單,測定時間短,可以進行大批量樣品測定,準確性好、穩定性高,能夠滿足對海區的生境修復效果進行評價。

    【技術實現步驟摘要】

    【技術保護點】
    一種用多個微生物學指標對生物修復海區進行評價的方法,該方法包括:微生物生物量碳測定方法,在該測定方法中,從生物修復海區和對照海區取得沉積物樣本,于干燥器中進行熏蒸處理;轉移熏蒸樣品至聚乙烯塑料瓶中,于震蕩機上震蕩浸提,中速定量濾紙過濾,吸取少量濾液于消煮管中,加入重鉻酸鉀?硫酸溶液和濃鹽酸處理后瓷片混勻,消煮爐中煮沸冷卻后轉移至三角瓶中,滴定,計算;微生物基礎呼吸測定方法,在該測定方法中,從生物修復海區和對照海區取得沉積物樣本,均勻平鋪于培養瓶底部,將盛有一定量氫氧化鈉溶液的吸收瓶置于其中密封培養,取出吸收瓶內堿液,滴定,計算;微生物纖維素分解作用測定方法,在該測定方法中,將白布剪成布條置于H2SO4溶液中煮沸除凈淀粉,取出布條洗去多余H2SO4,于烘箱內烘至恒重稱重,分別從生物修復海區和對照海區取得沉積物樣本平鋪于培養皿中,將烘至恒重的布條平鋪其上再將等量沉積物覆蓋其上,培養,計算;細菌總數的測定方法,在該測定方法中,分別稱取生物修復海區和對照海區沉積物樣本,于試管內用滅菌陳海水梯度稀釋,取稀釋樣品置培養基上涂勻,培養,計數;硝化與反硝化細菌MPN?PCR計數方法,在該測定方法中,采用傳統的苯酚?氯仿抽提法對沉積物樣品的細菌總DNA進行粗提,采用寶生物公司的DNA凝膠回收試劑盒對總DNA進行純化,將此DNA進行逐級稀釋,以稀釋后DNA為模板進行PCR擴增,瓊 脂糖凝膠電泳檢測擴增結果,查MPN表,計數;微生物多樣性分析方法,在該測定方法中,采用傳統的苯酚?氯仿抽提法對沉積物樣品的細菌總DNA進行粗提,采用寶生物公司的DNA凝膠回收試劑盒對總DNA進行純化,用特定引物進行巢式PCR反應,反應產物再進行V3區段擴增,擴增結果進行瓊脂糖電泳檢測后直接用于DGGE,采用分析軟件計算電泳條帶灰度值,計算香濃?威爾指數H。...

    【技術特征摘要】

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:樊景鳳郭建麗付慧陳佳瑩韓彥壘袁秀堂
    申請(專利權)人:國家海洋環境監測中心
    類型:發明
    國別省市:

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