一種快速鑒別天花粉類藥材的分子生物學方法技術

本發明專利技術涉及一種鑒別天花粉及其類似品的分子鑒別新方法，在引物設計和退火溫度2個關鍵的環節上實現了大膽的創新。引物設計在天花粉類藥材已知的ITS上進行，長度為20bp左右，遵循一般引物的設計原則。同時，退火溫度也根據多態性條帶的多少進行篩選確定。天花粉的特征鑒別條帶確定為560，960bp條帶，1930，1400，839，715bp等條帶可作為天花粉的輔助鑒別帶。該發明專利技術具有如下優點：①簡單易行。雖然在引物設計上稍增加了難度，但其特異性大大增加，設計2～3個引物即可得到理想的鑒別引物，避免了大量篩選隨機引物的煩惱；②穩定性和重復性好。由于提高了引物的特異性和退火溫度，擴增條帶一般只有1～5條，正品不同產地和不同儲存時間對PCR結果均沒有影響；③提供的信息量大。能對正品及大部分偽品同時進行擴增，從而可以分別建立正品及偽品的標準電泳鑒別圖譜以實現對正、偽品的準確鑒別。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種鑒別天花粉及其類似品的分子鑒別新方法，是根據天花粉核糖體RNA基因中ITS序列設計3個單引物，其PCR反應體系為25μL，其中Tris?HCI(pH?9．0)10mmol·L?1，KC1?50mmol·L?1，Mg2+1.5?mmol·L?1，dNTP各?0.15?mmol·L?1，Taq?1U(promega)，Primer?0.15?μmol·L?1，模板?DNA?50?ng，擴增在?ABI9700上進行，擴增程序為95℃預變性?4?min，接著進行?40個循環：95℃變性30s，50℃退火45s，72℃延伸60s，循環結束后72℃延伸5min。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：郝智慧，鐘英杰，王艷玲，
申請(專利權)人：青島康地恩藥業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：