一種鑒定日本金線魚的分子生物學(xué)方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種鑒定日本金線魚的分子生物學(xué)方法，該方法的主要步驟為：設(shè)計(jì)鱸形目魚類的通用引物對；用通用引物對對常見珍稀鱸形目魚類的DNA樣本進(jìn)行擴(kuò)增測序；依據(jù)測序結(jié)果選出每種常見珍稀鱸形目魚類獨(dú)有的DNA片段；從該DNA片段中篩選出日本金線魚的一條特異引物；用通用引物對中的一條引物與該特異引物配對構(gòu)成日本金線魚的特異引物對；用該引物對對常見珍稀鱸形目魚類的樣本進(jìn)行擴(kuò)增；依據(jù)產(chǎn)物的電泳條帶得到日本金線魚的鑒定標(biāo)準(zhǔn)電泳條帶；將通用引物對和日本金線魚的一條特異引物相混合，構(gòu)成混合引物；采用混合引物對需要鑒別的魚類DNA樣本進(jìn)行擴(kuò)增；依據(jù)產(chǎn)物的電泳條帶與鑒定標(biāo)準(zhǔn)電泳條帶比對，得到樣本的種屬鑒別結(jié)果。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種鑒定日本金線魚的分子生物學(xué)方法，其特征在于它包括兩大步驟：(1)確定日本金線魚的特異引物；(2)日本金線魚種類的鑒定。步驟(1)又包括下面幾個步驟：1.1設(shè)計(jì)并篩選出一對鱸形目魚類的核糖體5.8SrRNA和28SrRNA基因間的轉(zhuǎn)錄間隔子DNA片段的特異引物對作為鱸形目魚類通用引物對，該引物對為：正向引物5′?gtcgatgaagaacgcagcta?3′，反向引物5′?gtcttctttccccgctgatt?3′；1.2用步驟1.1得到的通用引物對，對鱸形目中常見珍稀魚類的DNA模板樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；1.3將步驟1.2得到的常見珍稀鱸形目魚類的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序，根據(jù)測序結(jié)果選出每種常見珍稀鱸形目魚類與其它常見珍稀鱸形目魚類有差異的DNA片段；1.4從步驟1.3中所選出DNA片段區(qū)域內(nèi)，為日本金線魚設(shè)計(jì)并篩選出一條特異引物，該特異引物為：5′?atttgacggcctaagatcta?3′；1.5用步驟1.1所得到的魚類通用引物對中的一條引物與步驟1.4得到的日本金線魚的特異引物配對，構(gòu)成日本金線魚的特異引物對；1.6用步驟1.5所得到的日本金線魚的特異引物對對鱸形目中常見珍稀魚類的DNA模板樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增；1.7將步驟1.6所得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，從日本金線魚的DNA模板樣本中擴(kuò)增得到的產(chǎn)物電泳后能得到顯著的條帶，而對其它常見珍稀鱸形目魚類的DNA模板樣本擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后則沒有明顯的條帶產(chǎn)生，從而得到日本金線魚的鑒定標(biāo)準(zhǔn)電泳條帶。步驟(2)又包括下面幾個步驟：2.1將步驟1.1中所得的通用引物對和步驟1.4中得到的日本金線魚的特異引物相混合，構(gòu)成混合引物；2.2采用步驟2.1所得到的混合引物，對需要鑒別的魚類DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增；2.3將步驟2.2所得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，如需要鑒別的魚類為日本金線魚，則電泳結(jié)果會得到兩條條帶，一條是通用引物擴(kuò)增產(chǎn)物，一條是日本金線魚特異引物擴(kuò)增產(chǎn)物；而其它鱸形目魚類樣本只有一條由通用引物對擴(kuò)增產(chǎn)物的帶，非鱸形目魚類樣本則沒有電泳條帶。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：袁萬安，于曉軍，游翠紅，
申請(專利權(quán))人：汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：