一種鑒定短尾大眼鯛的分子生物學方法技術

本發明專利技術涉及一種鑒定短尾大眼鯛的分子生物學方法，該方法的主要步驟為：設計鱸形目魚類的通用引物對；用通用引物對對常見珍稀鱸形目魚類的DNA樣本進行擴增測序；依據測序結果選出每種常見珍稀鱸形目魚類獨有的DNA片段；從該DNA片段中篩選出短尾大眼鯛的一條特異引物；用通用引物對中的一條引物與該特異引物配對構成短尾大眼鯛的特異引物對；用該引物對對常見珍稀鱸形目魚類的樣本進行擴增；依據產物的電泳條帶得到短尾大眼鯛的鑒定標準電泳條帶；將通用引物對和短尾大眼鯛的一條特異引物相混合，構成混合引物；采用混合引物對需要鑒別的魚類DNA樣本進行擴增；依據產物的電泳條帶與鑒定標準電泳條帶比對，得到樣本的種屬鑒別結果。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種鑒定短尾大眼鯛的分子生物學方法，其特征在于它包括兩大步驟：(1)確定短尾大眼鯛的特異引物；(2)短尾大眼鯛種類的鑒定。步驟(1)又包括下面幾個步驟：1.1設計并篩選出一對鱸形目魚類的核糖體5.8SrRNA和28SrRNA基因間的轉錄間隔子DNA片段的特異引物對作為鱸形目魚類通用引物對，該引物對為：正向引物5′?gtcgatgaagaacgcagcta?3′，反向引物5′?gtcttctttccccgctgatt?3′；1.2用步驟1.1得到的通用引物對，對鱸形目中常見珍稀魚類的DNA模板樣本進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；1.3將步驟1.2得到的常見珍稀鱸形目魚類的PCR擴增產物進行克隆測序，根據測序結果選出每種常見珍稀鱸形目魚類與其它常見珍稀鱸形目魚類有差異的DNA片段；1.4從步驟1.3中所選出DNA片段區域內，為短尾大眼鯛設計并篩選出一條特異引物，該特異引物為：5′?agctaaggcttacgaccctg?3′；1.5用步驟1.1所得到的魚類通用引物對中的一條引物與步驟1.4得到的短尾大眼鯛的特異引物配對，構成短尾大眼鯛的特異引物對；1.6用步驟1.5所得到的短尾大眼鯛的特異引物對對鱸形目中常見珍稀魚類的DNA模板樣本進行PCR擴增；1.7將步驟1.6所得到的PCR擴增產物在瓊脂糖凝膠上進行電泳，從短尾大眼鯛的DNA模板樣本中擴增得到的產物電泳后能得到顯著的條帶，而對其它常見珍稀鱸形目魚類的DNA模板樣本擴增產物電泳后則沒有明顯的條帶產生，從而得到短尾大眼鯛的鑒定標準電泳條帶。步驟(2)又包括下面幾個步驟：2.1將步驟1.1中所得的通用引物對和步驟1.4中得到的短尾大眼鯛的特異引物相混合，構成混合引物；2.2采用步驟2.1所得到的混合引物，對需要鑒別的魚類DNA樣本進行PCR擴增；2.3將步驟2.2所得到的PCR擴增產物在瓊脂糖凝膠上進行電泳，如需要鑒別的魚類為短尾大眼鯛，則電泳結果會得到兩條條帶，一條是通用引物擴增產物，一條是短尾大眼鯛特異引物擴增產物；而其它鱸形目魚類樣本只有一條由通用引物對擴增產物的帶，非鱸形目魚類樣本則沒有電泳條帶。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：袁萬安，于曉軍，游翠紅，
申請(專利權)人：汕頭大學醫學院，
類型：發明
國別省市：