S-扁桃酸脫氫酶與漆酶偶聯反應制備苯乙酮酸和R-扁桃酸的方法技術

本發明專利技術提供一種S-扁桃酸脫氫酶和漆酶偶聯催化S-扁桃酸轉化成苯乙酮酸和R-扁桃酸的方法，該方法特別之處是通過漆酶不斷再生反應媒介，進而不斷再生S-扁桃酸脫氫酶的輔酶FMN，從而將S-扁桃酸脫氫酶和漆酶偶聯起來進行催化反應，這樣，只需要少量的反應媒介，通過充分利用酶催化的高效性，不斷催化氧化S-扁桃酸，提高了單一使用S-扁桃酸脫氫酶的轉化效率，降低了反應成本。本發明專利技術用S-扁桃酸脫氫酶和漆酶兩種酶偶聯催化S-扁桃酸轉化為苯乙酮酸，產物R-扁桃酸的對映體過量值可達99.8％。該法只需少量的亞鐵氰化物或鐵氰化物作為反應媒介，工藝簡單、成本低、環境壓力小、純度高，便于工業化生產，對外消旋扁桃酸的手性拆分具有很大的應用價值。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種通過鐵氰化物或亞鐵氰化物作為偶聯劑將兩種酶偶聯催化S-扁桃酸生成苯乙酮酸的方法，同時實現外消旋扁桃酸手性拆分，具體涉及S-扁桃酸脫氫酶和漆酶的偶聯反應。
技術介紹
S-扁桃酸脫氫酶是一類以黃素FMN為輔酶的氧化還原酶，能專一性催化氧化S-扁桃酸生成苯乙酮酸，其輔酶FMN還原為FMNH2。鐵氰化物可以氧化FMNH2生成FMN和亞鐵氰化物。漆酶是一類包含銅離子的酚氧化酶，其利用氧氣將底物氧化，而氧氣被還原成水，而且漆酶具有底物催化范圍廣的特點，可以催化亞鐵氰化物氧化為鐵氰化物。國外DietmarHaltrich等人曾用纖維二糖脫氫酶和漆酶偶聯生產乳糖酸，但缺乏鐵氰化物作為化學媒介的實驗數據。我們以鐵氰化物作為反應媒介，偶聯漆酶和S-扁桃酸脫氫酶催化的酶反應，進行苯乙酮酸的制備以及外消旋扁桃酸的手性拆分，生產手性扁桃酸，產物R-扁桃酸的對映體過量值可達99.8 %。
技術實現思路
本 專利技術的目的是以亞鐵氰化物或鐵氰化物作為反應媒介，通過漆酶再生輔因子，實現S-扁桃酸脫氫酶和漆酶偶聯催化S-扁桃酸轉化成苯乙酮酸。其反應歷程如下:

【技術保護點】
一種S?扁桃酸脫氫酶與漆酶偶聯反應制備苯乙酮酸和R?扁桃酸的方法，其特征在于所述制備步驟如下：步驟1、將0.1~1?mmol/L亞鐵氰化物或鐵氰化物用pH為3~8的緩沖液溶解后放在容器中；步驟2、加入1~100?mmol/L外消旋扁桃酸，添加10~500活力單位的S?扁桃酸脫氫酶和10~500活力單位的漆酶后，在10~45℃反應。

【技術特征摘要】
1.一種s-扁桃酸脫氫酶與漆酶偶聯反應制備苯乙酮酸和R-扁桃酸的方法，其特征在于所述制備步驟如下: 步驟1、將0.ri mmol/L亞鐵氰化物或鐵氰化物用pH為:T8的緩沖液溶解后放在容器中； 步驟2、加入1 100 mmol/L外消旋扁桃酸，添加10飛00活力單位的S-扁桃酸脫氫酶和10^500活力單位的漆酶后，在1(T45°C反應。2.根據權利要求1所述的S-扁桃酸脫氫酶與漆酶偶聯反應制備苯乙酮酸和R-扁桃酸的方法，其特征在于步驟I中所述的緩沖液為NaH2PO4-檸檬酸緩沖液或Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液。3.根據權利要求1所述的S-扁桃酸脫氫酶與漆酶偶聯反應制備苯乙酮酸和R-扁桃酸的方法，其特征在于步驟I中所述的亞鐵氰化物為亞鐵氰化鉀或亞鐵氰化鈉。4.根據權利要求1所...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李大力，王鵬，楊軍方，楊成麗，
申請(專利權)人：南京理工大學，
類型：發明
國別省市：