一種干酪乳桿菌及其生產(chǎn)胞外多糖的方法技術(shù)

一種干酪乳桿菌及其生產(chǎn)胞外多糖的方法，保藏編號為CGMCC?No.6818。本發(fā)明專利技術(shù)是采用CGMCC?No.6818發(fā)酵生產(chǎn)CGMCC?No.6818，所述胞外多糖產(chǎn)量較高，其組成與現(xiàn)有胞外多糖不同，采用脫脂乳粉培養(yǎng)基，發(fā)酵液中胞外多糖產(chǎn)量可達(dá)831.85mgL。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及。
技術(shù)介紹
乳酸菌產(chǎn)胞外多糖(exopolysaccharide, EPS)是乳酸菌在生長代謝過程中分泌到細(xì)胞壁外的黏多糖或莢膜多糖。大量研究表明，乳酸菌胞外多糖除了可以作為增稠劑、凝膠劑和穩(wěn)定劑等食品添加劑應(yīng)用于食品加工中外，在抗腫瘤、抑菌、消炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等方面起著重要的作用。乳酸菌產(chǎn)胞外多糖作為食品級乳酸菌天然發(fā)酵產(chǎn)物，具有食用安全的天然優(yōu)勢，因此開發(fā)和利用這些具有特定生理功能的乳酸菌胞外多糖成為藥物研究和保健品生產(chǎn)具有極好的經(jīng)濟(jì)效益、社會效益和應(yīng)用前景。作為食用乳酸菌中的一員，干酪乳桿菌在干酪、酸乳等發(fā)酵食品中有著越來越廣泛的應(yīng)用，但據(jù)目前已有文獻(xiàn)報道，干酪乳桿菌胞外多糖的產(chǎn)量較低，一般不超過200mg/L。更高產(chǎn)量的干酪乳桿菌胞外多糖的制備方法未見報道。因此，研制一種制造高產(chǎn)量干酪乳桿菌胞外多糖的方法，可填補(bǔ)該領(lǐng)域空白，具有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供了一種干酪乳桿菌SCJ010，用于發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖。所述干酪乳桿菌SCJ010篩選自然發(fā)酵酸菜汁，已于2012年11月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC N0.6818，建議分類命名為干酪乳桿菌Lactobacillus casei，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。所述胞外多糖分子 量為2.4X IO6Da,由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖和核糖構(gòu)成，上述物質(zhì)摩爾比為205:215:5:5:2:2:1。本專利技術(shù)還提供一種生產(chǎn)上述胞外多糖的方法，是用CGMCC N0.6818發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖。所述生產(chǎn)胞外多糖的方法，是將CGMCC N0.6818接入脫脂乳粉培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖。接入干酪乳桿菌的菌的活菌數(shù)為IO6-1O8個/mL。接入干酪乳桿菌的接種量為3-5%。干酪乳桿菌發(fā)酵溫度為30_34°C，發(fā)酵時間為12-18h，所述發(fā)酵溫度為干酪乳桿菌常用溫度。所述脫脂乳粉培養(yǎng)基組成如下:8_14%脫脂乳粉，4_8%的匍萄糖和2.0-2.8%釀蛋白胨。是將干酪乳桿菌CGMCC N0.6818接種于脫脂乳粉培養(yǎng)基發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)沸水浴后離心，收集上清液，向上清液中加入三氯乙酸，放置一段時間，離心，將上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，再向濃縮后的上清液中加入乙醇，靜置后離心，將沉淀用去離子水溶解，，離心取上清液透析，得透析截留液，真空冷凍干燥制粉，得到干酪乳桿菌胞外多糖。所述透析袋透析截留分子量極限為12000-14000Da。優(yōu)選技術(shù)方案如下:⑴將干酪乳桿菌活化液按體積百分比4%的接種量接種于改進(jìn)的脫脂乳粉培養(yǎng)液中，在30-34°C條件下發(fā)酵12-18h，制得發(fā)酵液；⑵將上述發(fā)酵液在沸水浴中加熱10-15min后，在4°C下以IOOOOg離心20min，收集上清液；⑶向上清液中加入質(zhì)量濃度為800g/L的三氯乙酸至終質(zhì)量濃度為40gL，4°C放置10-12h，IOOOOg離 心20min，收集上清液；⑷將得到的上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，水浴鍋溫度為50-80°C ；(5)濃縮后的上清液中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇至終體積分?jǐn)?shù)為75%，4°C下靜置10-16h，再于 4°C 8000-10000g 離心 15_20min，收集沉淀；(6)將沉淀用去離子水溶解，離心取上清液透析3d，每6_8h換水I次；(7)收集透析截留液，利用真空冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷到干燥制得干酪乳桿菌胞外多糖粉末。干酪乳桿菌胞外多糖含量的測定采用常規(guī)硫酸-苯酚法。①試劑脫脂奶粉培養(yǎng)基:含脫脂奶粉，葡萄糖、酪蛋白胨、Κ2ΗΡ04。80%苯酚:80g苯酚(分析純重蒸餾試劑)加20g水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。6%苯酚:臨用前以80%苯酚配制。(每次測定均需現(xiàn)配)80%三氯乙酸(80%TCA):80g TCA加15g水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。濃硫酸、葡萄糖、甲醇、硼氫化鈉、乙酸酐、吡啶和氯仿:均為分析純。②設(shè)備高速冷凍離心機(jī)、分析天平、分光光度計、500mL容量瓶、250mL三角瓶、IOmL滅菌移液管、ImL滅菌移液管、0.1mL滅菌移液管、酒精燈、離心管。 ③制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖20mg于500mL容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8mL，各以蒸餾水補(bǔ)至2.0mL,然后加入6%苯酚1.0mL及濃硫酸5.0mL，搖勻冷卻，室溫放置20min以后于490nm測光密度，以2.0mL水按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為多糖濃度，縱坐標(biāo)為光密度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如附圖說明圖1所示。④胞外多糖的提取與測定取發(fā)酵液20mL，離心(9960r/min，20min, 4°C )去菌體，取上清液沸水浴lOmin，冷卻至室溫，加80%的三氯乙酸溶液至質(zhì)量濃度為4%，4°C靜置過夜，9960r/min離心20min，取上清液，用去離子水透析3d，每8h換水I次。以相同的方法處理未接種的培養(yǎng)基，作為測定多糖含量的空白對照。吸取0.2ml的樣品液，以蒸餾補(bǔ)至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml，搖勻冷卻室溫放置20min充分進(jìn)行顯色反應(yīng)，之后于490nm測OD值。⑤發(fā)酵液中該多糖含量按如下公式計算:本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種干酪乳桿菌，于2012年11月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.6818。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種干酪乳桿菌，于2012年11月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC N0.6818。2.權(quán)利要求1所述干酪乳桿菌，其特征在于，該菌株分泌的胞外多糖分子量為2.4X IO6Da,由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖和核糖構(gòu)成，上述物質(zhì)摩爾比為 205:215:5:5:2:2:1。3.一種發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖的方法，是用CGMCC N0.6818發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖。4.權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，是將CGMCCN0.6818接入脫脂乳粉培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)胞外多糖。5.權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述脫脂乳粉培養(yǎng)基組成為:8-14%脫脂乳粉，4-8%的葡萄糖和2.0-2.8%酪蛋白胨。6.權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述干酪乳桿菌的活菌數(shù)為IO6-1O8個/mL。7.權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述干酪乳桿菌的接種量為3-5%。8.權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，發(fā)酵溫度為30-34°C，發(fā)酵時間為12-18h。9.權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，將干酪乳桿菌CGMCCN0.6818接種于脫脂乳粉培養(yǎng)基發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)沸...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：唐彥君，劉寧，王辰元，
申請(專利權(quán))人：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：