本發明專利技術涉及一株致病力強、免疫原性好的鴨大腸桿菌，該菌株的保藏編號為CGMCC?No.6831。本發明專利技術還提供一種二聯滅活疫苗，包括有疫苗佐劑和抗原，所述的抗原為保藏編號為CGMCC?No.6831的鴨大腸桿菌和保藏編號為CGMCC?No.6832的鴨疫里默氏桿菌。本發明專利技術制備的鴨大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌二聯滅活疫苗，能夠預防以引起鴨只大腸桿菌性敗血癥的特征病變如心臟或肝臟有纖維素滲出性炎癥、心包膜炎或胸膜發生粘連為特征的鴨大腸桿菌病，并可以預防以神經癥狀、纖維素性心包炎、肝周炎和氣囊炎為特征的鴨傳染性漿膜炎的發生，具有良好的市場推廣前景。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于獸用生物制品
，更具體是涉一種鴨大腸桿菌及其應用，即一株可引起鴨大腸桿菌性敗血癥的特征病變如心臟或肝臟有纖維素滲出性炎癥、心包膜炎或胸膜發生粘連的細菌及其應用。
技術介紹
鴨大腸桿菌病是由致病性鴨大腸桿菌引起，其癥狀常與鴨疫里默氏桿菌感染的癥狀和病變相似，國內教學科研單位常分離鑒定出的血清型有01、02、03、078等。近幾年，國內特別是山東、河南、廣東、福建、廣西等省份隨著肉鴨飼養的快速發展，大腸桿菌病的發生十分頻繁，嚴重危害養鴨業的進一步發展。當前，鴨疫里默氏桿菌對養殖業的危害除直接引起動物發病、死亡外，感染耐過鴨疫里默氏桿菌的鴨因飼料轉化率降低、生長發育遲緩而帶來的間接經濟損失也十分嚴重，鴨疫里默氏桿菌對部分抗菌藥物敏感，但難于清除，尤其是該菌侵入氣囊后，藥物難以到達，由于不合理的用藥方案，鴨疫里默氏桿菌耐藥現象普遍存在，耐藥率高且廣泛，同時造成一定的藥物殘留等問題。因此，研制針對鴨大腸桿菌病及由鴨疫里默氏桿菌引起的鴨傳染性漿膜炎兩種病的二聯疫苗具有廣闊的應用前景。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供了一株鴨大腸桿菌及其應用，即一種可有效防治以引起鴨大腸桿菌性敗血癥的特征病變如心臟或肝臟有纖維素滲出性炎癥、心包膜炎或胸膜發生粘連為特征的鴨大腸桿菌病，同時將篩選出的鴨大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌制成二聯滅活疫苗，為鴨大腸桿菌病及鴨傳染性漿膜炎的預防和治療提供了有效的免疫產品。本專利技術一個方面提供一株致病力強、免疫原性好的鴨大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)EC BYT01，該菌株已于2012年11月15日保藏于北京市朝陽區北辰西路I號院中科院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為 CGMCC N0.6831。本專利技術的鴨大腸桿菌用于制備滅活疫苗。本專利技術提供一種二聯滅活疫苗，包括有疫苗佐劑和抗原，所述的抗原為保藏編號為CGMCC N0.6831的鴨大腸桿菌和保藏編號為CGMCC N0.6832的鴨疫里默氏桿菌。本專利技術制備的鴨大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌二聯滅活疫苗，能夠預防以引起鴨只大腸桿菌性敗血癥的特征病變如心臟或肝臟有纖維素滲出性炎癥、心包膜炎或胸膜發生粘連為特征的鴨大腸桿菌病，并可以預防以神經癥狀、纖維素性心包炎、肝周炎和氣囊炎為特征的鴨傳染性漿膜炎的發生，具有良好的市場推廣前景。具體實施例方式本專利技術對山東、廣東、福建、廣西等地的疑似鴨大腸桿菌病死鴨進行病原分離、鑒定，獲得56株病原為鴨大腸桿菌，對其進行血清型鑒定表明，其中有12株為血清078型；動物回歸及毒力試驗表明EC BYT06株毒力最強，可致鴨只10/10發病且其中7只死亡；免疫原性試驗結果表明，當免疫劑量為0.25mL (抗原含量達到1.0X 108CFU/mL)時即可使攻毒保護達到9/10。以上結果表明，篩選得到一株血清078型鴨大腸桿菌，其致病力最強、免疫原性好、制備的油苗攻毒保護效果好，確定為生產用菌株，該菌株已于2012年11月15日保藏于北京市朝陽區北辰西路I號院中科院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC N0.6831。在本專利技術中，大腸埃希氏菌等同于大腸桿菌，兩者可以互換使用。對疑似鴨疫里默氏桿菌病死鴨進行病原分離、鑒定，獲得38株病原為鴨疫里默氏桿菌，對其進行血清型鑒定表明，其中有7株為血清2型；動物回歸及毒力試驗表明RABYT06株毒力最強，可致鴨只10/10發病且其中5只死亡；免疫原性試驗結果表明，當免疫劑量為0.25mL (抗原含量達到1.0X 108CFU/mL)時即可使攻毒保護達到9/10。以上結果表明，篩選得到一株血清2型鴨疫里默氏桿菌，其致病力最強、免疫原性好、制備的油苗攻毒保護效果好，確定為生產·用菌株，于2012年11月15日保藏于北京市朝陽區北辰西路I號院中科院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCCN0.6832。下面對本專利技術進行詳細的描述。一、鴨大腸桿菌的分離及鑒定:⑴將從山東、廣東、福建、廣西等地收集的病死鴨進行無菌操作，取病死鴨心血、肝或腦組織劃線接種于麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板上，置于37°C培養箱中培養12h，觀察細菌生長特性。結果如下:分離到56株疑似為大腸桿菌。這些菌株在普通營養瓊脂培養基上菌落約1.5毫米左右，有閃光，呈奶油狀；在麥康凱瓊脂上菌落約2毫米左右，圓形，突起，光滑，邊緣整齊，粉紅色。56株分離菌分別命名為RA BYTOURA BYTO2至RA BYT56。⑵取純培養的細菌的單個菌落涂于干凈的載玻片上，然后用革蘭氏染色，鏡檢，觀察其形態特征。革蘭氏染色，為革蘭氏陰性細小桿菌，呈單個或成對分布，偶爾呈鏈狀排列，不運動，無芽胞。⑶取純培養物分別進行葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖、乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、衛矛醇、三糖鐵試驗、M.R.試驗、吲哚試驗、過氧化氫酶試驗、接觸酶試驗、枸椽酸鹽利用試驗、尿素酶試驗、V-P試驗。37°C培養，連續觀察3天。結果表明所得菌株生化反應相似，發酵絕大多數的碳水化合物，不產生硫化氫，三糖鐵試驗、M.R.試驗、吲哚試驗、過氧化氫酶試驗、接觸酶試驗陽性，枸椽酸鹽利用試驗、尿素酶試驗、V-P試驗陰性符合鴨大腸桿菌的生化反應特征。⑷取被檢細菌純培養物用滅菌生理鹽水離心洗滌兩次，稀釋成1.0X IO8CFU/毫升的菌液，作為被檢抗原，121°C高壓2h破壞其莢膜抗原，用標準“O”抗原單因子血清作玻片凝集反應鑒定細菌O抗原種類，以確定其血清型。結果顯示其中12株為血清型078，12株為血清型02，9株為血清型01，5株為血清型088，4株為血清型08，血清型05、027各3株，血清型065、0135各2株，血清型045、010、07、039各I株，血清型078為優勢血清型。(5) 12株血清078型鴨大腸桿菌毒力測定試驗分別取純培養的12株血清078型鴨大腸桿菌單個菌落劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，37°C培養12h，刮取平板上所有菌落混于滅菌生理鹽水中制成細菌懸液，將其濃度稀釋到1.0X 106CFU/mL，以0.5mL/只劑量肌肉注射19日齡健康易感鴨10只，同時設立滅菌生理鹽水注射對照組10只。攻毒后連續觀察10天，每日記錄鴨子的精神、食欲、飲水、糞便、運動及死亡情況，并對死亡鴨進行病理剖檢、細菌分離及鑒定。結果表明，結果表明各菌株的致病性有差別，12株078型菌株中，EC BYTOl株毒力最強，EC BYTOl株接種鴨，40h后部分鴨開始出現精神萎靡，行動遲緩或俯臥不起，10天內10/10發病且其中7只死亡，其余株發病在50h以后，詳見表I ;剖檢可見典型的心包炎、肝周炎、氣囊炎；取心血涂片和肝組織印片經染色后鏡檢，可見短小的小桿菌，單個或成對存在，并能從心血和肝組織在麥康凱平板培養基上分離出接種菌，其生化及培養特征與EC BYTOl株鑒定結果一致，因此本研究選用EC BYTOl株作為疫苗用強毒菌株。并送中科院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC N0.6831。表I 12株血清078型鴨大腸桿菌的毒力測定試驗結果本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一株鴨大腸桿菌，其保藏編號為CGMCC?No.6831。
【技術特征摘要】
1.一株鴨大腸桿菌，其保藏編號為CGMCC N0.6831。2.權利要求1所述的鴨大腸桿菌在制備疫苗中的應用。3.一種二聯滅活疫苗，包括有疫苗佐劑和抗原，所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：蔣皓靜，凌紅麗，叢雁方，蔣貽海，孫海新，
申請(專利權)人：青島康地恩藥業股份有限公司，青島寶依特生物制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
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