使用混合模式層析技術(shù)去除抗體聚集體的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種使用混合模式層析技術(shù)去除抗體聚集體的方法，包括以下步驟：（1）在層析柱中裝填混合模式層析介質(zhì)，該介質(zhì)在空白基質(zhì)表面偶聯(lián)烯丙基的間隔臂，在間隔臂末端偶聯(lián)配基分子正丁胺或芐胺；（2）將待精細純化的抗體樣品流過該層析柱，收集流穿液，得到抗體的單體成份，清洗層析柱，得到聚集體及其他雜質(zhì)，從而實現(xiàn)抗體單體與聚集體的分離。本發(fā)明專利技術(shù)能夠高效率、低成本的大規(guī)模去除抗體的聚集體成份。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種，屬于蛋白質(zhì)層析分離

技術(shù)介紹
近二十年來，蛋白質(zhì)藥物發(fā)展迅速，目前有近百種重組蛋白藥物上市，幾千種處于研發(fā)狀態(tài)。2009年僅美國市場蛋白質(zhì)藥物銷售額已經(jīng)達到了 480億美元，這其中抗體類藥物占了約33%的份額。目前，國際上已經(jīng)有20多種抗體批準進入臨床應用，近200種抗體進入臨床研究，抗體藥物逐漸成為生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要方向。作為大分子蛋白的抗體藥物，由于一些物理的和化學的因素，使其在發(fā)酵、純化以及制劑過程中經(jīng)常有聚集現(xiàn)象發(fā)生(The AAPS Journal, 2006, 8，E572-E579.)。可溶性聚集體不但會使病人產(chǎn) 生免疫反應，甚至會使人對藥物產(chǎn)生免疫耐受性，從而大大降低了藥物的藥效(Journal of Immunotoxicology, 2006, 3, 151-156.)。除此之外,聚集體還會影響抗體藥物的生物活性、穩(wěn)定性以及保存期等，這些問題使得單抗藥物聚集體的控制及其去除成為單抗藥物開發(fā)過程中的一大挑戰(zhàn)(Wei Wang, International Journal ofPharmaceutics, 2005, 289，1-30.)，引起了各國科學家和產(chǎn)業(yè)界的關(guān)注和重視。單抗藥物聚集體的去除主要通過層析過程來完成，層析技術(shù)比如離子交換層析(US Patent 2008/0058507 Al ；US Patent 6, 177, 548 BI)和疏水層析(US Patent2010/0069617 Al)，離子交換和疏水層析能有效的去除聚集體成份，但如果聚集體含量高于10%時，單步IEC或HIC的去除能力非常有限，往往需要多個層析步驟才能有效降低聚集體(Current Pharmaceutical Biotechnology, 2009, 10, 421-426 ；CurrentPharmaceutical Biotechnology, 2009, 10, 427-433.),這樣會使單抗的收率降低,成本增加。Gagnon等人提出采用輕基磷灰石層析技術(shù)來去除聚集體(US Patent 2010/0145029Al ；US Patent 2005/0107594 Al)，該方法去除聚集體的能力很高，可以將60%的聚集體去除到0.1%以下，但是，羥基磷灰石介質(zhì)的使用壽命短，大規(guī)模裝柱困難，且對緩沖液條件要求嚴格，因此并不適合在大規(guī)模生產(chǎn)中使用(Journal of Chromatography A, 2007,1165, 78-85.)。近年來，GE Healthcare公司推出了一種以苯甲基-甲基乙醇胺為配基的Capto Adhere層析介質(zhì)，該介質(zhì)去除聚集體的效果明顯(CN 101318991 A),但據(jù)報道(BioProcess International, 2009, 7(2): 52-56.), Capto Adhere 介質(zhì)的去除效果在很大程度上受樣品上樣量的影響，當上樣量降低時，回收率則明顯下降，其中的影響機理尚不明確。如何有效去除單抗藥物的聚集體，并縮短工藝流程，提高產(chǎn)率，降低生產(chǎn)成本，是實現(xiàn)單抗藥物高質(zhì)量低成本的一個關(guān)鍵問題。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種混合模式層析技術(shù)去除抗體聚集體的方法，使其能夠快速、簡便、低成本、大批量有效的純化抗體蛋白。為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采取如下技術(shù)解決方案: 混合模式層析技術(shù)去除抗體聚集體的方法，包括以下步驟: (1)在層析柱中裝填結(jié)構(gòu)式(I)所示的混合模式層析介質(zhì)；本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
混合模式層析技術(shù)去除抗體聚集體的方法，其特征在于包括以下步驟：（1）在層析柱中裝填結(jié)構(gòu)式（I）所示的混合模式層析介質(zhì)；（2）制備粗純化抗體樣品利用Protein?A親和層析法來獲得粗純化抗體樣品，Protein?A是天然蛋白質(zhì)A或其功能性衍生物；（3）聚集體的去除將粗純化抗體樣品進行緩沖液交換，緩沖液pH值低于抗體蛋白1?3個pH單位，離子強度為2~10mS/cm，開始上樣，樣品流穿后開始收集流穿液，即可得到抗體的單體成份，之后用pH值為2.6緩沖液進行洗脫，洗脫成份即為結(jié)合在柱上的聚集體。2013100026238100001dest_path_image001.jpg

【技術(shù)特征摘要】
1.混合模式層析技術(shù)去除抗體聚集體的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)在層析柱中裝填結(jié)構(gòu)式(I)所示的混合模式層析介質(zhì)；2.根據(jù)權(quán)利要求1所述混合模式層析技術(shù)去除抗體聚集體的方法，其特征在于:所述的空白基質(zhì)是瓊脂糖凝膠、纖維素微球或葡聚糖凝膠。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述混合模式層析技...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：高棟，譚福春，王驪麗，
申請(專利權(quán))人：西北大學，
類型：發(fā)明
國別省市：