一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法技術

本發明專利技術公開了一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法。該方法新穎，操作步驟簡單，成本低廉，可實現對大批量樣品進行同時檢測；靈敏度高，可實現濃度為0.1ng/mL的動物源中沙丁胺醇的檢測，達到我國食品中沙丁胺醇的限量標準，且背景干擾小，可以對食品中沙丁胺醇進行快速篩查和檢測；解決了金標快速檢測卡只能定性或者半定量的問題，克服了色譜法成本高、操作復雜的難題，實現真正意義上的定量檢測，數據真實可靠。本發明專利技術適合于衛生、質監、海關、家畜養殖場、食品企業等單位或個人對動物源性樣品中的沙丁胺醇進行定量檢測，可望成為食品樣品中沙丁胺醇的篩查提供有效的技術手段。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，具體涉及。
技術介紹
沙丁胺醇(Sal)是β興奮劑類物質的一種，可促進畜禽生長。由于β興奮劑類物質易在畜禽臟器中積聚殘留，并可通過食物鏈進入人體，嚴重危害人類健康，歐盟、美國、中國等國家和地區都先后立法禁止在畜禽生產中使用β興奮劑類物質作為飼料添加劑。沙丁胺醇的檢測方法主要有高效液相色譜-質譜聯用法(HPLC-MS)、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)和酶聯免疫吸附法(ELISA)等。在各種檢測方法中，ELISA檢測法適合應用于大批樣品的檢測，該法具有快速、操作簡單和一次檢測樣品量大等優點，而且可以直接用于飼料、尿液、血液樣品進行檢測，但假陽性過高。HPLC和GC/MS方法均需要昂貴的儀器、復雜的樣品處理程序以及專門的操作技能，且比較費時，因此不適合用作大批樣品的檢測。目前，進行檢測時，一般應用ELISA試劑盒進行篩檢，再用其他方法對陽性樣品進行確認，從而可確保檢測結果的可靠性。
技術實現思路
本專利技術旨在克服現有技術的不足，提出，可實現對動物源性樣品中沙丁胺醇的快速、高效的檢測。為了達到上述目 的，本專利技術提供的技術方案為—種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法，包括如下內容在微間隙陣列電極上固定沙丁胺醇-牛血清白蛋白(以下簡稱SAL-BSA)，將動物源性樣品與SAL單克隆抗體混合后加在微間隙陣列電極上，動物源性樣品中的SAL與微間隙陣列電極上的SAL-BSA競爭SAL單克隆抗體；然后依次加入堿性磷酸酶標記的二抗和銀沉積溶液；測定微間隙陣列電極的電導率，再根據微間隙陣列電極的電導率測定動物源性樣品中SAL的濃度。所述方法具體包括如下步驟( I)標準工作曲線制作取等體積的濃度分別為O. lng/mL、0. 5ng/mL、1. 0ng/mL、5. 0ng/mL、25. Ong/mL、125. Ong/mL,250. Ong/mL的SAL標準品，將上述各SAL標準品分別與SAL單克隆抗體混合后加入到微間隙陣列電極上，37°C反應O. 5 1. 5h，SAL標準品SAL單克隆抗體混合物中SAL標準品與SAL單克隆抗體的體積相等，加入的SAL與固定在微間隙陣列電極表面的SAL-BSA競爭SAL單克隆抗體，未反應的SAL單克隆抗體被固定在微間隙陣列電極上，形成BSA-SAL-單抗復合物；然后在微間隙陣列電極上加入與SAL標準品SAL單克隆抗體混合物等體積的稀釋好的堿性磷酸酶標記的二抗，37°C反應25 35min，酶標二抗被固定到電極上，形成BSA-SAL-單抗-二抗復合物；再在微間隙陣列電極上加入銀增強溶液37°C避光反應10 20min，堿性磷酸酶(AP)催化抗壞血酸磷酸酯(AAP)水解生成的抗壞血酸，將Ag+還原成Ag單質，從而增大了微間隙陣列電極的電導率，洗凈吹干后將微間隙陣列電極一端與CHI760B型電化學工作站的工作電極連接，CHI760B型電化學工作站的對電極與CHI760B型電化學工作站的參比電極復合后再與微間隙陣列電極的另一端連接(CHI760B型電化學工作站有三個電極，包括工作電極、對電極、參比電極，微間隙陣列電極只有正、負兩端，因此在檢測的過程中，需要將對電極和參比電極復合，然后與微間隙陣列電極的一端相連)；采用線性掃描伏安法在0-50mV電位范圍檢測，記錄微間隙陣列電極電流隨電位變化的響應曲線，并計算其電導值，所述響應曲線的橫坐標為電壓，縱坐標為電流，電導值=電流/電壓；根據不同濃度的SAL標準品對應的微間隙陣列電極的電導值獲得標準工作曲線，所述標準工作曲線的橫坐標為SAL的濃度，單位為ng/ml，縱坐標為l-S/X，S0為檢測空白樣品的電導值，S為檢測含不同濃度SAL標準品的電導值；(2)檢測動物源性樣品中的SAL :取動物源性樣品，將樣品與其等體積的SAL單克隆抗體混合后加入到微間隙陣列電極上，37°C反應O. 5 1. 5h ;然后在微間隙陣列電極上加入與樣品SAL單克隆抗體混合物等體積的稀釋好的堿性磷酸酶標記的二抗，37°C反應O. 5 1. 5h ;再在微間隙陣列電極上加入銀增強溶液37°C避光反應10 20min，洗凈吹干；將微間隙陣列電極一端與CHI760B型電化學工作站的工作電極連接，CHI760B型電化學工作站的對電極與CHI760B型電化學工作站的參比電極復合后再與微間隙陣列電極的另一端連接；采用線性掃描伏安法在0-50mV電位范圍檢測，記錄微間隙陣列電極電流隨電位變化的響應曲線，并計算其電導值；再根據該電導值與標準工作曲線求得樣品中SAL的濃度。其中，在制作標準工作曲線前對微間隙陣列電極進行預處理用無水乙醇清洗微間隙陣列電極；將微間隙陣列電極浸入IM的NaOH溶液中25 35min，然后用超純水清洗該微間隙陣列電極，吹干；再將微間隙陣列電極浸入SAL-BSA溶液中，4°C過夜后用超純水清洗微間隙陣列電極，吹干，于4°C保存。所述微間隙陣列電極由光刻印刷法制作。所述微間隙陣列電極為叉指式雙電極，其正負電極均為兩個梳形金電極，梳形金電極的梳齒寬為80 120 μ m，優選為100 μ m，梳齒間 隙為15 25 μ m，優選為20 μ m。與現有技術相比，本專利技術的有益效果為(I)方法新穎，操作步驟簡單，成本低廉，可實現對大批量樣品進行同時檢測；(2)靈敏度高，可實現濃度為O.1ng/mL的動物源中沙丁胺醇的檢測，達到我國食品中沙丁胺醇的限量標準，且背景干擾小，可以對食品中沙丁胺醇進行快速篩查和檢測；(3)解決了金標快速檢測卡只能定性或者半定量的問題，克服了色譜法成本高、操作復雜的難題，實現真正意義上的定量檢測，數據真實可靠；在國內外首次將該技術應用于食品、環境等領域的檢測，特別適用于食品安全檢測機構和監管部門的檢測。本專利技術適合于衛生、質監、海關、家畜養殖場、食品企業等單位或個人對動物源性樣品中的沙丁胺醇進行定量檢測，可望成為食品樣品中沙丁胺醇的篩查提供有效的技術手段。附圖說明圖1是微間隙陣列電極結構示意圖，黑色封閉區域為金線，圖中數值單位為mm ；圖2為微間隙陣列電極中單個電極放大后的示意圖，梳齒寬lOOum，梳齒間隙20um,電極孔徑2. 9mm ；圖3為SAL的響應曲線，橫坐標為電壓V，縱坐標為電流A，電導=電流/電壓，單位西門子S ；圖4為SAL的標準工作工作曲線圖，橫坐標為SAL的濃度(ng/ml，縱坐標為1_S/Stl，其中Stl為檢測空白樣品的電導，S為檢測含不同濃度沙丁胺醇樣品的電導，單位％。具體實施例方式實施例1·，包括如下步驟( I)對微間隙陣列電極進行預處理用無水乙醇清洗微間隙陣列電極三次，每次Imin ;將微間隙陣列電極浸入IM的NaOH溶液中30min，然后用超純水清洗該微間隙陣列電極三次，每次lmin，吹干；再將微間隙陣列電極浸入SAL-BSA溶液中，4°C過夜后用超純水清洗微間隙陣列電極三次，吹干，于4°C保存；其中，所述微間隙陣列電極由光刻印刷法制作，所述微間隙陣列電極的正負電極均為兩個梳形金電極，彼此交叉形成微間隙陣列電極，梳形金電極的梳齒寬為100 μ m，梳齒間隙為20 μ mo(2)標準工作曲線制作取濃度分別為O. lng/mL、0. 5ng/mL、l. 0ng/mL、5. 0ng/mL本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法，其特征在于，所述方法為：在微間隙陣列電極上固定SAL?BSA，將動物源性樣品與SAL單克隆抗體混合后加在微間隙陣列電極上，動物源性樣品中的SAL與微間隙陣列電極上的SAL?BSA競爭SAL單克隆抗體；然后依次加入堿性磷酸酶標記的二抗和銀沉積溶液；測定微間隙陣列電極的電導率，再根據微間隙陣列電極的電導率測定動物源性樣品中SAL的濃度。

【技術特征摘要】
1.一種基于微間隙陣列電極檢測動物源性樣品中沙丁胺醇的方法，其特征在于，所述方法為在微間隙陣列電極上固定SAL-BSA，將動物源性樣品與SAL單克隆抗體混合后加在微間隙陣列電極上，動物源性樣品中的SAL與微間隙陣列電極上的SAL-BSA競爭SAL單克隆抗體；然后依次加入堿性磷酸酶標記的二抗和銀沉積溶液；測定微間隙陣列電極的電導率，再根據微間隙陣列電極的電導率測定動物源性樣品中SAL的濃度。2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟(1)標準工作曲線制作a)取等體積的濃度分別為O. lng/mL、0. 5ng/mL、l. 0ng/mL、5. 0ng/mL、25. Ong/mL、 125. Ong/mL、250. Ong/mL的SAL標準品，將上述各SAL標準品分別與SAL單克隆抗體混合后加入到微間隙陣列電極上，37°C反應O. 5 1. 5h，SAL標準品SAL單克隆抗體混合物中SAL 標準品與SAL單克隆抗體的體積相等；b)然后在微間隙陣列電極上加入與SAL標準品SAL單克隆抗體混合物等體積的稀釋好的堿性磷酸酶標記的二抗，37°C反應25 35min ；c)再在微間隙陣列電極上加入銀增強溶液37°C避光反應10 20min，洗凈吹干；d)將微間隙陣列電極一端與CHI760B型電化學工作站的工作電極連接，CHI760B型電化學工作站的對電極與CHI760B型電化學工作站的參比電極復合后再與微間隙陣列電極的另一端連接；e)采用線性掃描伏安法在0-50mV電位范圍檢測，記錄微間隙陣列電極電流隨電位變化的響應曲線，并計算其電導值，所述響應曲線的橫坐標為電壓，縱坐標為電流，電導值= 電流/電壓;f)根據...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉佩，付冠艷，楊麗霞，李樂，劉彥哲，彭新凱，蔣健暉，
申請(專利權)人：長沙市食品質量安全監督檢測中心，湖南省食品安全生產工程技術研究中心，
類型：發明
國別省市：