本發(fā)明專利技術涉及一種重組抑制素疫苗，其特征在于：它是由油相制劑和水相制劑按照2:1的體積比混合而成的油乳劑，油相制劑由司本80、司本85和10號礦物油組成，其中含4％的司本80、2％的司本85；水相制劑由滅菌吐溫80和重組抑制素α亞基蛋白和無菌蒸餾水組成，所述的重組抑制素α亞基蛋白由表達載體pREST-INH，經大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)表達并純化后獲得，水相制劑中重組抑制素α亞基蛋白的含量為0.5~10mg/mL，滅菌吐溫80的含量為4％。制備時將油相制劑和備用的水相制劑按照2:1的體積比混合，獲得重組抑制素疫苗。應用中對雌性家畜肌肉注射后，通過重組抑制素α亞基蛋白的免疫提高家畜繁殖力。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及一種抑制素疫苗及其制備方法和應用，涉及一種促進家畜發(fā)情及提高家畜繁殖力疫苗及其制備方法和應用，屬于動物繁殖學領域。
技術介紹
家畜繁殖力的高低直接影響到養(yǎng)殖和畜牧業(yè)的經濟效益。部分家畜受到夏季高溫應激、泌乳、舍飼環(huán)境、季節(jié)及管理等因素的影響，導致下丘腦-垂體-性腺調節(jié)軸的調節(jié)機能紊亂，使垂體不能分泌足夠的促性腺激素以促進卵泡發(fā)育成熟并排卵，致使卵巢處于相對靜止狀態(tài)，而使得其表現(xiàn)為乏情而導致繁殖性能的下降。目前，在實際生產中，多采用外源激素(如促性腺激素、雌激素和前列腺素等)進行處理，以促進母畜卵泡發(fā)育并表現(xiàn)發(fā)情，然后進行配種使之完成繁殖活動。然而以上三種應用較廣泛的激素，其作用機制較簡單或作用環(huán)節(jié)較少，如促性腺類激素只能影響卵泡發(fā)育并且因為半衰期短而持續(xù)時間較短而對動物受胎率的提高或保持較少，雌激素和前列腺素類則幾無促進繁殖活動的功能。因此，動物繁殖研究人員在不斷進行研究以開發(fā)新穎生殖調控新技術和新產品，希望以較為簡單的程序很好地促進性腺活動、發(fā)情、配種、胚胎發(fā)育、生殖道發(fā)育使胚胎著床受胎，從而提高動物的繁殖性能。大量研究表明，母畜的卵泡發(fā)育是由促性腺激素促進的，同時也受到但一些局部調節(jié)因子的影響。例如，抑制素(INH)-活化素(ACT)-卵泡抑素(FS)系統(tǒng)是參與卵泡發(fā)育調節(jié)的重要的卵巢內局部調控因子。排卵前期優(yōu)勢卵泡分泌的大量抑制素(INH)通過負反饋機制抑制垂體FSH的分泌，抑制素和卵泡抑素同時也具有直接抑制小卵泡或后進卵泡的發(fā)育。通過主動或被動免疫抑制素中和內源性抑制素的生物活性，則可以一方面促進FSH的分泌，另一方面又去除抑制素對發(fā)育中卵泡的抑制或損害。因此，之前人們的研究發(fā)現(xiàn)，主動免疫抑制素后，通過促進卵泡發(fā)育促進卵泡分泌更多雌二醇(E2)，從而使母畜發(fā)情表現(xiàn)更為旺盛，發(fā)育良好的卵泡在排卵后轉化為高質量的黃體并分泌高水平的孕酮(P4)。發(fā)情時主水平的E2影響雌性生殖道內環(huán)境，有助于精子的運行和精卵的結合。排卵后黃體發(fā)育分泌的孕酮，則進一步通過對子宮內分泌環(huán)境的影響，促進胚胎的發(fā)育。而且，我們的研究還發(fā)現(xiàn)，抗抑制素抗體能夠促進體外成熟的卵子使之在受精之后發(fā)育為質量更高的胚胎。而以上各方面事件，都有助于提高動物配種的受胎率，也即提高動物的繁殖性能。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的在于，提供一種能夠促進雌性家畜發(fā)情及提高家畜繁殖力的重組抑制素疫苗及其制備方法和應用。本專利技術的目的是這樣實現(xiàn)的一種重組抑制素疫苗，其特征在于它是由油相制劑和水相制劑按照2:1的體積比混合而成的油乳劑，油相制劑由司本80、司本85和10號礦物油組成，其中含4%的司本80、2%的司本85 ;水相制劑由滅菌吐溫80、重組抑制素α亞基蛋白和滅菌水組成，所述的重組抑制素α亞基蛋白由表達載體pREST-1NH，經大腸桿菌表達菌株BL21 (DE3)表達并純化后獲得，水相制劑中含4%的滅菌吐溫80。在本專利技術中疫苗中重組抑制素α亞基蛋白的含量為2mg/mL或lmg/mL或O. 5mg/mL 或 O. 25mg/mL。一種上述重組抑制素疫苗的制備方法，其特征在于 a)4%的司本80、2%的司本85與10號礦物油勻漿機上3000rpm混合20分鐘，121 °C條件下高壓滅菌，獲得油相制劑，備用； b)由表達載體pREST-1NH，經大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)表達并純化獲得重組抑制素α亞基蛋白，將吐溫80在121°C條件下滅菌15分鐘，取無菌蒸餾水、滅菌后的吐溫80以及重組抑制素α亞基蛋白在勻漿機上3000rpm，20分鐘混勻后形成水相制劑，備用；水相制劑中重組抑制素α亞基蛋白的含量為O. 5 10mg/mL，滅菌吐溫80的含量為4% ； c)將備用的油相制劑和備用的水相制劑按照2:1的體積比混合，具體步驟是先將油相制劑置于勻漿機3000rpm中混勻，混勻過程中逐步加入備用的水相制劑，待全部水相制劑加入后繼續(xù)混勻20分鐘；獲得重組抑制素疫苗，該疫苗中重組抑制素α亞基蛋白的含量為 2mg/mL 或 lmg/mL 或 O. 5mg/mL 或 O. 25mg/mL。一種上述重組抑制素疫苗的應用，其特征在于對雌性家畜肌肉注射后，通過重組抑制素α亞基蛋白的免疫提高家畜繁殖力。在所述重組抑制素疫苗的應用中所述的雌性家畜為母豬或母羊或母水牛。本專利技術的優(yōu)點在于采用本專利技術所提供的方法，利用重組抑制素免疫后，能夠有效地治療頑固不發(fā)情的種母畜，可以促使母畜的發(fā)情，顯著地提高母畜發(fā)情率及發(fā)情表現(xiàn)，用于解決母畜的發(fā)情推遲或 者不發(fā)情的問題，利用本專利技術技術可以大幅降低人力物力的消耗，降低生產成本，并產生了極大的經濟效益和社會效應。附圖說明圖1為重組抑制素疫苗誘導乏情母豬發(fā)情示意圖。圖中，實線為免疫組，虛線為對照組；上方的箭頭表示肌肉注射的時間，分別表示實驗開始第I天、第21天和第42天。具體實施例方式實施例1 重組抑制素疫苗的制備 材料 司本80、司本85、10號礦物油、吐溫80 (以上材料均外購)，無菌蒸餾水。重組抑制素α亞基蛋白由表達載體pREST-1NH，經大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)表達并純化。制備過程 4%的司本80、2%的司本85與10號礦物油勻漿機上3000rpm混合20分鐘，121°C條件下高壓滅菌15分鐘，獲得油相制劑備用；由表達載體pREST-1NH，經大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)表達并純化獲得重組抑制素α亞基蛋白，將吐溫80在121°C條件下滅菌15分鐘，取無菌蒸餾水、滅菌后的吐溫80和重組抑制素α亞基蛋白在勻漿機上3000rpm，20分鐘混勻形成水相制劑，水相制劑中的重組抑制素α亞基蛋白含量為O. 5 10mg/mL，滅菌吐溫80的含量為4%，備用。將備用的油相制劑和備用的水相制劑按照2:1的體積比混合，具體步驟是先將油相制劑置于勻漿機3000rpm中混勻，混勻過程中逐步加入備用的水相制劑，待全部水相加入后繼續(xù)混勻20分鐘。獲得重組抑制素疫苗。重組抑制素疫苗中重組抑制素α亞基蛋白的含量為2mg/mL或lmg/mL或O. 5mg/mL或O. 25mg/mL(通過改變水相制劑中的重組抑制素α亞基蛋白的含量來改變重組抑制素疫苗中的含量)。實施例2 重組抑制素誘導乏情母豬發(fā)情 免疫組 試劑藥品重組抑制素疫苗(重組抑制素疫苗中重組抑制素α亞基蛋白的含量為O. 5mg/mL和O. 25mg/mL,由實施例1提供) 對照組 試劑藥品注射用生理鹽水(外購) 實驗過程 選擇體況發(fā)育情況相似因夏季高溫天氣而導致長時間頑固不發(fā)情的成年乏情母豬18頭，隨機分為兩組，每組9頭。設計對免疫組的母豬每隔三周肌肉注射一次重組抑制素疫苗，第一次使用O. 5mg/mL的疫苗lm`L，第二次和第三次使用O. 25mg/mL的疫苗ImL量相同。對照組每隔三周肌肉注射一次注射用生理鹽水，每次lmL。注射后，免疫組和對照組出現(xiàn)發(fā)情個體，即進行配種，剩余不發(fā)情群體，繼續(xù)進行疫苗注射。誘導乏情母豬發(fā)情過程見圖1，圖中上方的箭頭表示肌肉注射的時間，分別為實驗開始第I天、第21天和第42天。由圖1可見，免疫組的9頭母豬肌肉注射f 2次重組抑制素疫苗，發(fā)情率就達到100%。對照組9頭豬中完成三次肌肉注射后，只有3頭發(fā)情，發(fā)情率僅為33本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種重組抑制素疫苗，其特征在于：它是由油相制劑和水相制劑按照2:1的體積比混合而成的油乳劑，油相制劑由司本80、司本85和10號礦物油組成，其中含4％的司本80、2％的司本85；水相制劑由滅菌吐溫80和重組抑制素α亞基蛋白和無菌蒸餾水組成，所述的重組抑制素α亞基蛋白由表達載體pREST?INH，經大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)表達并純化后獲得，水相制劑中重組抑制素α亞基蛋白的含量為0.5~10mg/mL，滅菌吐溫80的含量為4％。
【技術特征摘要】
1.一種重組抑制素疫苗，其特征在于它是由油相制劑和水相制劑按照2:1的體積比混合而成的油乳劑，油相制劑由司本80、司本85和IO號礦物油組成，其中含4 %的司本80、2%的司本85 ;水相制劑由滅菌吐溫80和重組抑制素a亞基蛋白和無菌蒸餾水組成，所述的重組抑制素a亞基蛋白由表達載體pREST-1NH，經大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)表達并純化后獲得，水相制劑中重組抑制素a亞基蛋白的含量為0.5 10mg/mL，滅菌吐溫80的含量為4%。2.根據權利要求1所述的重組抑制素疫苗，其特征在于重組抑制素疫苗中重組抑制素a亞基蛋白的含量為2mg/mL或lmg/mL或0. 5mg/mL或0. 25mg/mL。3.—種權利要求1所述重組抑制素疫苗的制備方法，其特征在于 a)4%的司本80、2%的司本85與10號礦物油勻漿機上3000rpm混合20分鐘，121°C條件下高壓滅菌15分鐘，獲得油相制劑，備用； b)由表達載體pREST-1NH，經大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)表...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：施振旦，孫愛東，李輝，
申請(專利權)人：江蘇省農業(yè)科學院，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。