本發(fā)明專利技術(shù)提供了誘導(dǎo)未成熟樹突細(xì)胞(DC)成熟以及致敏這些細(xì)胞以誘導(dǎo)1型免疫應(yīng)答的組合物和方法。本發(fā)明專利技術(shù)還提供了可用于激活及用于制備朝產(chǎn)生1型細(xì)胞因子和/或1型應(yīng)答極化的T細(xì)胞的樹突細(xì)胞群。同樣地，提供了激活的、極化的T細(xì)胞群以及制備它們的方法。（*該技術(shù)在2022年保護(hù)過期，可自由使用*）
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
引發(fā)單核樹突細(xì)胞和T細(xì)胞TH-1應(yīng)答的組合物和方法本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2002年9月6日、申請(qǐng)?zhí)枮?2819817. 4、專利技術(shù)名稱為“引發(fā)單核樹突細(xì)胞和T細(xì)胞TH-I應(yīng)答的組合物和方法”的專利技術(shù)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。專利技術(shù)背景 抗原呈遞細(xì)胞(APC)在引發(fā)有效的免疫應(yīng)答方面很重要。它們不僅將抗原呈遞給具有抗原特異性T細(xì)胞受體的T細(xì)胞，而且提供T細(xì)胞激活所必需的信號(hào)。這些信號(hào)仍未完全解釋清楚，但包括許多細(xì)胞表面分子以及細(xì)胞因子或生長因子。原初或未極化T細(xì)胞激活所必需的因子可能與記憶T細(xì)胞再激活所必需的因子有所不同。APC呈遞抗原和遞送T細(xì)胞激活信號(hào)的能力通常被描述為輔佐細(xì)胞功能。雖然單核細(xì)胞和B細(xì)胞已被證明是感受態(tài)(competent)的APC，但它們?cè)隗w外的抗原呈遞能力似乎局限于先前致敏T細(xì)胞的再激活。因此，它們不能夠在功能上直接地激活原初或未致敏T細(xì)胞群。樹突細(xì)胞(DC)是被認(rèn)為能夠激活原初和記憶T細(xì)胞的免疫系統(tǒng)中的專職抗原呈遞細(xì)胞。越來越多的離體制備樹突細(xì)胞用于免疫治療，特別是癌癥的免疫治療。制備具有最佳免疫刺激性質(zhì)的樹突細(xì)胞需要理解并運(yùn)用這些細(xì)胞離體培養(yǎng)的生物學(xué)。培養(yǎng)這些細(xì)胞的多種方案已有描述，并附有各方案的多種優(yōu)點(diǎn)。近來的方案包括無血清培養(yǎng)基的利用，以及賦予培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)定的免疫刺激性質(zhì)的成熟條件的使用。樹突細(xì)胞的成熟是將表型上與皮膚朗格漢斯細(xì)胞(Langerhans cell)相似的未成熟DC轉(zhuǎn)化為成熟的、能夠遷移到淋巴結(jié)的抗原呈遞細(xì)胞的過程。這個(gè)過程導(dǎo)致未成熟樹突細(xì)胞所特有的強(qiáng)抗原攝取能力的喪失，以及共刺激細(xì)胞表面分子和多種細(xì)胞因子表達(dá)的上調(diào)。已知的成熟方案是以據(jù)信DC在暴露于抗原期間或之后所遇到的體內(nèi)環(huán)境為基礎(chǔ)的。這個(gè)方法最好的例子是使用單核細(xì)胞條件性培養(yǎng)基(MCM)作為細(xì)胞培養(yǎng)基。MCM通過培養(yǎng)單核細(xì)胞體外產(chǎn)生，并用作為成熟因子的來源。MCM中參與成熟的主要成分據(jù)報(bào)道是(原)炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素10 (IL-1 P )、白細(xì)胞介素6 (IL-6)以及腫瘤壞死因子a (TNFx)。其它成熟因子包括前列腺素E2(PGE2)、多聚-dldC、血管活性腸肽(VIP)、細(xì)菌脂多糖(LPS)以及分枝桿菌或分枝桿菌成分，例如特定胞壁組份。完全成熟的樹突細(xì)胞在質(zhì)量上和數(shù)量上都不同于未成熟DC。完全成熟的DC表達(dá)較高水平的MHC I類和II類抗原，以及T細(xì)胞共刺激分子，即⑶80和⑶86。這些變化增強(qiáng)了樹突細(xì)胞激活T細(xì)胞的能力，因?yàn)樗鼈兺ㄟ^T細(xì)胞共刺激分子對(duì)應(yīng)物，例如象CD28，增加了細(xì)胞表面的抗原密度以及T細(xì)胞激活信號(hào)的數(shù)量級(jí)。此外，成熟DC產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，其刺激并指導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答。其中的兩個(gè)細(xì)胞因子是白細(xì)胞介素IO(IL-IO)和白細(xì)胞介素12(IL-12)。這些細(xì)胞因子對(duì)誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答方向具有相反的影響。IL-10產(chǎn)物導(dǎo)致誘導(dǎo)Th-2型應(yīng)答，而IL-12產(chǎn)物導(dǎo)致Th-I型應(yīng)答。后一種應(yīng)答在期望細(xì)胞免疫應(yīng)答的情況下，例如，舉例來說，在癌癥免疫療法中尤為需要。Th-I型應(yīng)答導(dǎo)致細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的誘導(dǎo)和分化，它們是細(xì)胞免疫系統(tǒng)的效應(yīng)臂(effector arm)。該效應(yīng)臂在抵抗腫瘤生長方面最為有效。IL-12也誘導(dǎo)天然殺傷(NK)細(xì)胞的生長，并具有抗血管生成活性，這兩者都是有效的抗腫瘤武器。因此，利用產(chǎn)生IL-12的樹突細(xì)胞在理論上最適用于免疫刺激。某些樹突細(xì)胞成熟因子，例如，舉例來說，細(xì)菌脂多糖、細(xì)菌CpGDNA、雙鏈RNA和⑶40配體據(jù)報(bào)道誘導(dǎo)未成熟DC產(chǎn)生IL-12并致敏未成熟DC產(chǎn)生Th-I型應(yīng)答。相反，抗炎分子例如IL-10、TGF-P、PGE-2和皮質(zhì)類固醇抑制IL-12產(chǎn)生，并致敏細(xì)胞產(chǎn)生Th_2型應(yīng)答。最近報(bào)道通過干擾素Y與某些樹突細(xì)胞成熟因子，例如細(xì)菌脂多糖(LPS)和⑶40的組合增進(jìn)樹突細(xì)胞的IL-12產(chǎn)生。不過，LPS和CD40都具有在成熟期間誘導(dǎo)小量IL-12的已知能力。因此，有可能添加IFNy僅僅是增進(jìn)產(chǎn)生。干擾素Y信號(hào)傳導(dǎo)利用Jak2-Statl途徑，包括它在遷往細(xì)胞核之前Statl701位酪氨酸殘基的酪氨酸磷酸化以及繼發(fā)的干擾素Y響應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)。不過，對(duì)人單核細(xì)胞來源的樹突細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑知之甚少。干擾素Y在這些細(xì)胞中的作用機(jī)制尚未確定。目前稱為卡介苗(BCG)的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)的減毒牛菌株(牛分枝桿菌Mycobacterium bovis)已被用于癌癥免疫療法。在一個(gè)例子中，膀胱內(nèi)給藥活BCG被證明可有效治療膀胱癌，盡管這種治療的機(jī)制尚不知曉。BCG給藥的效果被假定是通過誘導(dǎo)攻擊，例如，癌細(xì)胞的免疫應(yīng)答介導(dǎo)的。BCG在這一應(yīng)答中的特定作用被認(rèn)為是廣義免疫反應(yīng)誘導(dǎo)子的作用，而且具有將腫瘤抗原呈遞給免疫系統(tǒng)的佐劑功能。還發(fā)現(xiàn)BCG是樹突細(xì)胞的強(qiáng)有力成熟因子，具有上調(diào)成熟標(biāo)志⑶83的能力。BCG還能夠上調(diào)MHC分子以及共刺激分子⑶80和⑶86，伴隨著內(nèi)吞能力的下降。此外，已報(bào)道BCG或BCG-來源的脂阿拉伯甘露聚糖(Iipoarabidomannan)增進(jìn)細(xì)胞因子的產(chǎn)生,雖然與其它DC成熟因子所發(fā)現(xiàn)的結(jié)果相反，發(fā)現(xiàn)IL-12的產(chǎn)生是被特異性抑制的。后面的這種性質(zhì)，即抑制IL-12產(chǎn)生，降低了利用BCG來成熟樹突細(xì)胞，用于期望強(qiáng)烈細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性應(yīng)答(Th-I應(yīng)答)的免疫療法的吸引力。因此，BCG在主動(dòng)免疫療法中的應(yīng)用，具有誘導(dǎo)樹突細(xì)胞成熟的潛力。不過，(仍然)需要誘導(dǎo)這種樹突細(xì)胞成熟、同時(shí)又提供廣泛免疫刺激，并致敏那些樹突細(xì)胞產(chǎn)生具有強(qiáng)烈細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答的I型(Th-I)免疫應(yīng)答的組合物和利用這種組合物的方法。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)提供了利用同時(shí)提供廣泛免疫刺激的因子(即BCG)，誘導(dǎo)未成熟樹突細(xì)胞(DC)成熟，并致敏那些細(xì)胞產(chǎn)生抗原特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答的方法和組合物。在一方面，提供了產(chǎn)生成熟樹突細(xì)胞群的方法，包括提供未成熟樹突細(xì)胞；并使未成熟樹突細(xì)胞與有效濃度的BCG和干擾素Y (IFNy)在適于未成熟樹突細(xì)胞成熟的培養(yǎng)條件下接觸，以形成成熟樹突細(xì)胞群。成熟樹突細(xì)胞群比在成熟期間未與BCG和IFNy接觸的未成熟樹突細(xì)胞群產(chǎn)生升高的白細(xì)胞介素12:白細(xì)胞介素10比例。未成熟樹突細(xì)胞在與BCG和IFNy接觸之前或期間可與預(yù)定抗原接觸。預(yù)定抗原可以是，例如，腫瘤特異性抗原、腫瘤相關(guān)抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原、腫瘤細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、表達(dá)抗原的重組細(xì)胞、細(xì)胞裂解物、膜制備物、重組制備的抗原、肽抗原(如，合成的肽抗原)或者分離的抗原。在某些實(shí)施方案中，該方法可選地進(jìn)一步包括分離單核樹突細(xì)胞前體；并在分化因子存在下培養(yǎng)該前體，以形成未成熟樹突細(xì)胞。合適的分化因子包括，例如，GM-CSF、白細(xì)胞介素4、GM-CSF和白細(xì)胞介素4的組合、或者白細(xì)胞介素13。單核樹突細(xì)胞前體可以分離自人類受試者。在特別的實(shí)施方案中，成熟樹突細(xì)胞產(chǎn)生的IL-12: IL-10的比例為至少1:1。在另一方面，提供了制備成熟樹突細(xì)胞群的方法。該方法一般包括提供未成熟樹突細(xì)胞；并使未成熟樹突細(xì)胞與有效量的BCG和干擾素Y (IFNy)在適于未成熟樹突細(xì)胞成熟的培養(yǎng)條件下接觸，以形成成熟樹突細(xì)胞群。所得的成熟樹突細(xì)胞群產(chǎn)生I型免疫應(yīng)答。未成熟樹突細(xì)胞在與本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
在動(dòng)物中產(chǎn)生1型免疫應(yīng)答的組合物，其包含：產(chǎn)生比白細(xì)胞介素10多的白細(xì)胞介素12的激活的T細(xì)胞，其中通過以下步驟體外產(chǎn)生激活的T細(xì)胞：提供未成熟樹突細(xì)胞；使未成熟樹突細(xì)胞與有效量的卡介苗和干擾素γ以及預(yù)定抗原在適于未成熟樹突細(xì)胞成熟的培養(yǎng)條件下接觸以形成成熟樹突細(xì)胞群；使成熟樹突細(xì)胞與原初T細(xì)胞接觸，以形成產(chǎn)生比白細(xì)胞介素10多的白細(xì)胞介素12的激活的T細(xì)胞。
【技術(shù)特征摘要】
2001.09.06 US 60/317,5921.在動(dòng)物中產(chǎn)生I型免疫應(yīng)答的組合物，其包含 產(chǎn)生比白細(xì)胞介素10多的白細(xì)胞介素12的激活的T細(xì)胞，其中通過以下步驟體外產(chǎn)生激活的T細(xì)胞 提供未成熟樹突細(xì)胞； 使未成熟樹突細(xì)胞與有效量的卡介苗和干擾素Y以及預(yù)定抗原在適于未成熟樹突細(xì)胞成熟的培養(yǎng)條件下接觸以形成成熟樹突細(xì)胞群； 使成熟樹突細(xì)胞與原初T細(xì)胞接觸，以形成產(chǎn)生比白細(xì)胞介素10多的白細(xì)胞介素12的激活的T細(xì)胞。2.權(quán)利要求I的組合物，其中預(yù)定抗原是腫瘤特異性抗原、腫瘤相關(guān)抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原、腫瘤細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、表達(dá)抗原的重組細(xì)胞、細(xì)胞裂解物、膜制備物、重組制備的抗原、肽抗原或者分離的抗原。3.權(quán)利要求I的組合物，其中...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：M·L·博施，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：西北生物治療藥物公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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