一種銀離子螯合色譜柱用于分離純化蝦青素的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種銀離子螯合色譜柱用于分離純化蝦青素的方法，包括以下步驟：(1)制備銀離子螯合氨基化硅膠；(2)在垂直固定的色譜柱內(nèi)依次加入少量石油醚和石英砂后，再加入石油醚浸泡處理過的銀離子螯合氨基化硅膠，使顆粒自由沉降并用石油醚平衡；(3)將蝦青素粗提液加入層析柱中；(4)以石油醚洗柱至流出液為無色；(5)以正己烷與丙酮混合液洗脫至流出液變?yōu)闊o色，收集蝦青素。本發(fā)明專利技術(shù)步驟簡單、時間短、回收率高、有機溶劑消耗少、環(huán)境污染小、生產(chǎn)成本低，且易于工業(yè)放大。由本發(fā)明專利技術(shù)產(chǎn)生的蝦青素可以用于飼料、食品、化妝品、藥品等行業(yè)。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
—種銀離子螯合色譜柱用于分離純化蝦青素的方法
本專利技術(shù)屬于分離富集化學(xué)的柱層析工藝
，涉及，具體地說，涉及一種從蝦青素粗提液中提取蝦青素的銀離子螯合氨基化硅膠柱層析方法。
技術(shù)介紹
蝦青素(Astaxanthin，Asta.)是一種具有鄰羥基酮結(jié)構(gòu)的類胡蘿卜素，最早于 1937年從龍蝦中分離出來，化學(xué)名為3，3’ - 二羥基-4，4’ - 二酮基-β，β ’ -胡蘿卜素，分子式為C4tlH52O4,相對分子質(zhì)量596. 86，晶體蝦青素為粉紅色，熔點約為224°C，不溶于水，易溶于絕大多數(shù)有機溶劑。蝦青素的來源主要有兩種途徑，一是人工化學(xué)合成，二是天然生物提取。目前，化學(xué)合成蝦青素在市場上還占據(jù)著主導(dǎo)地位，主要供應(yīng)商有Roche及BASF等公司。但是，采用人工化學(xué)合成方法生產(chǎn)蝦青素必須面對生產(chǎn)過程中所產(chǎn)生的環(huán)境污染問題，另外其產(chǎn)品中還含有不能被人體和動物體所利用的非天然異構(gòu)體。隨著科技的發(fā)展、人們生活水平的提高和環(huán)保意識的增強，化學(xué)合成蝦青素在食品、飼料、醫(yī)藥品及化妝品上的應(yīng)用受到很大的限制，例如美國食品與藥物管理局(FDA)僅批準(zhǔn)反式結(jié)構(gòu)的蝦青素用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的添加劑，不允許任何化學(xué)合成產(chǎn)品進入保健食品市場。因此，從含蝦青素的生物原料中提取天然蝦青素已經(jīng)引起國內(nèi)外商家的高度關(guān)注。蝦青素提取的研究主要涉及破孢、粗提、純化、皂化和結(jié)晶等五階段。目前，國內(nèi)蝦青素提取的研究主要集中在粗提工藝的探索，而純化方法主要采用硅膠柱層析法，但該方法選擇性較差，吸附量少，純度較低，因而制約著蝦青素的生產(chǎn)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服硅膠柱層析技術(shù)的缺陷，提供一種銀離子螯合色譜柱分離純化蝦青素的方法，該方法具有操作步驟簡單、時間短、回收率高、有機溶劑消耗少，環(huán)境污染小、生產(chǎn)成本低的特點，適合推廣應(yīng)用，蝦青素可以用于飼料、食品、化妝品、藥品等行業(yè)。 其技術(shù)方案為，包括以下步驟(I)制備銀離子螯合氨基化硅膠；(2)裝柱將色譜柱垂直固定于鐵架臺上，向柱內(nèi)依次加入石油醚和石英砂，輕彈色譜柱，使石英砂鋪平，再加入用石油醚浸泡處理過的銀離子螯合氨基化硅膠溶漿，使顆粒自由沉降，以石油醚平衡；(3)上樣將蝦青素粗提液加入層析柱中；(4)洗柱用石油醚洗柱，至流出液為無色； (5)洗脫以正己烷與丙酮混合液洗脫，收集蝦青素。所述步驟(I)中，用1% HNO3浸泡2g氨基化硅膠3min，用去離子水清洗至中性，加入10% AgNO3甲醇-水溶液5mL，其中V鴨V水為7 3，攪拌浸泡30min，用去離子水清洗除去游離的銀離子，于105°C下充分烘干，置于干燥器中，避光保存?zhèn)溆谩＿Mー步優(yōu)選，10% AgNO3甲醇-水溶液的體積與氨基化硅膠質(zhì)量比為4:1。所述步驟⑵中，所使用的色譜柱的規(guī)格為1. 5mmX 30mm的玻璃柱，下端帶有出液控制閥。所述步驟(2)中，加入的石油醚為2mL，石油醚浸泡處理的銀離子螯合氨基化硅膠為2. 0g，浸泡處理時間為3min，平衡使用的石油醚為3倍體積。所述步驟(3)中，蝦青素粗提液可由各種含蝦青素的原料制得，粗品溶解于石油醚中。所述步驟(4)中,石油醚洗柱流速控制在1. OmL/min。 所述步驟(5)中，正己烷與丙酮按體積比為4 :1。所述步驟(5)中，每10滴收集流出溶液，當(dāng)流出液無色時停止收集，將相鄰的成分近似者合井。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果為1.本專利技術(shù)所用的銀離子螯合氨基化硅膠吸附蝦青素的能力強，且能反復(fù)多次利用，節(jié)省石英砂和吸附硅膠，同時也節(jié)省時間。2.本專利技術(shù)的試劑種類和用量少，而且易于回收，成本低。通過選擇性洗柱，除掉雜質(zhì)，再通過選擇性洗脫，即可獲得高純度的蝦青素，操作簡便，回收率高，且易于エ業(yè)放大。3.本專利技術(shù)方法可適用于除蝦青素外的其它生物原料的加工，也易于作為純化蝦青素的生產(chǎn)環(huán)節(jié)，整合到多種含蝦青素生物原料的綜合加工エ藝中。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式對本專利技術(shù)的技術(shù)方案作進ー步詳細地說明。實施例1，包括以下步驟(I)銀離子螯合氨基化硅膠的制備10% AgNO3甲醇-水溶液的體積與氨基化硅膠質(zhì)量比約為4 I。用1% HNO3浸泡2g氨基化硅膠3min，用去離子水清洗至中性，加入10% AgNO3甲醇-水溶液5mL，其中V甲醇V水為7 3，攪拌浸泡30min，用去離子水清洗除去游離的銀離子，于105°C下充分烘干，置于干燥器中，避光保存?zhèn)溆谩?2)裝柱稱取1. Og銀離子螯合氨基化硅膠，用石油醚浸泡3min，將規(guī)格為1. 5mmX30mm的玻璃色譜柱垂直固定在鐵架臺上，依次加入少量2mL石油醚和0. 2g石英砂，輕彈色譜柱，使石英砂鋪平，將處理好的銀離子螯合氨基化硅膠胺溶漿緩慢加入到色譜柱中，使顆粒自由沉降，以3倍體積的石油醚平衡。(3)上樣將5mL蝦青素粗提液緩慢加入層析柱中，該蝦青素粗提液由雨生紅球藻粉提取物制得。(4)洗柱加入石油醚，控制流速為1. OmL/min，直至流出液變?yōu)闊o色后停止。(5)洗脫用正己烷與丙酮按體積比4 I混合液作為洗脫液洗脫，控制流速為1. OmL/min。每10滴收集流出溶液，當(dāng)流出液變?yōu)闊o色時停止收集，將相鄰的成分近似者合井。采用上述方法，用銀離子螯合氨基化硅膠柱層析分離蝦青素回收率為93. 1%以上所述，僅為本專利技術(shù)較佳的具體實施方式，本專利技術(shù)的保護范圍不限于此，任何熟悉本
的技術(shù)人員在本專利技術(shù)披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見地得到的技術(shù)方案的簡單變化或等效 替換均落入本專利技術(shù)的保護范圍內(nèi)。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種銀離子螯合色譜柱用于分離純化蝦青素的方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)制備銀離子螯合氨基化硅膠；(2)裝柱：將色譜柱垂直固定于鐵架臺上，依次加入石油醚和石英砂，輕彈色譜柱，使石英砂鋪平，再加入石油醚浸泡處理過的銀離子螯合氨基化硅膠溶漿，使顆粒自由沉降，以石油醚平衡；(3)上樣：將蝦青素粗提液加入層析柱中；(4)洗柱：用石油醚洗柱至流出液變?yōu)闊o色；(5)洗脫：以正己烷與丙酮混合液洗脫，收集蝦青素。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種銀離子螯合色譜柱用于分離純化蝦青素的方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)制備銀離子螯合氨基化硅膠； (2)裝柱將色譜柱垂直固定于鐵架臺上，依次加入石油醚和石英砂，輕彈色譜柱，使石英砂鋪平，再加入石油醚浸泡處理過的銀離子螯合氨基化硅膠溶漿，使顆粒自由沉降，以石油醚平衡； (3)上樣將蝦青素粗提液加入層析柱中； (4)洗柱用石油醚洗柱至流出液變?yōu)闊o色； (5)洗脫以正己烷與丙酮混合液洗脫，收集蝦青素。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀離子螯合色譜柱分離純化蝦青素的方法，其特征在于，所述步驟(I)中，用I % HNO3浸泡2g氨基化硅膠3min，用去離子水清洗至中性，加入10% AgNO3甲醇-水溶液5mL，其中: V水為7 3，攪拌浸泡30min，用去離子水清洗除去游離的銀離子，于105°C下充分烘干，置于干燥器中，避光保存?zhèn)溆谩?.根據(jù)權(quán)利要求2所述的銀離子螯合色譜柱用于分離純化蝦青素的方法，其特征在于，10% AgNO3...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王建剛，孫宇航，管永晶，李森林，李鵬飛，曹斌云，
申請(專利權(quán))人：西北農(nóng)林科技大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：