本發明專利技術公開了一種β人絨毛膜促性腺激素磁微?；瘜W發光免疫定量檢測試劑盒，所述試劑盒包括：β-hCG校準品；偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；生物素標記的β-hCG抗體；β-hCG抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；β-hCG質控品；化學發光液A液和B液；20倍濃縮洗液；反應管。另外本發明專利技術還公開了本發明專利技術試劑盒的制備方法。本發明專利技術試劑盒與現有試劑盒相比操作簡便，安全無環境污染。此外，本發明專利技術還具有檢測樣品的濃度范圍寬、成本低、穩定性好等優點。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及免疫分析醫學領域，具體的，本專利技術提供了一種β人絨毛膜促性腺激素(β -hCG)磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法。
技術介紹
人絨毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin, HCG)是一種胎盤成滋養層細胞分泌的糖蛋白激素，特異在孕期分泌，成滋養層細胞病變和某些不完全分化的腫瘤也會分泌。其生理作用在于延緩卵巢黃體的退化，從而維持孕酮的生理水平，在妊娠初期起著重要的作用。HCG還影響孕期免疫耐受，保證胎兒不受母體免疫系統攻擊。此外，HCG還被報道與胚胎著床和早孕反應有關。 HCG是目前廣泛應用的早期妊娠檢測指標，用于指示是否存在著床的胚胎。在懷孕的第一周，HCG水平就開始急劇升高，并持續升高約8周的時間，隨后開始下降，至20周左右達到穩定水平，維持至分娩后消失。人絨毛膜促性腺激素由α，β兩個不同亞基組成，α亞基與垂體分泌的FSH(卵泡刺激素)、LH (黃體生成素)和TSH (促甲狀腺激素)等基本相似，相互間能發生交叉反應，而β亞基的結構各不相似。β -HCG于β -LH結構相近，但最后24個氨基酸延長部分在β -LH中不存在。所以特異性更強的β亞基成為檢測中的首選靶點，總β-hCG可以在很大程度上替代總HCG的指示作用。目前常用的檢測β-hCG的方法有放射免疫分析技術(RIA)和酶聯免疫分析法(ELISA)，但是RIA存在放射性污染、標記物半衰期短、對操作者具有放射性損傷，且操作繁瑣，時間長等缺點；而ELISA靈敏度低，檢測范圍窄；隨著標記免疫技術的迅速發展，各種新的檢測方法層出不窮，其中化學發光免疫分析(CLIA)是將化學發光和酶免疫分析結合在此技術上發展起來的，是當今最為敏感的微量免疫測定法，但是檢測的的靈敏度和準確度還是不聞。磁微粒具有超順磁性，在磁場下具磁場響應性，將磁微粒應用于免疫檢測的固相，將大大提高反應的表面積，更容易進行固相、液相分離，可提高檢測的靈敏度。采用微小的磁微粒作為固相可增加包被表面積，從而增加抗原或抗體的吸附量，既加快了反應速度，也使清洗和分離更簡便。磁分離-酶標記-化學發光技術是酶標記免疫技術的新發展，該技術以微米級磁微粒為載體，利用表面有機物提供的羧基活性基團與蛋白質氨基共價結合，采用抗體進行“搭橋”成免疫磁微粒，可進行抗原、抗體反應。該技術的新穎之處有(I)利用順磁鐵微粒為固相載體，外包被單克隆抗體，增加抗原、抗體的接觸面積及底物發光面積，提高反應的靈敏度，并采用旋轉磁場使磁微粒起攪拌作用及分離結合抗原-抗體與游離抗體的作用。(2)在液相反應中，使用發光增強劑，將水分子從發光底物的發光位點排開，同時還可縮短發光的達峰時間。(3)單克隆抗體，提高了反應的特異性?，F有國外化學發光免疫分析試劑盒為封閉式全自動化學發光測量系統，需要昂貴的全自動化學發光測量儀，從而限制了推廣使用，無法廣泛地應用于臨床診斷和科研工作。尤其是還沒有關于β人絨毛膜促性腺激素磁微?；瘜W發光免疫定量檢測試劑盒廣泛用于醫療領域。
技術實現思路
本專利技術要解決的問題是提供β -hCG的化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法，避免了放射性免疫分析的試劑有效期短、存在放射性污染、操作繁瑣等缺點，且解決了靈敏度低，檢測范圍窄，成本高的缺陷。為解決上述技術問題，本專利技術采用的技術方案是β人絨毛膜促性腺激素磁微?；瘜W發光免疫定量檢測試劑盒，包括β -hCG校準品；偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；生物素標記的β -hCG抗體；β -hCG抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ > 3. 0，活性> 250U/mL ； β -hCG質控品；化學發光液A液和B液；20倍濃縮 洗液；反應管。進一步，所述的發光液A液的主要成分為魯米諾，B液的主要成分是過氧化脲。A液為O. 7g/L魯米諾，O. 165g/L對碘酚，緩沖液為pH8. 6的5mmol/L Tris · HCl，避光保存；B液為O. 675g/L過氧化脲，用工藝用水配制。進一步，所述的磁微粒是表面包裹帶有氨基或羧基活性基團的四氧化三鐵，粒徑l-2um。進一步，所述的β _hCG質控品包括低值質控品和_值質控品。進一步，所述的反應管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。試劑盒的制備方法，包括以下步驟(I) β -hCG校準品的配制將β -hCG抗原用含50%牛血清的校準品稀釋液配制成校準品濃儲液，以企業校準品進行定標，用含50%牛血清的校準品稀釋液稀釋至工作濃度，分別為0，5，25，100，250，1000mIU/mL ；上述β -hCG企業標準品的配制方法將β -hCG抗原用含50%牛血清的校準品稀釋液配成校準品濃儲液，由國家標準品為其定值，按照國家標準品標定值將校準品濃儲液用含50%牛血清的校準品稀釋液稀釋成工作濃度各點，再將工作濃度各點用國家標準品標定；分裝，貼標簽，儲存于_20°C。β-hCG國家標準品批號為150535，規格為0. 21IU/支。(2) β -hCG質控品的配制將β -hCG抗原用含有50%牛血清的校準品稀釋液稀釋配成濃儲液，以企業校準品對其定值后，用校準品稀釋液分別稀釋至8 12mIU/mL和400 600mIU/mL。(3)磁性顆粒_鏈霉未和素懸浮液的制備取IOOmLO. lmol/L 2-嗎啉乙磺酸溶液(MES溶液)，依次加入IOmg磁性顆粒和3mg鏈酶親和素(SA),攪拌30min,然后加入10mg/mL碳二亞胺鹽酸鹽溶液(1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基，EDC) 3. 5uL，反應Ih后，使用磁力架吸附，靜止lOmin，移去液體，加入IOmL0. 01mol/L PBS，重復上述過程，共洗滌3次，最后用0. 01mol/L PBS定溶至IL即可。(4)生物素標記的β -hCG抗體的制備取O. 5mg β -hCG抗體，用硼酸鹽緩沖液在2 8°C下透析I 3h ;將透析后的抗體加入25ug生物素，同時加入二甲基亞砜，最終濃度為10%，避光反應3h，緩慢振蕩；在上述溶液中加入250uLlmol/L氯化銨溶液，常溫避光反應30 60min ;用O. Olmol/L PBS溶液在2 8°C下透析2天，期間換液3 5次；(5) β-hCG抗體酶結合物的制備采用高碘酸鈉氧化法將β-hCG抗體與辣根過氧化物酶進行偶聯后，用酶稀釋液將其稀釋至工作濃度1:4000，并加入5-20%酶穩定劑，儲存于2、°C ;酶穩定劑是一種可以保持蛋白質在凍干或溶液下保持天然折疊構想的試劑，有利于抗原或抗體的保存，避免外界因素如溫度、pH、鹽、金屬離子及其他污染物影響其穩定性。 (6) 20倍濃縮洗液的配制20濃縮洗液包括58gL磷酸氫二鈉，5.92g/L磷酸二氫鈉，180g/L NaCl，IOmL/LTween-20 和 1%0Proclin300 ；(7)化學發光液A液和B液的配制A 液為 O. 7g/L 魯米諾，O. 165g/L 對碘酚，緩沖液為 ρΗ8· 6 的 5mmol/L Tris · HCl，避光保存液為O. 675g/L過氧化脲，用工藝用水配制；A液和B液在使用前5min混合；(8)組裝將上述試劑組裝成盒，儲存于2 8°C ；(9)對采用該方法制的的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
β人絨毛膜促性腺激素磁微?；瘜W發光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：1）β?hCG校準品；2）偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；3）生物素標記的β?hCG抗體；4）β?hCG抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；5）β?hCG質控品；6）化學發光液A液和B液；7）20倍濃縮洗液；8）反應管。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉萍，張影，宋啟超，范利花，
申請(專利權)人：博奧賽斯天津生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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