本發明專利技術公開了一種生長激素磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，所述試劑盒包括：GH校準品，GH校準品濃度為0，0.5，1.5，5，15，50ng/mL，校準品稀釋液為含有50%牛血清的PBS緩沖液；偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；生物素標記的GH抗體；GH抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；GH質控品；化學發光液A液和B液；20倍濃縮洗液；反應管。另外本發明專利技術還公開了本發明專利技術試劑盒的制備方法。本發明專利技術試劑盒與現有試劑盒相比操作簡便，安全無環境污染。此外，本發明專利技術還具有檢測樣品的濃度范圍寬、成本低、穩定性好等優點。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及免疫分析醫學領域，具體的，本專利技術提供了一種生長激素(GH)磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法。
技術介紹
生長激素(growth hormone,GH)是腺垂體細胞分泌的蛋白質,是一種肽類激素，由191個氨基酸組成的單肽鏈，分子量22kD。正常情況下，生長激素呈脈沖式分泌，受下丘腦產生的生長激素釋放素的調節，還受性別、年齡和晝夜節律的影響，睡眠狀態下分泌明顯增力口。生長激素的主要生理功能是促進神經組織以外的所有其他組織生長；促進機體合成代謝和蛋白質合成；促進脂肪分解；對胰島素有拮抗作用；抑制葡萄糖利用而使血糖升高等作用。血清生長激素測定有助于巨人癥、肢端肥大癥、遺傳性生長激素生成缺陷所致的生長 激素缺乏癥診斷。目前常用的檢測生長激素(GH)的方法有放射免疫分析技術(RIA)和酶聯免疫分析法(ELISA)，但是這兩種方法存在諸多不足，例如RIA存在放射性污染、標記物半衰期短、對操作者具有放射性損傷，且操作繁瑣，時間長等缺點；而ELISA靈敏度低，檢測范圍窄；隨著標記免疫技術的迅速發展，各種新的檢測方法層出不窮，其中化學發光免疫分析(CLIA)是將化學發光和酶免疫分析結合在此技術上發展起來的，是當今最為敏感的微量免疫測定法。化學發光免疫分析和磁微粒技術結合，與以微孔板為固相載體的生長激素(GH)化學發光試劑盒相比，具有以下優勢(1)以磁微粒為固相載體，大大增加了抗體的有效包被量，節約了抗體的用量，從而節約了成本；(2)以磁微粒為固相載體包被抗體，增加了抗原-抗體的接觸面積，及發光面積，提高了反應的靈敏度；(3)反應在液相中進行，且利用旋轉磁場使磁微粒其攪拌作用，大大縮短了反應時間；(4)在反應過程中引入了生物素-親和素系統(biotin-avidin system, BAS),它是70年代末發展起來的一種新型反應放大系統，由于具有與標記試劑高親和力的牢固結合、多級放大效應，使其具有靈敏度高、特異性好、穩定性高的特點，目前已成為廣泛用于微量抗原、抗體定性、定量檢測及定位觀察研究的新技術，但是磁微粒化學發光分析方法還沒有廣泛用于GH的檢測，特別是廣泛用于臨床。
技術實現思路
本專利技術要解決的問題是提供GH的磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法，避免了放射性免疫分析的試劑有效期短、存在放射性污染、操作繁瑣等缺點，且解決了靈敏度低，檢測范圍窄，成本高的缺陷。為解決上述技術問題，本專利技術采用的技術方案是生長激素磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，包括GH校準品，校準品濃度為0，0. 5，1. 5,5,15，50ng/mL，校準品稀釋液為含有50%牛血清的PBS緩沖液；偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；生物素標記的GH抗體；GH抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ ^ 3. O,活性彡250U/mL ；GH質控品；化學發光液A液和B液；20倍濃縮洗液；反應管。進一步，所述的發光液A液的主要成分為魯米諾，B液的主要成分是過氧化脲。A液為O. 7g/L魯米諾，O. 165g/L對碘酚，緩沖液為pH8. 6的5mmol/L Tris · HCl，避光保存；B液為O. 675g/L過氧化脲，用工藝用水配制。進一步，所述的磁微粒是表面包裹帶有氨基或羧基活性基團的四氧化三鐵，粒徑l-2um。進一步，所述的GH質控品包括低值質控品和聞值質控品。進一步，所述的反應管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。試劑盒的制備方法，包括以下步驟 (I)GH校準品的配制將GH純品用含有50%牛血清的PBS緩沖液稀釋成系列梯度，濃度分別為0，0. 5，1.5,5,15,50ng/mLo(2)GH質控品的配制將GH抗原用含有50%牛血清的PBS緩沖液稀釋至低值質控品濃度為3. 4^4. 6ng/mL和高值質控品濃度為21. 6 32. 4ng/mL ；(3)磁性顆粒-鏈霉親和素懸浮液的制備取IOOmLO. lmol/L 2_嗎啉乙磺酸溶液(MES溶液)，依次加入IOmg磁性顆粒和3mg鏈酶親和素(SA),攪拌30min,然后加入10mg/mL碳二亞胺鹽酸鹽溶液(1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基，EDC) 3. 5uL，反應Ih后，使用磁力架吸附，靜止lOmin，移去液體，加入IOmLO. 01mol/L PBS，重復上述過程，共洗滌3次，最后用0. 01mol/L PBS定溶至IL即可。(4)生物素標記的GH抗體的制備取0. 5mg GH抗體，用硼酸鹽緩沖液在2 8°C下透析I 3h ;將透析后的抗體加入25ug生物素，同時加入二甲基亞砜，最終濃度為10%，避光反應3h，緩慢振蕩；在上述溶液中加入250uLlmol/L氯化銨溶液，常溫避光反應30 60min ;用0. 01mol/L PBS溶液在2 8°C下透析2天，期間換液3 5次；(5) GH抗體酶結合物的制備采用高碘酸鈉氧化法將GH抗體與辣根過氧化物酶進行偶聯后，用酶稀釋液將其稀釋至1: 12000，并加入5-20%酶穩定劑，儲存于2 8°C。酶穩定劑是一種可以保持蛋白質在凍干或溶液下保持天然折疊構想的試劑，有利于抗原或抗體的保存，避免外界因素如溫度、pH、鹽、金屬離子及其他污染物影響其穩定性。(6) 20倍濃縮洗液的配制20濃縮洗液包括58gL磷酸氫二鈉，5.92g/L磷酸二氫鈉，180g/L NaCl，IOmL/LTween-20 和 1%。Proclin300 ；(7)化學發光液A液和B液的配制A 液為 0. 7g/L 魯米諾，0. 165g/L 對碘酚，緩沖液為 ρΗ8· 6 的 5mmol/L Tris · HCl，避光保存液為0. 675g/L過氧化脲，用工藝用水配制；A液和B液在使用前5min混合；(8)組裝將上述試劑組裝成盒，儲存于2 8°C ；(9)對采用該方法制的試劑盒的進行物理檢查，準確度、劑量-反應曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質控品的測定值和穩定性進行測定。本專利技術的原理是，本試劑盒采用夾心法原理測定血清或血漿中的GH，在親和素-磁微粒懸浮液中加入生物素-GH抗體結合物，通過親和素和生物素的親和反應，形成磁微粒-親和素-生物素-GH抗體復合物，加入樣本和酶后，會通過抗原抗體反應，形成了磁微粒-親和素-生物素-GH抗體-GH-GH抗體-HRP復合物，用磁場將復合物吸附在試管底部，清洗掉游離的成分，加入底物工作液，在氧化劑作用下，HRP催化魯米諾生成處于激發態的氨基鄰苯二甲酸離子，其恢復到基態時，釋放出425nm的光子，于第5分鐘測定各加樣孔的發光值(RLU)。樣本的發光值與樣本中GH濃度呈正相關。樣本中的GH濃度依據由校準品GH濃度和對應的RLU建立的Log (X) -Log (Y)數學模型進行定量，從而檢測人血清、血漿中的GH含量。本專利專利技術的生長素(GH)磁微粒化學發光免疫定量測定試劑盒，具有以下優點(I)反應快速，可在40分鐘內判斷檢測結果；操作簡便，無污染。(2)靈敏度高，本試劑盒的分析靈敏度不高于O. 2ng/mL。(3)特異性強，催乳素(PRL)、促黃體生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)的交叉反應系數小于1%。(4)精密度良好，精密度不高于10%。(5)穩定性良好，本產品在37°C可存放7本文檔來自技高網...
【技術保護點】
生長激素磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：1）GH校準品；校準品濃度為0，0.5，1.5，5，15，50ng/mL，校準品稀釋液為含有50%牛血清的PBS緩沖液；2）偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；3）生物素標記的GH抗體；4）GH抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；5）GH質控品；所述質控品包括低值質控品和高值質控品，濃度分別是3.4~4.6ng/mL和21.6~32.4ng/mL；6）化學發光液A液和B液；7）20倍濃縮洗液；8）反應管。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉萍，范利花，
申請(專利權)人：博奧賽斯天津生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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