一種抑制水霉菌的芽孢桿菌制造技術

本發明專利技術涉及一種抑制水霉菌的芽孢桿菌，所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌為蠟樣芽胞桿菌，所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌的保藏號為CCTCC?M2012274。本發明專利技術還提供這種芽孢桿菌的應用，以及抑制水霉病發生的微生物制劑。本發明專利技術優點在于：（1）本發明專利技術的抑制水霉菌的芽孢桿菌，對水霉菌抑制作用顯著，可以代替防治水霉的化學藥品；（2）該芽孢桿菌同時具有可改善養殖水體環境，從而使防治效果會更加突出；（3）以該芽孢桿菌為主研制的防治水霉的微生物制劑可以重復多次使用，不會產生藥物殘留和耐藥性問題；該抑制水霉的芽孢桿菌的發明專利技術為水霉病的生物防治技術提供切實可行的技術支持和理論依據。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及微生物領域，具體地說，是一種抑制水霉菌的芽孢桿菌。
技術介紹
水霉病對魚類極易感染，一年四季都可見到，以早春晚冬最為常見，在我國各養魚地區都有廣泛的流行。長期以來防治水霉病的主要措施為投放孔雀石綠等藥物，包括氯化鈉、福爾馬林、過氧化氫、臭氧等。同時在魚種放養前，用生石灰對池塘進行清塘、消毒。每667平方米的池塘用生石灰100公斤，化水后全池勻灑，這樣也可以明顯減少此病發生的概率。另外還要盡量避免魚體受傷。在捕撈、運輸和放養的過程中，操作要輕快，盡量避免魚體受傷。另外，魚種放養盡可能避開低溫天氣。 孔雀石綠中的化學功能團三苯甲烷可致癌，很多國家已經禁用，但仍有漁民在防治魚類感染真菌時使用，也有運輸商用作消毒，以延長魚類在長途販運中的存活時間。氯化鈉、福爾馬林、過氧化氫、臭氧等，但都對水霉病的治療效果有限，有的甚至還會對環境造成破壞。還會造成抗藥性的問題出現，提前對養殖池塘進行清塘和消毒雖然可以一定程度上預防水霉的爆發，但是這僅僅可以用來預防，一旦在水霉高發的季節遇到水霉的爆發等狀況，也是無能無力的。中國專利文獻CN101985605A公開了一種水霉拮抗菌及其應用，可以作為孔雀石綠替代藥物的生物藥源，降低環境污染，滿足魚類水霉病生物防治的需要，提供一種水霉拮抗菌Shl,屬于解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens),保藏號為CCTCC NO M2010129。
技術實現思路
本專利技術的目的是針對現有技術中的不足，提供一種抑制水霉菌的芽孢桿菌。本專利技術的第二個目的是，提供一種抑制水霉菌的芽孢桿菌的應用。本專利技術的第三個目的是，提供一種防治水霉病的微生物制劑。本專利技術的第四個目的是，提供一種防治水霉病的微生物制劑。為實現上述目的，本專利技術采取的技術方案是一種抑制水霉菌的芽孢桿菌，所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌為蠟樣芽胞桿菌，所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌的保藏號為CCTCCM 2012274。為實現上述第二個目的，本專利技術采取的技術方案是所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌在預防或抑制魚類水霉病中的應用。為實現上述第三個目的，本專利技術采取的技術方案是一種防治水霉病的微生物制齊U，所述的微生物制劑以所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌為活性成分。為實現上述第四個目的，本專利技術采取的技術方案是一種防治水霉病的微生物制齊U，所述的微生物制劑以所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌的發酵液為活性成分。本專利技術優點在于1、本專利技術的抑制水霉菌的芽孢桿菌，對水霉菌抑制作用顯著，可以代替防治水霉的化學藥品； 2、該芽孢桿菌同時具有可改善養殖水體環境，從而使防治效果會更加突出； 3、以該芽孢桿菌為主研制的防治水霉的微生物制劑可以重復多次使用，不會產生藥物殘留和耐藥性問題；該抑制水霉的芽孢桿菌的專利技術為水霉病的生物防治技術提供切實可行的技術支持和理論依據。附圖說明圖1. BAl和蒸餾水對照組分別與水霉共培養三天后。圖2. BAl拮抗水霉生長。 圖3. BAl芽孢染色。圖4.構建 JN873026 16SrDNA 進化樹。圖5. BA I抑制水霉菌菌絲的生長。 本專利技術涉及一種抑制水霉菌的芽孢桿菌，其分類命名蠟樣芽胞桿菌(Bacilluscereus JN873026)，保藏單位中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址武漢大學生命科學院保藏中心，保藏日期2012年7月8日，保藏編號為CCTCC M 2012274。具體實施例方式下面結合附圖對本專利技術提供的具體實施方式作詳細說明。實施例1 本專利技術通過九株芽孢桿菌和水霉的共培養觀察兩類菌間的相互作用，并挑選出對水霉菌生長起到抑制作用的芽孢桿菌，為了確定其分類學地位，本專利技術通過PCR擴增，獲得BAl的16S rDNA，測序后用ClustalW軟件對其進行遺傳學鑒定。以期為水霉病的生物防治技術提供一定的支持，并為生防芽孢桿菌的使用提供理論依據。材料與方法1.1材料1.1.1菌種 9株待鑒定芽孢桿菌，分別以BA (1-9)編號，采用斜面法保存于本實驗室，保存溫度為40C ；4株純化水霉菌，記為水霉_幾，水霉-6#，水霉-10#，水霉-S2，均由本實驗室分離自養殖水體并采用平板法在4°C下保存。1.1.2培養基與試劑 國藥集團化學試劑有限公司購馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA:馬鈴薯粉，6. Og/L;葡萄糖，20. Og/L ;瓊脂12. 0 15· Og/L)，營養肉湯(NB :蛋白胨，10. Og/L ;牛肉浸出粉，4. Og/L ;酵母浸出粉，3. 0g/L ;氯化鈉，5. 00g/L),營養瓊脂(NA :蛋白胨，10. 0g/L ;牛肉浸出粉，3. 0g/L ；氯化鈉，5. 0g/L ;瓊脂粉，20. 0g/L)，產品型號為BR(滬試)，250g ;蛋白胨(魚粉顆粒，批號F20090313)，瓊脂條。細菌基因組抽提試劑盒(Axygen) PCR試劑EX Taq酶(TaKaRa),dNTP (TaKaRa)，引物(Invitrogen合成)Marker DL5000 (廣州東盛生物科技有限公司)。1.1. 3實驗儀器 離心機，電泳儀，PCR儀。1. 2 方法1.2.1拮抗芽孢桿菌的篩選使用簡單共峙培養法初步篩選出對水霉顯示抑菌性的菌株后，采用瓊脂擴散法進一步驗證，并選取對幾拮抗作用最顯著的菌種。瓊脂擴散法操作如下在PDA平板表面，距離培養皿中心約3cm處，沿四周等間距處成對角線，放入濾紙紙片，在濾紙紙片上滴加初篩的BAl芽孢桿菌菌液(菌液經29°C，180r/min活化培養20h)，25°C下培養ld，芽孢桿菌以濾紙為中心在平板上形成菌落。在培養皿中央位置接種水霉瓊脂塊(直徑為5mm)，25°C下培養3d，測量芽孢桿菌對水霉抑菌圈的大小，以芽孢桿菌菌落邊緣至受抑制的水霉菌落邊緣為抑菌圈半徑。為了進一步驗證篩選出的BA I株是否具有比較廣泛的抗水霉特性，用涂布法在PDA平板上涂滿芽孢桿菌菌液(菌液經29°C，180r/m活化培養20h)，以無菌水作為對照，25°C下培養Id。待芽孢桿菌長滿平板后，從長滿菌絲的水霉平板上直接切取菌塊(直徑約為5mm)置于芽孢桿菌平板中央，25°C下培養，水霉菌絲以菌塊為中心向四周均勻擴散。2d后觀察實驗結果并記錄，判斷BA I對4株水霉菌株是否顯示抑菌性。每株水霉采用3個平行組。1.2.2 鑒定本專利技術根據細菌的16S rDNA序列來對拮抗作用最強的芽孢桿菌進行鑒定，利用上海生工的DNA提取試劑盒提取全基因組DNA，以通用鑒定引物27F:5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3(SEQ ID NO.1), 1492R:5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3 (SEQ ID NO. 2)，進行擴增，PCR 反應體系為反應體系為2· 0μ I IOXEx Taq bufferU. 6μ I 25mM MgC12U μ I 5p 引物、27FI μ I 5p 引物 1492R、0.5yl Template 0. 2 μ I 5u ExTaq、ddH20 12.1 μ I 合計 20 μ I。反應條件95°C 5min，95°C 30s,55°C 30s、72°C lmin30s、24 個循環，72°C IOmin , 10°C00O結果與分析2.1篩本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種抑制水霉菌的芽孢桿菌，其特征在于，所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌為蠟樣芽胞桿菌，所述的抑制水霉菌的芽孢桿菌的保藏號為CCTCC?M?2012274。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：宋增福，佘林榮，楊先樂，范斌，唐磊，趙世林，
申請(專利權)人：上海海洋大學，
類型：發明
國別省市：