本發明專利技術提供一種不易受可能存在于待測試樣中的、并非來自糖化血紅蛋白的糖化氨基酸和/或糖化肽的影響且保存穩定性優異的用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量的多層試驗片以及測定方法。該多層試驗片是用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量的多層試驗片，其至少層疊有下述(a)層和(b)層，所述(a)層和(b)層從待測試樣點樣面按(a)層、(b)層的順序層疊，而且，該多層試驗片不具有血液分離層，其中，(a)層：至少承載有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材，(b)層：至少承載有蛋白酶的高分子基材。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種用于在診斷現場正確、簡便且迅速地對待測試樣中的糖化血紅蛋白含量進行比色定量的多層試驗片以及測量方法。
技術介紹
測量糖化蛋白質在進行糖尿病的診斷、預防以及治療方面非常重要。糖化蛋白質通過在生物體內葡萄糖與血中蛋白質的氨基(主要是末端氨基酸的α-氨基、賴氨酸殘基的Y-氨基)發生非酶促反應而生成。由于蛋白質糖化的程度直接與血中葡萄糖濃度(以下稱為血糖值)成比例，因此，例如，糖化血紅蛋白的情況下，通過測量糖化蛋白質可以掌握約2 3個月內的血糖控制狀態，糖化白蛋白的情況下，通過測量糖化蛋白質可以掌握約 2 3周內的血糖控制狀態。尤其是作為糖化血紅蛋白的一種的血紅蛋白Alc在糖尿病的診斷時被認為是最重要的。作為上述糖化蛋白質的測量方法，已知有高效液相色譜(HPLC)法、免疫法以及酶法等。在現有技術中，高效液相色譜(HPLC)法以及免疫法占據大部分，但是近年來由于酶法可以迅速、大量、正確且廉價地對大量樣本進行測量，因此也開始被頻繁采用。有關酶法，例如已知有通過以下的工序對糖化蛋白質進行比色定量的技術(例如，參照專利文獻I 4)。(I)使待測試樣中的紅細胞溶血以提取出糖化血紅蛋白的工序。(2)使上述糖化血紅蛋白與蛋白酶反應從而從糖化血紅蛋白的糖化的β鏈N末端切出 糖化氨基酸和/或糖化肽的工序。(3)使上述糖化氨基酸和/或糖化肽與糖化氨基酸氧化酶反應從而生成過氧化氫的工序。(4)在過氧化物酶的存在下使上述過氧化氫與氧化還原類顯色試劑反應而顯色的工序。(5)根據上述顯色對待測試樣中的糖化血紅蛋白含量進行比色定量的工序。但是，所涉及的現有技術由于受到可能存在于待測試樣中的、并非來自作為測量對象的糖化蛋白質的糖化氨基酸和/或糖化肽的影響，存在表觀測量值增加的問題另一方面，為解決上述問題，專利技術了測量糖化蛋白質含量的方法(例如專利文獻 5 9)，該方法的特征在于包括前處理工序，S卩，在用蛋白酶處理糖化蛋白質之前，通過使糖化氨基酸氧化酶作用于上述可能存在于待測試樣中的、并非來自糖化蛋白質的糖化氨基酸和/或糖化肽，從而對上述糖化氨基酸和/或糖化肽進行分解處理。但是，所涉及的現有技術是稀釋待測試樣、添加液體狀態的試劑、使之在反應容器內發生反應后測量反應液的吸光度的方法，以使用生物化學自動分析裝置的方法為主流。但是所述生物化學自動分析裝置存在是大型裝置且價格昂貴、需要熟練的檢測技師來操作、從採血到出報告結果為止的時間較長這些問題，難以適用于P0CT(point of caretesting (即，臨床現場即時檢查))。現有技術文獻專利文獻專利文獻1:國際公開第2002-006519號專利文獻2:特開2004-222570號公報專利文獻3:特開2007-181466號公報專利文獻4:特開2010-148515號公報專利文獻5:特開2007-289202號公報專利文獻6:特開2010-104386號公報專利文獻7:特開2010-110333號公報專利文獻8:特開2010-252814號公報專利文獻9:特開2010-263921號公報 非專利文獻非專利文獻I =Clinical Chemistry 43 :122390-2396(1997)
技術實現思路
專利技術所要解決的技術問題本專利技術是以有關現有技術的技術問題為背景進行的。即，本專利技術的目的為提供一種用于在診斷現場正確、簡便且迅速地對待測試樣中的糖化血紅蛋白含量進行比色定量的多層試驗片以及測量方法。更具體而言，本專利技術的目的在于提供一種不易受可能存在于待測試樣中的、并非來自糖化蛋白質的糖化氨基酸和/或糖化肽的影響、且保存穩定性優異的用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量的多層試驗片以及測定方法。解決技術問題的手段本申請專利技術人發現，通過將糖化氨基酸氧化酶承載在比蛋白酶更靠近待測試樣點樣面的層上，從而在糖化血紅蛋白被蛋白酶切斷之前，使糖化氨基酸氧化酶作用于可能存在于待測試樣中的、并非來自糖化蛋白質的糖化氨基酸和/或糖化肽，從而能夠對上述糖化氨基酸和/或糖化肽進行分解處理。還發現了當將蛋白酶與糖化氨基酸氧化酶承載在相同層時，在保存中發生由蛋白酶引起的糖化氨基酸氧化酶失活和/或分解，從而導致保存穩定性顯著降低。另外還發現，當將過氧化物酶與氧化還原類顯色試劑承載在相同層時，在保存中發生由過氧化物酶引起的氧化還原類顯色試劑的自顯色，從而導致保存穩定性顯著降低。 由于與葡萄糖濃度等相比，待測試樣中的糖化血紅蛋白濃度一般為低濃度，因此在測量糖化血紅蛋白時優選使用高靈敏度的無色色素，但無色色素特別不穩定，容易發生自顯色。因而本申請專利技術人將蛋白酶與糖化氨基酸氧化酶承載在不同層上，并且將糖化氨基酸氧化酶承載在比蛋白酶更靠近待測試樣點樣面的層上。由此發現，不容易受可能存在于待測試樣中的、并非來自糖化血紅蛋白的糖化氨基酸和/或糖化肽的影響，同時糖化氨基酸氧化酶的保存穩定性也顯著提高，從而完成了本專利技術。此外，通過將過氧化物酶與氧化還原類顯色試劑分別承載在不同層上，使提高氧化還原類顯色試劑的保存穩定性同時獲得成功，從而完成了本專利技術。S卩，本專利技術具有以下構成要素。1、一種多層試驗片，用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量，其特征在于該多層試驗片至少層疊有下述(a)層和(b)層，所述(a)層和(b)層從待測試樣點樣面按(a)層、 (b)層的順序層疊，而且所述多層試驗片不具有血液分離層，其中，(a)層至少承載有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材，(b)層至少承載有蛋白酶的高分子基材。2、一種多層試驗片，用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量，其特征在于所述多層試驗片至少層疊有下述(a)層和(b)層，所述(a)層和(b)層從待測試樣點樣面按(a) 層、(b)層的順序層疊，在(a)層和(b)層中的不同的層上分別承載過氧化物酶和氧化還原類顯色試劑，而且所述多層試驗片不具有血液分離層，其中，(a)層至少承載有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材，(b)層至少承載有蛋白酶的高分子基材。3、根據I或2所述的多層試驗片，其特征在于所述多層試驗片在(a)層和(b)中的至少一層上還承載有表面活性劑。4、一種多層試驗片，用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量，其特征在于所述多層試驗片至少層疊有下述(a)層、(b)層和(C)層，所述(a)層、(b)層和(C)層從待測試樣點樣面按(a)層、(b)層及(C)層、(a)層、(C)層及(b)層或(C)層、(a)層及(b)層的順序層疊，而且所述多層試驗片不具有血液分離層，其中，(a)層至少承載有糖化氨基酸氧化酶的高 分子基材，(b)層至少承載有蛋白酶的高分子基材，(C)層至少承載有除蛋白酶和糖化氨基酸氧化酶外的任意試劑的高分子基材。5、一種多層試驗片，用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量，其特征在于所述多層試驗片至少層疊有下述(a)層、(b)層和(C)層，所述(a)層、(b)層和(C)層從待測試樣點樣面按(a)層、(b)層及(C)層、(a)層、(C)層及(b)層或(C)層、(a)層及(b)層的順序層疊，在(a)層、(b)層和(C)層中的不同的層上分別承載過氧化物酶和氧化還原類顯色試劑，而且所述多層試驗片不具有血液分離層，其中，(a)層至少承載有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材，(b)層至少承載有蛋白酶的高分子基材，(C)層本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種多層試驗片，用于對糖化血紅蛋白含量進行比色定量，其特征在于：所述多層試驗片至少層疊有下述(a)層和(b)層，所述(a)層和(b)層從待測試樣點樣面按(a)層、(b)層的順序層疊，而且所述多層試驗片不具有血液分離層，其中，(a)層：至少承載有糖化氨基酸氧化酶的高分子基材，(b)層：至少承載有蛋白酶的高分子基材。
【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：岡本淳，塚本 曉，中森 雅彥，
申請(專利權)人：東洋紡織株式會社，
類型：發明
國別省市：
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