本發明專利技術人等發現：與在血漿中的pH下的抗原結合活性相比在早期核內體內的pH下的抗原結合活性弱的抗體，其能夠以1分子的抗體與多個分子的抗原結合，血漿中半衰期長，可與抗原結合的期間得到改善。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及提高抗原結合分子的藥物動力學的方法、增加抗原結合分子與抗原的結合次數的方法、藥物動力學提高的抗原結合分子、抗原結合分子與抗原的結合次數增加的抗原結合分子、以及它們的制備方法等。
技術介紹
抗體在血漿中的穩定性高、副作用也少，因此作為藥品而受到關注。其中，有多種IgG型抗體藥物已上市，目前還有多種抗體藥物正在開發中(非專利文獻1、非專利文獻2)。另一方面，作為可適用于第2代抗體藥物的技術，人們開發了各種技術，有人報道了提高效應子功能、抗原結合能力、藥物動力學、穩定性的技術或降低免疫原性風險的技術等(非專利文獻3)。認為問題在于由于抗體藥物通常給藥量非常大，所以難以制備皮下給藥制劑；以及制造成本高等。作為減少抗體藥物的給藥量的方法，人們在考慮提高抗體的藥物動力學的方法和提高抗體與抗原的親和性(親和力)的方法。作為提高抗體的藥物動力學的方法，有人報道了恒定區的人工氨基酸取代(非專利文獻4、5)。作為增強抗原結合能力、抗原中和能力的技術，有人報道了親和力成熟技術(非專利文獻6)，通過向可變區的CDR區等的氨基酸中導入突變，可以增強與抗原的結合活性。通過增強抗原結合能力，可以提高在體外的生物活性、或者減少給藥量，還可以進一步提高在體內的藥效(非專利文獻7)。另一方面，每I分子的抗體能夠中和的抗原量依賴于親和力，通過增強親和力，可以以少的抗體量中和抗原，可以通過各種方法來增強抗體的親和力。并且，只要與抗原進行共價鍵結合、使親和力無限大，就可以用I分子的抗體中和I分子的抗原(抗體為二價時中和兩分子的抗原)。但在現有方法中，用I分子的抗體中和I分子的抗原(抗體為二價時中和兩分子的抗原)的化學量論的中和反應是界限，以抗原量以下的抗體量無法完全中和抗原。即，在增強親和力的效果方面存在界限(非專利文獻9)。當抗體為中和抗體時，為了使其中和效果持續一定期間，必需給予該期間內在體內產生的抗原量以上的抗體量，僅憑提高上述抗體的藥物動力學或親和力成熟技術，在減少必需的抗體給藥量方面存在界限。因此，為了以抗原量以下的抗體量目標期間持續抗原的中和效果，必需用I個抗體中和多個抗原。作為用I個抗體中和多個抗原的方法，有利用賦予抗體催化功能的催化抗體進行的抗原的滅活。當為蛋白抗原時，認為通過水解抗原的肽鍵可以將抗原滅活，通過抗體催化該水解反應，可以反復中和(失活)抗原(非專利文獻8)。迄今為止，報道了許多有關催化抗體和催化抗體制作技術，但作為藥品具有足夠的催化活性的催化抗體則未見報道。即，在抗某抗原的抗體的體內試驗中，與普通的不具有催化功能的中和抗體相比，以低劑量發揮同等以上的效果、或者以相同的給藥量可以更持續地發揮效果的催化抗體迄今為止未見報道。這樣，沒有關于用I分子的抗體中和多個抗原、可以發揮優于普通中和抗體的體內效果的抗體的報道，為了減少給藥量以及延長持續性，人們希望開發用I個抗體中和多個抗原、在體內較普通的中和抗體更能發揮效果的新型抗體制作技術。本專利技術的現有技術文獻如下所示?，F有技術文獻非專利文獻非專利文獻1:Monoclonal antibody successes in the clinic， JaniceM Reichert， Clark J Rosensweig， Laura B Faden & Matthew C Dewitz, NatureBiotechnology 23，1073-1078(2005).非專利文獻2 :Pavlou AK, Belsey MJ. The therapeutic antibodies market to2008. Eur J Pharm Biopharm. 2005Apr ；59(3) :389_96.非專利文獻3 ；Kim SJ, Park Y，Hong HJ. Antibody engineering for thedevelopment of therapeutic antibodies. Mol Cells. 2005Aug 31 ；20 (I) 17-29.Review.非專利文獻4 ；Hinton PR，Xiong JM, Johlfs MG，Tang MT，Keller S，Tsurushita N. An engineered human IgGl antibody with longer serum half-life.JImmunol. 2006Jan I ； 176 (I) :346_56.非專利文獻5 ；Ghetie V，Popov S，Borvak J，Radu C，Matesoi D，Medesan C，Ober RJ, Ward ES.1ncreasing the serum persistence of an IgG fragment by randommutagenesis. Nat Biotechnol.1997 Jul ；15(7) :637_40.非專利文獻6:Proc Natl Acad Sci USA. 2005Jun 14 ; 102 (24) :8466_71· Epub2005 Jun 6. A general method for greatly improving the affinity of antibodies byusing combinatorial libraries. Rajpal A，Beyaz N，Haber L，Cappuccilli G，Yee H，Bhatt RR, Takeuchi T，Lerner RA，Crea R.非專利文獻7:Wu H，Pfarr DS，Johnson S，Brewah YA，Woods RM，Patel NK，WhiteWI, Young JF，Kieher PA. Development of Motavizumab, an Ultra-potent Antibody forthe Prevention of Respiratory Syncytial Virus Infection in the Upper and LowerRespiratory Tract. J Mol Biol. 2007，368，652-665.非專利文獻8 :Hanson CV, Nishiyama Y，Paul S. Catalytic antibodies andtheir applications. Curr Opin Biotechnol. 2005Dec ；16(6) 631-6.非專利文獻9:Rathanaswami P,Roalstad S,Roskos L，Su QJ,Lackie SiBabcookJ.Demonstration of an in vivo generated sub-picomolar affinity fully humanmonoclonal antibody to interleukin-8. Biochem Biophys Res Commun. 2005Sep 9 ；334(4) : 1004-13.
技術實現思路
專利技術所要解決的課題本專利技術鑒于上述狀況而設，其目的在于提供抗原結合分子與抗原多次結合的方法、提高抗原結合分子的藥物動本文檔來自技高網...
【技術保護點】
抗體的篩選方法，該篩選方法包括以下步驟：(a)?測定pH6.7~pH10.0下的抗體的抗原結合活性的步驟；(b)?測定pH4.0~pH6.5下的抗體的抗原結合活性的步驟；(c)?選擇pH6.7~pH10.0下的抗原結合活性高于pH4.0~pH6.5下的抗原結合活性的抗體的步驟，其中，該抗體被用作藥物組合物、且為以下(i)～(vi)中任一項所述的抗體：(i)?血漿中滯留性優異的抗體；(ii)?在包含表達FcRn的細胞的非人類動物的測定中，能夠與抗原進行兩次以上結合的抗體；(iii)?在包含表達FcRn的細胞的非人類動物的測定中，可結合的抗原數多于抗原結合位點的抗體；(iv)?在細胞內解離在細胞外結合的抗原的抗體；(v)?以與抗原結合的狀態攝入細胞內、以未與抗原結合的狀態被釋放到細胞外的抗體；或(vi)?血漿中抗原消除能力增加的抗體。
【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：井川智之，石井慎也，前田敦彥，中井貴士，
申請(專利權)人：中外制藥株式會社，
類型：發明
國別省市：
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