食物致敏原，檢測食物過敏原的方法和檢測誘導(dǎo)食物過敏原的食物的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及食物致敏原，檢測食物過敏原的方法和檢測誘導(dǎo)食物過敏原的食物的方法。本發(fā)明專利技術(shù)提供一種檢測食物過敏原的方法、抗體和用于制備該抗體的抗原。本發(fā)明專利技術(shù)的抗原是包含食物過敏性病人的IgE能夠識別的多種未變性和/或變性的食物過敏原的混合物。本發(fā)明專利技術(shù)的抗體通過利用上述的抗原接種動物制備。本發(fā)明專利技術(shù)中檢測食物過敏原的方法涉及到上述抗體。該方法能夠?qū)κ澄镞^敏原和誘導(dǎo)食物過敏反應(yīng)的食物進行檢測，因此有助于確保食物過敏性病人的安全性。（*該技術(shù)在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
食物致敏原，檢測食物過敏原的方法和檢測誘導(dǎo)食物過敏原的食物的方法本專利技術(shù)申請是PCT專利申請PCT/JP02/09066，申請日為2002年9月5日專利技術(shù)名稱為“食物致敏原，檢測食物過敏原的方法和檢測誘導(dǎo)食物過敏原的食物的方法”的專利技術(shù)專利申請的分案申請，母案進入中國的申請?zhí)枮?2822093.5。專利技術(shù)背景本專利技術(shù)涉及一種包含食物過敏性病人體內(nèi)IgE抗體能夠識別的多種天然和/或變性過敏原的混合物、通過使用該混合物免疫動物制備的抗體、利用所述抗體檢測食物過敏原和誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物的方法。本專利技術(shù)給對食物過敏的病人提供了安全性，這是因為本專利技術(shù)有助于理解食物過敏反應(yīng)的發(fā)生機制，開發(fā)和檢驗低過敏原性的食物，檢測食物、食物原料和諸如食物制作機器及過程之類的食物制作環(huán)境中的過敏原。食物過敏反應(yīng)是易感個體攝取的食物中誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的物質(zhì)（以下稱為食物過敏原）所導(dǎo)致的有害免疫反應(yīng)。食物過敏反應(yīng)能夠?qū)е缕ぱ住⑾⑾勒系K、過敏反應(yīng)性休克等。根據(jù)疾病發(fā)生的機制將過敏反應(yīng)分為I型至IV型。食物過敏反應(yīng)主要是I型過敏反應(yīng)，其中IgE抗體和攝入體內(nèi)的食物過敏原發(fā)生反應(yīng)。近年來，食物過敏病人的數(shù)目一直在上升。這種現(xiàn)象導(dǎo)致了醫(yī)學(xué)和食品工業(yè)領(lǐng)域中的嚴重問題。為了預(yù)防這種危害，有必要通過標簽給消費者提供有關(guān)信息。FAO/WHO聯(lián)合食品標準委員會（食品法規(guī)聯(lián)合委員會(CodexAlimentariusCommision)）已經(jīng)認識到食品標簽上注明包含已知為食物過敏原的八種原料中任何一種的必要性，并建議各成員國實施該標簽系統(tǒng)（1999年6月）。考慮到食物過敏原的嚴重性和經(jīng)常性，日本已頒布了24條標簽法規(guī)（2002年4月生效）。應(yīng)該注意的是這些規(guī)定不是要求注明過敏原性物質(zhì)或食物過敏原本身，而是要求注明包含過敏原性物質(zhì)和食物過敏原的食物，即誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物。誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物包括蛋、奶、肉、魚、甲殼動物和軟體動物、谷類、豆類和堅果、水果、蔬菜、啤酒酵母或明膠。類似地，卵清蛋白、類卵粘蛋白、溶菌酶、酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、面筋、α-淀粉酶抑制劑等都是誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物。另外，（1）不考慮現(xiàn)有的知識，必然還有許多其他食物和成分（食物過敏原）能夠?qū)е率澄镞^敏反應(yīng)；（2）誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物和成分（食物過敏原）是多樣的，對這些過敏原的反應(yīng)根據(jù)不同的食物過敏性病人而異；和（3）如后面的實施例中所述，在誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的單一食物中存在有多種已知和未知的過敏原。然而，使用傳統(tǒng)的方法不易于檢測如此眾多的誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物或食物過敏原。食物通過加熱、冷凍、干燥、鹽化、發(fā)酵、酶處理等方法（以下稱為食物加工方法）制作，以改善和穩(wěn)定它們的可消化性、保存期限、口感、物理特性等。雖然食物加工方法影響蛋白質(zhì)，改變它們的分子結(jié)構(gòu)（如使蛋白質(zhì)變性），但是很少論及這些食物加工方法是否能夠?qū)е率澄镞^敏原的形成。本專利技術(shù)闡明了以下一些事實：（1）一些加熱過的食物成分表現(xiàn)出變應(yīng)原性；（2）取決于該食物加熱與否，誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的單一食物中誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的組分或表位可能發(fā)生改變。即，制備了a）未加熱過的蛋類抗原，b）通過對a）中的抗原加熱制作的加熱過的蛋類抗原，c）通過將從多個食物過敏性病人匯集(pooled)的血清（稱為匯集的病人血清）和a）（去除了(depleted)未加熱過的蛋類抗原的血清）相混合制備的血清，和d）通過將匯集的病人血清和b）（去除了加熱過的蛋類抗原的血清）相混合制備的血清。a）和c）或a）和d）之間，和b）和c）或b）和d）之間反應(yīng)的結(jié)果表明，去除了未加熱過的蛋類抗原的血清不能和未加熱過的蛋類抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，但能夠和加熱過的蛋類抗原發(fā)生反應(yīng)；類似地，去除了加熱過的蛋類抗原的血清不能和加熱過的蛋類抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，但能夠和未加熱過的蛋類抗原發(fā)生反應(yīng)。總之，食物過敏性病人攜帶有對加工和未加工食物都特異的IgE抗體，導(dǎo)致食物過敏反應(yīng)。但是目前為止，還沒有簡單的方法能夠檢測加工后食物中的過敏原或其成分。篩選雞蛋、花生、酪蛋白、β-乳球蛋白、面筋中食物過敏原的方法能夠由商業(yè)途徑獲得（食品與開發(fā)，Vol.35，p10-11）。但是，所有這些方法或其中的一些具有以下一種或多種缺陷：（1）這些方法不能總是檢測到食物過敏性病人對之敏感的抗原。也就是說，它們不能夠總是檢測到病人IgE抗體所能識別的物質(zhì)；（2）這些方法能夠檢測已知抗原，且每種方法僅能檢測到一種過敏原（單一的抗原）；（3）這些利用檢測單一抗原的抗體的方法不適用于含抑制性物質(zhì)的食物；（4）如下面的實施例中所示，這些利用檢測單一抗原的抗體的方法不能對誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物進行精確的定量；（5）這些利用檢測單一抗原的抗體的方法不適用于檢查不含抗原的誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物（如利用通過和卵白中的卵清蛋白相接觸制備的單一抗體的方法不適用于檢查蛋黃、蛋黃醬等。而已知食物過敏反應(yīng)由蛋黃所致）；（6）這些利用檢測單一抗原的抗體的方法不適用于檢查加工過的食物，這是因為它們不能夠檢測變性或分子修飾過的過敏原；和（7）抗天然和變性β-乳球蛋白、卵清蛋白和α-酪蛋白的單克隆抗體已有報道（Allergy,Vol.50,p309）。但如果食物加工方法去除或改變了其表位，則這些方法的用途就會減小，這是因為單克隆抗體僅能檢測食物過敏原分子中的單一表位。雖然利用從對大米（日本專利公開2000-65820）、蛋和奶（日本肉類科學(xué)，vol.39，p166-169）過敏的病人體內(nèi)獲得的血清篩選食物過敏原的方法已有報道，并在醫(yī)院里得以應(yīng)用，但是不適用于檢查團體，也不適用于食品加工廠，這是因為這些方法需要從病人體內(nèi)獲得大量血清。雖然依賴于過敏反應(yīng)的食物抗原檢測法已有報道（FFIJ.,No.180,p77-82），但是復(fù)雜的方法學(xué)和實驗室動物飼養(yǎng)使得該方法在多數(shù)食品加工廠里不適用。雖然已經(jīng)建立了利用流式系統(tǒng)和酶標抗體和利用微電極的過敏原感受器的方法（日本食品工業(yè)，Vol.42,p53-56），在這些方法投入實際應(yīng)用之前有許多問題尚待解決。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的完成是為了解決上述傳統(tǒng)方法中的問題。本專利技術(shù)的目的是提供（1）包含食物敏感性病人的IgE抗體能夠識別的多種已知和/或未知以及天然和/或變性食物過敏原的混合物（為方便起見，稱為本專利技術(shù)的第一項專利技術(shù)），（2）通過用混合物免疫動物而制備的抗體（稱為本專利技術(shù)的第二項專利技術(shù)），和（3）利用所述抗體檢測食物過敏原和誘導(dǎo)過敏反應(yīng)的食物的方法（稱為本專利技術(shù)的第三項專利技術(shù)）。附圖簡述圖1所示為標準抗原和病人IgE抗體之間的反應(yīng)，以及標準抗原和本專利技術(shù)中的抗標準抗原抗體的抗體之間的反應(yīng)。圖2所示為攜帶有對天然和變性蛋類蛋白特異的IgE抗體的病人血清。實施本專利技術(shù)的最佳方式本專利技術(shù)的第一項專利技術(shù)可以這樣完成：（1-i）從食物過敏性病人匯集的血清中分離IgE抗體，和（1-ii）利用親和層析和免疫沉淀之類的免疫學(xué)方法，從經(jīng)過或不經(jīng)過食物制作方法處理的食物或其成分（下面總稱為食物）中分離上述IgE抗體能夠識別的多種物質(zhì)（換句話說，食物過敏性病人的IgE抗體能夠識別的多種食物過敏原）。本專利技術(shù)的第一項專利技術(shù)也可以這樣完成：（2-i）按常規(guī)方法對食物成分進行SDS-PAGE，并轉(zhuǎn)移到膜上，（2-ii）利用膜、匯集的病人血清、抗人IgE的偶聯(lián)抗體和顯色試劑進行Western本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
包含多克隆動物血清的抗體混合物，其包含識別食物過敏性病人的IgE抗體能夠識別并且通過攝取導(dǎo)致食物過敏反應(yīng)的下述天然的和加熱變性的食物過敏原的抗體，其中食物過敏性病人具有2或更高的RAST評分：(1)蛋中的卵清蛋白、類卵粘蛋白、溶菌酶和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白；(2)奶中的酪蛋白、β?乳球蛋白和α?乳清蛋白；(3)小麥中的gliadin和α?淀粉酶抑制劑；(4)蕎麥的132?kDa、84?kDa、27?kDa和11?kDa物質(zhì)；或(5)花生的107?kDa、72?kDa、35?kDa和28?kDa物質(zhì)。

【技術(shù)特征摘要】
2001.09.05 JP 269592/20011.分離的多克隆兔血清的抗體混合物，其由特異性識別匯集的血清能夠識別的下述天然的和加熱變性的食物過敏原組分的兔抗體組成，所述抗體混合物識別匯集的血清能夠識別的下述天然的和加熱變性的食物過敏原組分，但不識別匯集的血清也不特異性識別的過敏原組分，其中，所述匯集的血清是將RAST即放射變應(yīng)原吸附試驗評分為2或更高，即特異性IgE抗體>0.7UA/ml的病人體內(nèi)獲得的血清等量相混合而制備的，所述病人是因為攝入包含下述過敏原組分的食物而引起過敏的過敏性病人，所述過敏原組分如下：(1)蛋中的卵清蛋白、類卵粘蛋白、溶菌酶和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白；(2)奶中的酪蛋白、β-乳球蛋白和α-乳清蛋白；(3)小麥中的gliadin和α-淀粉酶抑制劑；(4)蕎麥的132-kDa、84-kDa、27-kDa和11-kDa物質(zhì)；或(5)花生的107-kDa、72-kDa、35-kDa和28-kDa物質(zhì),所述食物過敏原組分是按照下述方法制備的：（i）對食物成分進行SDS-PAGE，并轉(zhuǎn)移到膜上，（ii）利用膜、匯集的病人血清、抗人IgE的偶聯(lián)抗體和顯色試劑進行Western印跡分析，（iii）利用膜、將食物成分免疫兔制備的兔血清...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：森松文毅，高畑能久，松本貴之，宮澤伊都美，清水宗茂，
申請(專利權(quán))人：日本肉類批發(fā)商株式會社，
類型：發(fā)明
國別省市：