本發明專利技術公開了一種20(s)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法，將干燥的青龍衣藥材通過乙醇提取，二氯甲烷、乙酸乙酯依次萃取、兩次硅膠柱層析和一次反相柱層析，得到純化的20(s)-原人參二醇-3-酮目標化合物。利用本發明專利技術提取分離方法能有效制備20(s)-原人參二醇-3-酮，制備方法簡單，步驟明確，適合工業化生產。且制得的化合物純度高，產率高。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種三萜類化合物的提取分離方法，具體涉及20(s)_原人參二醇-3-酮的提取分離方法。
技術介紹
腫瘤是一種常見病、多發病，其中惡性腫瘤是目前危害人類健康最嚴重的一類疾病。劉星堦研究發現人參二醇型皂苷元和人參二醇葡萄糖苷(尤其是人參皂苷Rh2)具有高度細胞毒活性(達瑪烷型三萜研究的進展，國外醫學·藥學分冊，1987，3，141-144)。研究發現20 (S)-原人參二醇-3-酮是俄羅斯學者Morita M.和Atopkina, L. N.等將樺葉烯三醇轉化為人參皂苷Rh2及其它人參皂苷化學合成研究中的關鍵中間產物 (王紅燕等，人參化學成分研究的新進展，中國藥物化學雜志，1992，2 (I) 64-70)0因此通過 20 (s)-原人參二醇-3-酮合成的化學產物能開發成為抗腫瘤藥物的藥效物質成分。目前通常采用合成方法制備20(S)-原人參二醇-3-酮，工藝復雜。周媛媛等首次從青龍衣中分離得到20(s)_原人參二醇-3-酮(周媛媛等，中草藥，2010，41(1) :11_14)， 但分離過程復雜，尤其是反復硅膠柱層析過程，需要技術人員的經驗判斷，不斷調整實驗參數，不適合工業化生產，且產率較低。
技術實現思路
本專利技術的目的是為了解決現有技術中存在的缺陷，提供一種步驟明確、且產率較高的20 (S)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法。為了達到上述目的，本專利技術提供了一種20(s)_原人參二醇-3-酮的提取分離方法，包括以下步驟(O提取取干燥的青龍衣藥材，乙醇提取，提取液濃縮得乙醇浸膏；乙醇的濃度為 90% 100%,優選 95% ；(2)萃取分離將步驟(I)中制備的乙醇浸膏加水制備懸浮液，依次采用二氯甲烷萃和乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液濃縮得乙酸乙酯浸膏；(3)硅膠柱層析取步驟(2)中制備的乙酸乙酯浸膏進行硅膠柱層析，依次采用體積比為15:1 10:1 (優選體積比為15:1)的石油醚和乙酸乙酯混合液、體積比為8:1 5:1的石油醚和乙酸乙酯混合液進行梯度洗脫，收集體積比為8:1 5: I (優選體積比為5:1)的石油醚和乙酸乙酯混合洗脫液；石油醚的沸程為60 90°C ；(4)二次硅膠柱層析將步驟(3)中收集的洗脫液進行硅膠柱層析，采用二氯甲烷和甲醇的混合液進行等度洗脫或梯度洗脫；采用等度洗脫時，所述二氯甲烷和甲醇的體積比為 8:1，收集2. 5個柱體積后的洗脫液；采用梯度洗脫時(優選洗脫方式)，依次采用的體積比為12:1的二氯甲烷和甲醇混合液、體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合液進行梯度洗脫， 收集體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合洗脫液；(5)反相柱層析取步驟(4)中收集的洗脫液，進行C18反相柱層析，依次采用30%甲醇和60%的甲醇進行梯度洗脫；收集60%甲醇洗脫液，回收溶劑，即得20(s)_原人參二醇-3-酮。將20(s)_原人參二醇-3-酮進行甲醇重結晶即得純度更高的產品。其中，步驟(I)中乙醇的用量為每克藥材采用6 IOml (優選8ml )，優選提取方式米用超聲提取O. 5 I. 5h,最佳提取時間50min,反復提取一次,合并提取液。步驟(2)中混懸液制備時加入蒸餾水的重量為乙醇浸膏的5倍，采用占所述蒸餾水體積的O. 75 I倍量(優選等體積量)的二氯甲烷和乙酸乙酯依次進行兩相回流萃取lh。步驟(3)和步驟(4)中硅膠柱層析均采用干法上樣，拌樣硅膠采用80 100目硅膠，裝柱硅膠采用200 300目硅膠。其中，步驟(3)中乙酸乙酯浸膏與拌樣硅膠的重量比為1:1. 5，乙酸乙酯浸膏與裝柱硅膠的重量比為1:20 ;步驟(4)中進行柱層析前，先將步驟(3)中收集的洗脫液濃縮至浸膏，浸膏進行干法上樣，浸膏與拌樣硅膠的重量比為1:1，浸膏與裝柱硅膠的重量比為1:30。步驟(5)中C18反相柱采用預先處理好的體積為2cmX IOOcm的常壓敞口玻璃層析色譜柱(C-18反相填料為YMC公司生產，填料粒徑彡50// m)，洗脫液流速為lml/min。本專利技術相比現有技術具有以下優點本專利技術提取分離方法采用兩次柱層析和一次反相柱層析替代多次反復的柱層析，步驟簡略，且每次柱層析的收集段明確，無需進行經驗判斷，避免了誤差和損耗；同時采用二氯甲烷替代氯仿，降低了毒性和對環境的污染。在柱層析分離前依次采用二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，分取乙酸乙酯段更加有效地富集了目標化合物的極性段，減少了柱層析的分離步驟。利用本專利技術提取分離方法能有效制備20 (S)-原人參二醇-3-酮，制備方法簡單，步驟明確，適合工業化生產。制得的化合物純度高，且產率較現有技術提高了一倍。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術20 (S)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法進行詳細說明。實施例一(1)采集當年8月中上旬產核桃青皮，在陰涼通風處晾干后，粉碎，過40目篩，稱重5kg。 按藥材溶劑=l:6(g/ml)加入濃度為95%乙醇充分混勻后浸泡20min，在35 40°C、40KHz 下超聲提取30min，濾過，藥渣如上述方法再超聲提取I次，合并兩次95%乙醇液，減壓回收乙醇得浸膏252g。(利用超聲提取，能有效減少溶劑、能源等生產成本的消耗，達到對藥材資源的充分利用)(2)將252g浸膏按1:5比例用1260ml蒸餾水混懸后放入5000ml圓底燒瓶中，再加入 1260ml 二氯甲烷在40 45°C加熱條件下進行兩相回流萃取lh，靜置放冷后分取二氯甲烷層；剩余水相再加入IOOOml乙酸乙酯在80 85°C加熱條件下進行兩相回流萃取lh，靜置放冷后分取乙酸乙酯層，回收溶劑得乙酸乙酯浸膏A 59. 5g。(3)用250ml甲醇分散乙酸乙酯浸膏A，按I: I. 5加入硅膠(80 100目)約90g進行拌樣蒸干，處理后樣品加入按1:20比例取1200g硅膠(200 300目)干法裝入常壓敞口玻璃層析柱，石油醚(60 90°C):乙酸乙酯(15:1和5:1)進行梯度洗脫，其中石油醚(60 90°C ):乙酸乙酯(15:1)洗脫3. 5個柱體積棄去，石油醚(60 90°C ):乙酸乙酯(5:1)洗脫5個柱體積，收集5:1的洗脫部位，濃縮得浸膏B 16. 2g。(4)將浸膏B按I: I加入硅膠(80 100目)16. 2g進行拌樣蒸干，處理后樣品加入按1:30比例取約500g硅膠(200 300目)干法裝入常壓敞口玻璃層析柱，用二氯甲烷 甲醇(8:1)進行等度洗脫，棄去前2. 5個柱體積后，收集3個柱體積，濃縮得浸膏C 3. lg。(5)將C加入甲醇45°C加熱溶解，濾過，加入預先處理好的體積為2cmX IOOcm的常壓敞口玻璃層析色譜柱中(C-18反相填料為YMC公司生產，填料粒徑彡50//m)，用30% 甲醇以lml/min流速洗脫，收集前段1500ml洗脫液棄去，然后用60%甲醇洗脫，收集洗脫液3000ml，回收溶劑至干。用甲醇進行重結晶，即得20(S)_原人參二醇-3-酮。制得產品 26mg,純度為 98. 3%。實施例二(I)取實施例一中制備的干燥藥材5kg。按藥材溶劑=l:8(g/ml)加入濃度為95%乙醇充分混勻后浸泡20min，在35 40°C、40KHz下超聲提取50min，濾過，藥渣如上述方法再超聲提取I次，合并兩次95%乙醇液，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種20(s)?原人參二醇?3?酮的提取分離方法，其特征在于：包括以下步驟：（1）提取：取干燥的青龍衣藥材，乙醇提取，提取液濃縮得乙醇浸膏；所述乙醇的濃度為90%～100%；（2）萃取分離：將步驟（1）中制備的乙醇浸膏加水制備懸浮液，依次采用二氯甲烷萃和乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液濃縮得乙酸乙酯浸膏；（3）硅膠柱層析：取步驟（2）中制備的乙酸乙酯浸膏進行硅膠柱層析，依次采用體積比為15:1～10:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、體積比為8:1～5:1的石油醚和乙酸乙酯混合液進行梯度洗脫，收集體積比為8:1～5:1的石油醚和乙酸乙酯混合洗脫液；所述石油醚的沸程為60～90℃；（4）二次硅膠柱層析：將步驟（3）中收集的洗脫液進行硅膠柱層析，采用二氯甲烷和甲醇的混合液進行等度洗脫或梯度洗脫；采用等度洗脫時，所述二氯甲烷和甲醇的體積比為8:1，收集2.5個柱體積后的洗脫液；采用梯度洗脫時，依次采用的體積比為12:1的二氯甲烷和甲醇混合液、體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合液進行梯度洗脫，收集體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合洗脫液；（5）反相柱層析：取步驟（4）中收集的洗脫液，進行C18反相柱層析，依次采用30%甲醇和60%的甲醇進行梯度洗脫；收集60%甲醇洗脫液，回收溶劑，即得20(s)?原人參二醇?3?酮。...
【技術特征摘要】
1.一種20 (S)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法，其特征在于包括以下步驟 (1)提取取干燥的青龍衣藥材，乙醇提取，提取液濃縮得乙醇浸膏；所述乙醇的濃度為 90% 100% ； (2)萃取分離將步驟(I)中制備的乙醇浸膏加水制備懸浮液，依次采用二氯甲烷萃和乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液濃縮得乙酸乙酯浸膏； (3)硅膠柱層析取步驟(2)中制備的乙酸乙酯浸膏進行硅膠柱層析，依次采用體積比為15:1 10:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、體積比為8:1 5:1的石油醚和乙酸乙酯混合液進行梯度洗脫，收集體積比為8:1 5:1的石油醚和乙酸乙酯混合洗脫液；所述石油醚的沸程為60 90°C ; (4)二次硅膠柱層析將步驟(3)中收集的洗脫液進行硅膠柱層析，采用二氯甲烷和甲醇的混合液進行等度洗脫或梯度洗脫；采用等度洗脫時，所述二氯甲烷和甲醇的體積比為8:1，收集2.5個柱體積后的洗脫液；采用梯度洗脫時，依次采用的體積比為12:1的二氯甲烷和甲醇混合液、體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合液進行梯度洗脫，收集體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合洗脫液； (5)反相柱層析取步驟(4)中收集的洗脫液，進行C18反相柱層析，依次采用30%甲醇和60%的甲醇進行梯度洗脫；收集60%甲醇洗脫液，回收溶劑，即得20 (s)-原人參二醇-3-酮。2.根據權利要求I所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周媛媛，于瑩，付蕾，
申請(專利權)人：黑龍江中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：
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