一種基于枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2n花粉的方法，于棗花粉母細胞旺盛減數分裂期，以秋水仙素為誘變劑，用鉆孔器對棗樹枝干基部進行打孔，然后將秋水仙素藥液直接滴注到枝干中，使藥液通過木質部向上運輸，阻止花粉母細胞減數分裂過程中紡錘絲的形成，誘導花粉染色體加倍，從而獲得2n花粉。該方法應用于棗樹2n花粉誘導，誘導時間容易掌握，并且可以在1天內對大量棗吊進行2n花粉誘導，并獲得高比例的2n花粉，加速棗樹有性多倍化育種進程。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種基于枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2η花粉的方法。
技術介紹
冬餓iZiziphus jujuba Mill.)為我國第一大干果樹種,近年來發展迅速。為適應棗產業的快速發展，新品種選育工作迫在眉睫。由于棗花小、去雄難度大，加之胚高度敗育，棗樹雜交育種舉步維艱，倍性育種已經成為培育棗新品種的重要途徑之一。通過無性多倍化獲得的多倍體，由于沒有外來優異基因的滲入，不能實現優異基因的重組，迫切需要通過有性多倍化途徑開展棗樹的倍性育種。2n花粉(又稱巨型花粉)在有性倍性育種中具有重要價值。據本專利專利技術人檢測，在自然條件下，絕大多數棗樹優良品種的2n花粉自然發生比例極低，僅有I. 79%的棗樹品種可以產生1%以上的2n花粉，最高達9. 41%，絕大多數優良品種的2n花粉自然發生比例極低，不能滿足倍性育種需要。因此，對棗樹優良品種進行2n花粉誘導，進而通過有性雜交整合優良性狀，進行有性多倍體育種，具有重要的價值。本專利專利技術人曾嘗試利用涂抹法、微創法進行巨型花粉的誘導，其中涂抹法費時費力，效率很低；微創法誘導2n花粉的比例可以達到18. 3%，但由于微創法是對較細的單個棗吊進行割傷處理，也比較費工，誘導效率仍然不能滿足大規模育種實踐的需要。本專利技術專利采用枝干滴注技術，使誘變劑通過枝干進入棗吊中，誘導時期容易掌握，由于在一個樹干處滴注可以影響其上幾十甚至幾百個棗吊，從而可以實現在I天內對大量棗吊進行2n花粉誘導，并且可以獲得高比例的2n花粉，大大提高了 2n花粉的誘導效率，對加速棗樹有性多倍化育種進程具有重要價值。
技術實現思路
本專利技術建立了一種基于枝干滴注技術簡潔高效誘導棗樹2n花粉的方法。本專利技術解決其技術問題所采用的技術方案是于棗花粉母細胞旺盛減數分裂期，以秋水仙素為誘變劑，利用鉆孔器對棗樹枝干基部進行打孔，然后采用輸液的方式將秋水仙素藥液直接滴注到枝干中，使藥液通過木質部向上運輸，阻止花粉母細胞減數分裂過程中紡錘絲的形成，誘導花粉染色體加倍，從而獲得2n花粉。本專利技術的具體內容，即利用枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2n花粉的具體方法如下 (1)枝干預處理于盛花前18-24d，選擇生長健壯的枝干，在枝干光滑部位用鉆孔器打直徑3mm的孔洞，深達木質部，但避免接觸到髓； (2)2n花粉的誘導首先用牛皮紙將輸液瓶和輸液管包嚴；然后將O.3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，秋水仙素溶液用量根據滴注部位以上的棗吊數量和長度來定，平均每棗吊用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中，用保鮮膜將針頭固定在孔中，調整流速，防止藥液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器；(3)花粉的采集和觀測到蕾裂期，采集枝干處理部位以上的花蕾，于室內用解剖針快速剝取成熟花粉，置于載玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置Ih后,鏡檢2η花粉比例及活力。本專利技術專利的有益效果是，通過枝干滴注秋水仙素，可高效誘導獲得高比例的2η花粉，直接用于授粉，可大幅度提高雜交后代中三倍體的出現幾率。該技術應用于棗樹2η花粉誘導，方法簡單便捷，誘導效率顯著提高。附圖說明圖I誘導獲得的高活力2η花粉(染成紅色的巨型花粉)。具體實施例方式以二倍體棗優良品種‘蜂蜜罐’和二倍體酸棗類型‘邢0604’為試材，于2012年5月7日選擇生長健壯的枝干，在枝干的光滑部位打直徑為3_的孔洞，深達木質部；用牛皮紙將輸液瓶和輸液管包嚴后，將O. 3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，滴注部位以上的棗吊平均每個用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中，用保鮮膜將針頭固定好，調整流速，并確保藥液不外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器，以滴注蒸餾水為對照；于5月25日-5月30日，采集滴注處理部位以上處于蕾裂期的花蕾，于室內用解剖針快速剝取成熟花粉，置于載玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置Ih后鏡檢；平均2n花粉比例分別達23. 4%和20. 3%，最高分別達31. 8%和23. 0%，所獲2n花粉的活力分別為80%和85%，而對照的平均2n花粉比例分別為O和3%，后者2n花粉活力為85%。權利要求1.一種基于枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2η花粉的方法，其特征在于包括以下幾個步驟(1)枝干預處理于盛花前18-24d，選擇生長健壯的枝干，在枝干光滑部位用鉆孔器打一孔洞，深達木質部；(2)2n花粉的誘導首先用牛皮紙或其他遮光材料將輸液瓶和輸液管包嚴；然后將O.3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，秋水仙素溶液用量根據滴注部位以上棗吊的數量和長度來定，平均每棗吊用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中， 將針頭固定好，防止藥液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器；(3)花粉的采集和觀測到蕾裂期，采集枝干處理部位以上的花蕾，快速剝取成熟花粉，置于載玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置Ih后，鏡檢2n花粉比例及活力。全文摘要，于棗花粉母細胞旺盛減數分裂期，以秋水仙素為誘變劑，用鉆孔器對棗樹枝干基部進行打孔，然后將秋水仙素藥液直接滴注到枝干中，使藥液通過木質部向上運輸，阻止花粉母細胞減數分裂過程中紡錘絲的形成，誘導花粉染色體加倍，從而獲得2n花粉。該方法應用于棗樹2n花粉誘導，誘導時間容易掌握，并且可以在1天內對大量棗吊進行2n花粉誘導，并獲得高比例的2n花粉，加速棗樹有性多倍化育種進程。文檔編號A01H1/08GK102972288SQ201210534328公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日專利技術者劉孟軍, 劉平, 李嬌 申請人:河北農業大學本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種基于枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2n花粉的方法，其特征在于包括以下幾個步驟：（1）枝干預處理??于盛花前18?24d，選擇生長健壯的枝干，在枝干光滑部位用鉆孔器打一孔洞，深達木質部；（2）2n花粉的誘導??首先用牛皮紙或其他遮光材料將輸液瓶和輸液管包嚴；然后將0.3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，秋水仙素溶液用量根據滴注部位以上棗吊的數量和長度來定，平均每棗吊用秋水仙素溶液0.5?0.8ml；之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中，將針頭固定好，防止藥液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器；（3）花粉的采集和觀測??到蕾裂期，采集枝干處理部位以上的花蕾，快速剝取成熟花粉，置于載玻片上，滴加0.5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置1h后，鏡檢2n花粉比例及活力。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉孟軍，劉平，李嬌，
申請(專利權)人：河北農業大學，
類型：發明
國別省市：
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