一種紅葉石楠體細(xì)胞60Co r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種紅葉石楠體細(xì)胞60Co?r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理方法，是將紅葉石楠胚性愈傷組織先用60Co?r射線輻射處理，然后再置于愈傷組織分化培養(yǎng)基上低溫處理，其后暗培養(yǎng)，最后繼代到培養(yǎng)基中繼續(xù)培育至長(zhǎng)出紅葉石楠組培苗即可移栽至大田種植。本發(fā)明專利技術(shù)建立的方法分化率高達(dá)65%，為紅葉石楠新品種開(kāi)發(fā)、優(yōu)質(zhì)品種的選育奠定了基礎(chǔ)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于植物福射誘變處理
,具體涉及一種紅葉石楠體細(xì)胞6ciCo r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理的方法。
技術(shù)介紹
紅葉石楠(Photiniafraser)是從光葉石楠(P. glabra)和石楠(P. serrulata)的雜交種中選育的新品種，屬薔薇科石楠屬常綠小喬木，具有生長(zhǎng)迅速，耐修剪，株形緊湊，萌芽力強(qiáng)，適用范圍廣等特點(diǎn)，是優(yōu)良的彩葉觀賞樹(shù)種。自上世紀(jì)九十年代引入我國(guó)以來(lái)，就被列為具有較高開(kāi)發(fā)價(jià)值的園林樹(shù)種。在我國(guó)南方廣泛種植，然而耐寒品種的缺乏成為制約我國(guó)北方地區(qū)園林綠化的栽植。因此，培育耐寒優(yōu)良紅葉石楠品系成為一個(gè)十分突出的生產(chǎn)實(shí)際問(wèn)題。在林木上傳統(tǒng)雜交育種是個(gè)非常漫長(zhǎng)的過(guò)程，目前，國(guó)內(nèi)對(duì)紅葉石楠的研究主要集中在組織培養(yǎng)及工廠化育苗成套技術(shù)、扦插繁殖育苗技術(shù)、引種適應(yīng)性和園林應(yīng)用等方面(楊靜，2008 ;畢麗華，2011 ;方敏彥，2012 ;)。而國(guó)外，則主要集中在對(duì)不同品種生理特點(diǎn)和栽培繁殖技術(shù)的研究(Haynes，1991 ;Tokatli，2011)。經(jīng)檢索有關(guān)紅葉石楠體細(xì)胞6°Cor射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理技術(shù)的研究未見(jiàn)有成功的報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種紅葉石楠體細(xì)胞6tlCo r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理的方法。本專利技術(shù)所述紅葉石楠體細(xì)胞6tlCo r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理的方法，是將紅葉石楠胚性愈傷組織先用6tlCo r射線輻射處理，然后再置于愈傷組織分化培養(yǎng)基上低溫處理，其后暗培養(yǎng)，最后繼代到培養(yǎng)基中繼續(xù)培育至長(zhǎng)出紅葉石楠組培苗即可移栽至大田種植；其特征在于所述紅葉石楠胚性愈傷組織是指在愈傷組織增殖培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)獲得的紅葉石楠胚性愈傷組織；所述6tlCo r射線輻射處理的方法是用6tlCo r射線輻射處理紅葉石楠胚性愈傷組織1-2小時(shí)，輻照劑量為15 45Gy ；所述低溫處理的方法是將輻射后的紅葉石楠材料轉(zhuǎn)入愈傷組織分化培養(yǎng)基上，在人工氣候箱下暗培，溫度為5±2°C，處理5-10d，之后再置于溫度為25±2°C條件下暗培養(yǎng) 20-25d ；所述紅葉石楠組培苗的培育方法是將暗培養(yǎng)后的紅葉石楠材料轉(zhuǎn)移到組培室光照條件下培養(yǎng)，溫度為25±2°C，光照為1500LX-1800LX，光照時(shí)間為14_16h/d，15±2d后分化產(chǎn)生綠芽，綠芽先轉(zhuǎn)到愈傷組織分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)20±2d，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上繼續(xù)培育，直至得到完整紅葉石楠組培苗；其中上述愈傷組織增殖培養(yǎng)基組成為改良MS+2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0. Img/L+6-節(jié)基氨基嘌呤(BA) 0. 5mg/L+ 萘乙酸(NAA) 20. Omg/L+phytagel 3. Og/L+ 鹿糖 20g/L ；上述愈傷組織分化培養(yǎng)基組成為改良MS+6-芐基氨基嘌呤(BA) 2. Omg/L+phytagel3. 5g/L+ 鹿糖 20g/L ；上述生根培養(yǎng)基組成為1/2MS+吲哚丁酸(IBA) 0. 2mg/L ；上述各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前，調(diào)整pH值至5. 8。上述述的紅葉石楠體細(xì)胞6tlCo r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理方法中所述6tlCor射線輻射處理的輻照劑量?jī)?yōu)選設(shè)置為30Gy，處理時(shí)間優(yōu)選設(shè)置為90分鐘。上述述的紅葉石楠體細(xì)胞6tlCo r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理方法中所述低溫處理的溫度優(yōu)選為5°C，處理時(shí)間優(yōu)選為7d。本專利技術(shù)以紅葉石楠的胚性愈傷組織為材料，以6tlCor射線為輻射源，研究了不同劑量的6tlCo r射線結(jié)合低溫處理對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)、分化和植株再生的影響，運(yùn)用離體培養(yǎng)方法從突變細(xì)胞再生出完整植株，建立紅葉石楠體細(xì)胞6tlCor射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理方法。本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)和積極效果I、本專利技術(shù)選用胚性愈傷組織輻射誘變與低溫定向篩選，得到的抗寒愈傷組織的分化再生是本技術(shù)的最終目標(biāo)，因?yàn)橹挥锌购t葉石楠植株，才可能成為北方寒冷地區(qū)的生產(chǎn)品種，從而拓寬了紅葉石楠種質(zhì)資源，為最終實(shí)現(xiàn)紅葉石楠抗寒育種打下基礎(chǔ)。2、本專利技術(shù)在充分利用6tlCor射線核輻射對(duì)紅葉石楠基因組改變的基礎(chǔ)上，采取復(fù)合誘變低溫處理技術(shù)，大大提高定向變異率，克服輻射育種中有利變異少的缺點(diǎn)。3、本專利技術(shù)采用了誘變低溫復(fù)合處理技術(shù)，其中采用輻照劑量為30Gy的6tlCo r射線處理90分鐘，5°C低溫處理7d，愈傷組織綠芽分化率高達(dá)65%。附圖說(shuō)明圖I、對(duì)照分化綠芽。圖2、30Gy劑量輻射和低溫處理7d分化綠芽。圖3、30Gy劑量輻射和低溫處理7d再生植株移栽苗。具體實(shí)施例方式實(shí)施例I以試管苗第3到第6片展開(kāi)葉為外植體，葉片帶短葉柄，將葉片周圍帶鋸齒狀葉緣切去，葉片沿主脈切成左右2半，在葉片上輕劃I刀，葉背朝下緊貼培養(yǎng)基放置，接種在改良MS+2, 4-DO. lmg/L+BAO. 5mg/L+NAA20. Omg/L+3. Og/L phytagel+20g/L 鹿糖胚性愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，PH值5. 8，暗培養(yǎng)10d，誘導(dǎo)體胚性愈傷組織為輻射材料。用輻射劑量為45Gy的6ciCor射線對(duì)上述輻射材料輻射處理60分鐘，將輻射后的材料，轉(zhuǎn)入改良MS+2. Omg/L BA+3. 5g/L phytagel+20g/L蔗糖胚性愈傷組織分化培養(yǎng)基上，pH值5. 8，在溫度為4°C低溫條件下暗培養(yǎng)5d，之后在溫度為25±2°C條件下繼續(xù)暗培養(yǎng)25d，中間繼代一次。將上述培養(yǎng)材料轉(zhuǎn)移到溫度為25°C，光照為1500LX，光照時(shí)間為16h/d組培室條件下培養(yǎng)，約15d分化產(chǎn)生綠芽，綠芽轉(zhuǎn)入改良MS+2. Omg/L BA+3. 5g/Lphytagel+20g/L蔗糖愈傷組織分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)20d。將上述生長(zhǎng)發(fā)育健壯的叢芽長(zhǎng)到4cm切成單株轉(zhuǎn)接到1/2MS+IBA 0. 2mg/L生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20d形成具有根、莖、葉的完整再生植株，即可煉苗移栽。通過(guò)本專利技術(shù)方法獲得的愈傷組織綠芽分化率為43%。實(shí)施例2以試管苗第3到第6片展開(kāi)葉為外植體，葉片帶短葉柄，將葉片周圍帶鋸齒狀葉緣切去，葉片沿主脈切成左右2半，在葉片上輕劃I刀，葉背朝下緊貼培養(yǎng)基放置，接種在改良MS+2, 4-DO. lmg/L+BAO. 5mg/L+NAA20. Omg/L+3. Og/L phytagel+20g/L 鹿糖胚性愈傷組織增 殖培養(yǎng)基上，pH值5. 8，暗培養(yǎng)10d，誘導(dǎo)體胚性愈傷組織為輻射材料。用輻射劑量為30Gy的6tlCor射線對(duì)輻射材料輻射處理90分鐘，將輻射后的材料，轉(zhuǎn)入改良MS+2. Omg/L BA+3. 5g/L phytagel+20g/L蔗糖胚性愈傷組織分化培養(yǎng)基上，pH值5. 8，在溫度為5°C低溫條件下暗培養(yǎng)7d，之后在溫度為25°C條件下繼續(xù)暗培養(yǎng)25d，中間繼代一次。將上述培養(yǎng)材料轉(zhuǎn)移到溫度為26°C，光照為1800LX，光照時(shí)間為16h/d組培室條件下培養(yǎng)，約15d分化產(chǎn)生綠芽，綠芽轉(zhuǎn)入改良MS+2. 0mg/L BA+3. 5g/L phytagel+20g/L蔗糖愈傷組織分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)20d。將上述生長(zhǎng)發(fā)育健壯的叢芽長(zhǎng)到4cm切成單株轉(zhuǎn)接到1/2MS+IBA 0. 2mg/L生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15d形成具有根、莖、葉的完整再生植株，即可煉苗移栽。通過(guò)本專利技術(shù)方法獲得的本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種紅葉石楠體細(xì)胞60Co?r射線輻射誘變和低溫復(fù)合處理的方法，是將紅葉石楠胚性愈傷組織先用60Co?r射線輻射處理，然后再置于愈傷組織分化培養(yǎng)基上低溫處理，其后暗培養(yǎng)，最后繼代到培養(yǎng)基中繼續(xù)培育至長(zhǎng)出紅葉石楠組培苗即可移栽至大田種植；其特征在于：所述紅葉石楠胚性愈傷組織是指在愈傷組織增殖培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)獲得的紅葉石楠胚性愈傷組織；所述60Co?r射線輻射處理的方法是：用60Co?r射線輻射處理紅葉石楠胚性愈傷組織1?2小時(shí)，輻照劑量為15～45Gy；所述低溫處理的方法是：將輻射后的紅葉石楠材料轉(zhuǎn)入愈傷組織分化培養(yǎng)基上，在人工氣候箱下暗培，溫度為5±2℃，處理5?10d，之后再置于溫度為25±2℃條件下暗培養(yǎng)20?25d；所述紅葉石楠組培苗的培育方法是：將暗培養(yǎng)后的紅葉石楠材料轉(zhuǎn)移到組培室光照條件下培養(yǎng)，溫度為25±2℃，光照為1500LX?1800LX，光照時(shí)間為14?16h/d，15±2d后分化產(chǎn)生綠芽，綠芽先轉(zhuǎn)到愈傷組織分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)20±2d，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上繼續(xù)培育，直至得到完整紅葉石楠組培苗；其中：上述愈傷組織增殖培養(yǎng)基組成為：改良MS+2，4?二氯苯氧乙酸（2,4?D）0.1mg/L+6?芐基氨基嘌呤（BA）0.5mg/L+萘乙酸（NAA）20.0mg/L+phytagel?3.0g/L+蔗糖20g/L；上述愈傷組織分化培養(yǎng)基組成為：改良MS+6?芐基氨基嘌呤（BA）2.0mg/L+phytagel3.5g/L+蔗糖20g/L；上述生根培養(yǎng)基組成為：1/2MS+吲哚丁酸（IBA）0.2mg/L；上述各種培養(yǎng)基在高壓滅菌前，調(diào)整pH值至5.8。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梁慧敏，夏陽(yáng)，燕麗萍，劉翠蘭，方敏彥，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東省林業(yè)科學(xué)研究院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：