一個微泡膜蛋白及其應用制造技術

細胞微泡與疾病有關，本發明專利技術涉及一個新發現的磷酸化CSE1L(染色體分離-1類蛋白，chromosome?segregation?1-like?protein)微泡膜蛋白及其應用。所揭示包含可與CSE1L或磷酸化CSE1L結合的組合物，用于分離、檢測或結合微泡，應用于疾病診斷或治療。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一個新發現的磷酸化CSElL細胞微泡膜蛋白及其應用。
技術介紹
細胞微泡(microvesicles)是由細胞膜衍生釋放到細胞外環境中的小粒子,其大小約直徑O. Iym至100 μπι。微泡參與蛋白酶、基因、小分子核糖核酸(RNA)、激素受體、細胞胞器等，在細胞與細胞之間的轉移，因而與多種疾病，包括癌癥的惡化有關(Simak 2006； Cocucci 2009 ；Muralidharan-Chari2010)。腫瘤細胞的侵襲和轉移為癌癥患者死亡的主要因素。腫瘤細胞藉由分泌蛋白酶，分解細胞外基質而進行癌侵襲和癌轉移。由腫瘤細胞釋放的微泡，富含可分解細胞外基質的蛋白酶，從而在癌細胞的侵襲和轉移上，起到重要作用(Cocucci 2009)。CSElL 蛋白(染色體分離-I 類蛋白，chromosome segregation 1-likeprotein)或稱細胞凋亡易感蛋白(CAS, cellular apoptosis susceptibility protein)(GenBank登錄號U33286),高度表現于多種癌癥的組織檢體(Brinkmannl995 ；Tung 2009 ；Tai 2010) o CSElL之前被Scherf等人發現可被細胞外信號調節激酶(extracellularsignal-regulated kinase, E RK)憐酸化，因此是一個酪氨酸憐酸化蛋白(tyrosinephosphorylated protein),且Scherf等人發現酪氨酸磷酸化的CSElL蛋白其功能在于促使細胞蛋白由細胞質往細胞核運輸(Scherf 1998)。目前所查資料表明，和CSElL蛋白相關的專利包括US6，664，057是關于鑒別一種與癌癥有關之人類染色體20ql3. 2上之新穎擴增子(amplicon)(此擴增子含CSElL基因)。US 6，072，031是關于CSElL之互補脫氧核糖核酸(complementary DNA, cDNA)及胺基酸序列，用于偵測正常細胞及癌細胞中CSElL基因之表現及擴增，此外將反義CSElL基因序列引入活細胞中可抑制細胞凋亡。US 6，207，380是關于衍生自角蛋白/細胞角蛋白、CSElL或mat-8的多肽及多核苷酸于人體泌尿道組織之表現，用于偵測、診斷、監測、活體內造影、預防或治療個體罹患泌尿系統疾病(如泌尿系統癌)。US 6，207，380亦揭示特異結合至泌尿道組織角蛋白/細胞角蛋白、CSElL或mat-8編碼之多肽或蛋白質之抗體，該分子有助于治療泌尿道疾病。故US6，207, 380描述利用特異結合至泌尿道組織之角蛋白/細胞角蛋白、CSElL或mat-8之抗體以治療泌尿道疾病。US 6，232，086揭示CSElL之互補脫氧核糖核酸及胺基酸序列，用于偵測正常細胞及癌細胞中CSElL基因之表現及擴增。US 6，156，564是關于偵測人類增生性細胞之方法，其包含測量人體組織檢體中CSElL蛋白質之表現量，以及偵測該人類蛋白質表現量較正常非增生性人類細胞之CSElL蛋白質表現量高至少兩倍以上。US 6，440，737是關于調控CSElL基因表現之反義化合物、組合物及方法。US20080081339是關于測量幾十個體液抗體，包括體液中CSElL “自體抗體“(非CSElL蛋白)作為前列腺癌的診斷標志物。US20050260639是關于檢測從體液或身體組織分離出之“癌細胞”內的CSE1L，以診斷胰腺癌。W02009/052573是關于檢測從體液或身體組織分離出之“癌細胞”內的幾百個轉錄核糖核酸包括CSElL的核糖核酸，以診斷胃腸癌。US20100120074是關于測量體液中的CSElL蛋白以診斷轉移性癌癥。由上述之說明可知這些先前技藝(專利)的內容，都在偵測細胞層級之CSElL基因表現或體液CSElL蛋白。
技術實現思路
本專利技術的一方面涉及于體外分離、結合或檢測微泡的方法，用以診斷或治療疾病。在本專利技術的一方面涉及診斷腫瘤的方法，包含以下步驟1)取得哺乳動物之體液；2)于體外檢測受檢測個體體液中微泡的CSElL或磷酸化CSElL量；2)于體外檢測正常個體體液中微泡的CSElL或磷酸化CSElL量做為對照組；3)依據受檢測個體與對照組個體 體液中微泡的CSElL或磷酸化CSElL量的差別，判別受檢測個體是否有腫瘤。在本專利技術的一方面涉及診斷腫瘤的方法，包含以下步驟1)取得哺乳動物之體液；2)于體外檢測受檢測個體體液中磷酸化CSElL量；2)于體外檢測正常個體體液中磷酸化CSElL量做為對照組；3)依據受檢測個體與對照組個體體液中磷酸化CSElL量的差別，判別受檢測個體是否有腫瘤。在本專利技術的一方面涉及由體液分離微泡的方法，包含以下步驟1)取得哺乳動物之體液；2)于體外以可和CSElL或磷酸化CSElL結合的抗體，分離與抗體結合之微泡。在本專利技術的一方面涉及檢測體液中微泡的方法，包含以下步驟1)取得哺乳動物之體液；2)于體外以抗CSElL抗體或抗磷酸化CSElL抗體，檢測與抗體結合之微泡。在本專利技術的一方面也涉及以可和CSElL或磷酸化CSElL結合的抗體與細胞微泡結合，用于預防或治療疾病的方法。優先考慮的疾病是癌癥。在本專利技術的一方面也涉及以含有抗CSElL抗體或抗磷酸化CSElL抗體的組合物與細胞微泡結合，以用于診斷或治療疾病。優先考慮的疾病是癌癥。本專利技術的其它用途，特點，及優點可以從下面的詳細描述和數據圖標中顯示。附圖說明圖I為本專利技術實施例I的圖，以免疫墨點法(immunoblotting),分析B16-dEV,B16-ras, B16-CSE1L，和 B16_Ras/anti_CSElL 細胞的 Ras 和 CSElL 蛋白的表達量。圖2為本專利技術實施例2的圖，顯示v-H-ras癌基因轉染誘導癌細胞微泡生成。圖3為本專利技術實施例3的圖，顯示v-H-ras癌基因轉染增加癌細胞分泌CSE1L。圖4為本專利技術實施例4的圖，顯示CSElL是一個磷酸化的蛋白。圖5為本專利技術實施例5的圖，顯示v-H-ras癌基因轉染增加癌細胞內CSElL蛋白之磷酸化，以及磷酸化CSElL蛋白存在于癌血清中。圖6為本專利技術實施例6的圖，顯示磷酸化ERK與CSElL高表達于大腸直腸癌腫瘤，且相對表染色強度一致。圖7為本專利技術實施例7的圖，顯示CSElL介導v-H-ras癌基因所誘導的癌細胞微泡生成。圖8為本專利技術實施例8的圖，顯示CSElL介導v-H-ras癌基因所誘導的癌細胞侵襲。圖9為本專利技術實施例9的圖，顯示CSElL介導v-H-ras癌基因所誘導的癌細胞轉移。圖10為本專利技術實施例10的圖，顯示CSElL位于微泡膜，而且抗CSElL的抗體能夠尋找并結合腫瘤。圖11為本專利技術實施例11的圖，顯示抗磷酸化CSElL抗體針對磷酸化CSElL蛋白 的專一'I"生結合。圖12為本專利技術實施例12的圖，顯示磷酸化CSElL蛋白位于細胞微泡。圖13為本專利技術實施例13的圖，顯示相對于由健康獻血者血清中分離到的微泡，由癌癥患者血清中分離到的微泡有較高的CSElL和磷酸化CSElL盛行率。圖14為本專利技術實施例14的圖，顯示相對于健康獻血者血清的磷酸化CSE1L，癌癥患者血清有較高的磷酸化CSElL盛行率。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種可結合CSE1L的抗體或可結合磷酸化CSE1L的抗體。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：江明聰，
申請(專利權)人：江明聰，
類型：發明
國別省市：