檢測食品紅10的試劑盒制造技術

本實用新型專利技術公開了一種檢測食品紅10的試劑盒，屬于添加劑檢測技術領域。包括盒體，盒體內主要有：具有放置試劑瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的試劑瓶、以及每個微孔內包被濃度為1-3μg/mL食品紅10特異性抗原的酶標板；所述試劑瓶包括：裝有濃度為1-3μg/mL食品紅10特異性抗體溶液的試劑瓶。用該試劑盒對食品紅10進行檢測，具有成本低廉、操作簡便、靈敏性高的優點，適合用于快速而準確的檢測大批量樣品中的食品紅10中。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及一種添加劑檢測技術，具體來說，特別是涉及一種檢測食品紅10的試劑盒。
技術介紹
食品紅10，又名酸性紅I或紅2G，化學名稱為8-乙酰氨基_2_苯偶氮基_1_萘酚基-3，6- 二磺酸二鈉鹽，屬偶氮類著色劑，易溶于水，具有優良的勻染性和滲染性，用作工業染色劑。英國常用于海鮮醬、臘腸、年糕、辣醬、紅醋、牛肉干等食品的著色，2007年歐洲食品安全局相關研究機構對食品紅10色素重新進行了安全評估，發現該色素在腸內能夠轉化為苯胺，后者為具有遺傳毒性，借此推斷食品紅10色素具有潛在的致癌作用，因而撤消 了日容許攝入量，禁止在食品中使用，我國、美國、加拿大、日本、澳大利亞等多國都明確禁止食品中使用食品紅10 ;而且，隨著化妝品中著色劑導致的皮膚病急劇增加，很多國家如美國、歐盟、日本等均對化妝品中著色劑的種類、使用范圍和用量有嚴格的規定，我國《化妝品衛生規范》(2007版)規定食品紅10為限用著色劑。因此，快速檢測食品紅10在食品和化妝品中的含量是非常必要的。
技術實現思路
基于此，本技術在于克服現有技術的缺陷，提供一種成本低廉、操作簡便、靈敏性高的檢測食品紅10試劑盒。其技術方案如下檢測食品紅10的試劑盒，包括盒體，盒體內主要有具有放置試劑瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的試劑瓶、以及每個微孔內包被濃度為1-3 μ g/mL食品紅10特異性抗原的酶標板；所述試劑瓶包括裝有濃度為1-3 μ g/mL食品紅10特異性抗體溶液的試劑瓶。下面對進一步技術方案進行說明在一些實施例中，所述試劑瓶還包括裝有辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠二抗的試劑瓶、裝有食品紅10標準品溶液的試劑瓶、兩瓶裝有顯色劑的試劑瓶、裝有終止液的試劑瓶、裝有洗滌液的試劑瓶、裝有濃縮樣品稀釋液的試劑瓶、裝有封閉液的試劑瓶。在其中一個實施例中，該試劑盒還包括有用于檢測時密封酶標板的封口膜。本技術的檢測食品紅10的試劑盒檢測原理為將食品紅10特異性抗原吸附于固相載體上，加入樣品或食品紅10的標準溶液及食品紅10特異性抗體工作液，待測樣品中食品紅10和固相載體上包被的食品紅10特異性抗原競爭結合食品紅10特異性抗體，孵育后，加入酶標二抗進行酶活性的放大作用，孵育，顯色后終止，測定樣品的吸光度，該值與樣品中食品紅10的量呈負相關，與標準曲線比較即可得出食品紅10濃度范圍。下面對前述技術方案的優點進行說明本技術的檢測食品紅10的酶聯免疫試劑盒，利用競爭酶聯免疫測定法檢測食品紅10，具有特異性高，結果準確且前處理簡單，對儀器設備要求低、檢測成本低的特點。同時，本試劑盒中的試劑以工作液形式提供，操作簡單、快捷，為使用者節省了時間并減少因步驟復雜造成的誤差。適合用于快速而準確的檢測大批量樣品中的食品紅10。附圖說明圖I是本技術實施例所述試劑盒結構示意圖；圖2是下凹瓶位設置示意圖；圖3是本技術實施例中酶標板結構示意圖。附圖標記說明1.盒體；2.下凹瓶位；3.塑料框架；4.酶標板；5.微孔。具體實施方式下面對本技術的實施例進行詳細說明，但不對本技術的內容造成任何限制。實施例I本實施例所述的檢測食品紅10試劑盒的主要組成成份如下如圖I-圖3所示,所述檢測食品紅10試劑盒的盒體I內具有固定泡沫模具形成的下凹瓶位2 (共有14個下凹瓶位)，下凹瓶位用于放置裝有溶液的試劑瓶；位于塑料框架3中的酶標板4，酶標板4中的微孔5內包被有食品紅10特異性抗原。具體組成如下I)食品紅10特異性抗原工作液；通過以下方法制得將O. 87g,即I. Ommol食品紅10和I. Olg,即IOmmol三乙胺分散于IOOmL干燥二氯甲烷中，零攝氏度下加入O. 5mL,即6. 46mmol甲磺酰氯作為活化試齊U，室溫攪拌3. 5h，食品紅10的醇羥基可轉化成甲磺酯基；隨后將甲磺酯化食品紅10加入無水乙醇中，加入20倍量的液氨，回流攪拌5h，制得能夠與蛋白質偶聯的食品紅10的半抗原；再將其與N-羥基丁二酰胺(NHS)和碳二亞胺(EDC)混合，再與牛血清白蛋白混合，室溫攪拌lh，偶聯制備得到食品紅10特異性抗原，并用濃縮樣品稀釋液稀釋至濃度為2 μ g/mL。2)食品紅10特異性抗體工作液；通過以下方法制得將合成得到的食品紅10特異性抗原作為免疫原對10周齡的Balb/c小鼠進行免疫。首次免疫使用完全弗氏佐劑與食品紅10特異性抗原的O. 01M，pH7. 4的磷酸鹽緩沖液乳化，抗原濃度為O. 4mg/mL，劑量為120 μ g/只，以后每次加強免疫使用不完全弗氏佐劑與食品紅10特異性抗原的O. 01M，pH7. 4的磷酸鹽緩沖液乳化，劑量同初次免疫。初次免疫兩周后，每間隔10天加強免疫一次，共免疫5-10次，當抗體效價不再升高時，進行最后一次免疫，最后一次不加免疫佐劑直接用食品紅10特異性抗原的O. 01M，pH7. 4的磷酸鹽緩沖液腹腔注射，劑量同初次免疫。尾部取血檢測血清效價。取血清效價高的小鼠，在無菌條件下，取其脾細胞按6:1比例與骨髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合。采用有限稀釋法篩選雜交瘤細胞，得到完全同質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交瘤細胞株。單克隆抗體的制備與純化Balb/C小鼠，于一周前采用不完全佐劑腹腔注射進行致敏，劑量為O. 5mL/只。將細胞濃度為I. 5萬/mL的雜交瘤細胞混懸液注射到小鼠腹腔中，劑量為O. 5mL/只。接種雜交瘤細胞疒10天后，收集腹水，反復收集數次。存于4°C冰箱保存。經辛酸-硫酸銨沉淀法進行腹水純化。具體方法每I份腹水中加入3份乙酸鈉緩沖液(濃度0.05mol/L，pH 4. 0)，用濃度O. Immo 1/L NaOH調整pH值至4. 5，在4°C下攪拌30min,期間緩慢加入辛酸,按稀釋前腹水體積計算40 μ L/mL ;在4°C靜止3h,離心(10140r/mi n, 30min)，取上清液，保持在4°C環境中，30min內加入(NH4)2SO4使其終濃度為O. 277g/mL,靜止lh,4°C離心(10140r/min, 30min),棄上清液,得到單克隆抗體沉淀，并用濃縮樣品稀釋液稀釋至濃度為2 μ g/mL。3)辣根過氧化物酶標記羊抗鼠二抗；由商業公司提供的辣根過氧化物酶標記羊抗鼠二抗；4 )食品紅IO標準品溶液6瓶；濃度分別為IX IO5 μ g/L、I X IO4 μ g/L、I X IO3 μ g/L、I X IO2 μ g/L、IXlO1U g/L、1Χ10°μ g/L ；5)酶標板；96孔聚苯乙烯酶標板，由商業公司提供；6)底物顯色劑；由顯色劑A和顯色劑B組成，顯色劑A為濃度為30%的過氧化氫水溶液，顯色劑B為濃度為10mg/mL的四甲基聯苯胺DMSO溶液；7)洗滌液；為含有重量比為O. 05%-0. 5%吐溫-20的O. OlM, pH為7. 4的磷酸鹽緩沖液；8)終止液；為2mol/L的硫酸溶液；9)封閉液；為含5%脫脂奶粉的O. OlM, pH7. 4的磷酸鹽緩沖液；10)濃縮樣品稀釋液；為O. OlM, pH7. 4的磷酸鹽緩沖液(即磷酸根濃度為O. 01M/L, pH7. 4的磷酸鹽緩沖液)；11)自封袋；由商業公司提供。實施例2間接競爭ELISA方法的建立。采用間接競爭ELISA法檢測食品紅10本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種檢測食品紅10的試劑盒，其特征在于，包括盒體，盒體內主要有：具有放置試劑瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的試劑瓶、以及每個微孔內包被濃度為1?3μg/mL食品紅10特異性抗原的酶標板；所述試劑瓶包括：裝有濃度為1?3μg/mL食品紅10特異性抗體溶液的試劑瓶。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：羅海英，郭新東，黃金鳳，冼燕萍，侯向昶，吳玉鑾，吳文海，王斌，
申請(專利權)人：廣州市質量監督檢測研究院，
類型：實用新型
國別省市：