一種基于NK1R蛋白的白血病檢測(cè)試劑盒制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種基于NK1R蛋白的白血病檢測(cè)試劑盒。具體地，本發(fā)明專利技術(shù)涉及：檢測(cè)受試者中NK1R表達(dá)水平的方法；受試者中NK1R的表達(dá)水平在白血病病人檢測(cè)中的用途；以及涉及一種試劑盒產(chǎn)品，其包括作為活性成分的NK1R的抗體和包括涉及該產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及基于神經(jīng)激肽1受體(NK1R)的一種白血病檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用。具體地，本專利技術(shù)涉及：檢測(cè)受試者中NK1R表達(dá)水平的方法；受試者中NK1R的表達(dá)水平在白血病病人檢測(cè)中的用途；以及涉及一種試劑盒產(chǎn)品，其包括作為活性成分的NK1R的抗體和包括涉及該產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)。
技術(shù)介紹
癌癥是一類嚴(yán)重危害人類健康的疾病，目前全球癌癥死亡人數(shù)高于艾滋病、結(jié)核病和瘧疾死亡人數(shù)的總和，已成為全球頭號(hào)殺手。2015年6月2日，美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)議落幕，根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)發(fā)布的《全球癌癥報(bào)告2014》，2012年全球癌癥患者和死亡病例均有所增加，新增癌癥病例有近一半出現(xiàn)在亞洲，其中大部分在中國(guó)，中國(guó)新增癌癥病例高居第一位。該報(bào)告預(yù)測(cè)全球癌癥病例將呈現(xiàn)迅猛增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，由2012年的1400萬(wàn)人，逐年遞增至2025年的1900萬(wàn)人，到2035年將達(dá)到2400萬(wàn)人。而白血病是一類造血系統(tǒng)的惡性疾病，是國(guó)內(nèi)十大高發(fā)惡性腫瘤之一，占腫瘤發(fā)病率的第六位，在我國(guó)各年齡組惡性腫瘤的死亡率中分別占男性的第6位和女性的第8位，在兒童及35歲以下的死亡率中占第1位。WHO預(yù)計(jì)，在全球范圍內(nèi)，新增癌癥病例和癌癥患者死亡率也將會(huì)以每年1％的速度遞增，而在中國(guó)、俄羅斯和印度這些國(guó)家增長(zhǎng)速度會(huì)更快，估計(jì)到2030年全球?qū)⒖赡苡?500萬(wàn)人遭受癌癥的折磨，將新增2700萬(wàn)癌癥病例，死于癌癥的人數(shù)將達(dá)到1700萬(wàn)人，這一數(shù)字對(duì)許多國(guó)家的健康護(hù)理體系來(lái)說(shuō)是難以承受的。神經(jīng)激肽受體(NeurokininReceptors)是由七個(gè)疏水跨膜區(qū)構(gòu)成的G蛋白偶聯(lián)受體家族成員，有三種亞型，分別為神經(jīng)激肽受體1，神經(jīng)激肽受體2和神經(jīng)激肽受體3。神經(jīng)激肽受體1在中樞和外周的神經(jīng)元、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肌肉和不同類型的免疫細(xì)胞呈現(xiàn)特異性表達(dá)。神經(jīng)激肽受體2主要在外周表達(dá)，在中樞只有在特定腦區(qū)有表達(dá)。相反，神經(jīng)激肽受體3主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)，在外周的表達(dá)被限制在特定的組織中。由于神經(jīng)激肽1受體的序列已經(jīng)明確，神經(jīng)激肽1受體的商業(yè)化抗體已成熟，該抗體的產(chǎn)生對(duì)于研究基于神經(jīng)激肽1受體的相關(guān)疾病提供了諸多便利。目前還未見(jiàn)關(guān)于神經(jīng)激肽1受體作為試劑盒在白血病檢測(cè)領(lǐng)域的相關(guān)研究報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為了向在正常體檢中的人們提供檢測(cè)發(fā)現(xiàn)白血病可能性的新途徑或提供更廣泛的選擇，本專利技術(shù)的專利技術(shù)人研究發(fā)現(xiàn)：與健康人相比，神經(jīng)激肽1受體在白血病患者外周血白細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)。因此，本專利技術(shù)一方面提供了一種檢測(cè)受試者可能患白血病的方法，其包括在所述受試者施中檢測(cè)神經(jīng)激肽1受體的表達(dá)水平。本專利技術(shù)的另一方面提供了神經(jīng)激肽1受體的抗體在制備用于檢測(cè)受試者是否患有白血病或是否具有患有白血病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒中的用途。優(yōu)選地，所述的檢測(cè)是通過(guò)檢測(cè)受試者外周血中神經(jīng)激肽1受體表達(dá)水平而進(jìn)行的。示例性地，如果受試者周血中神經(jīng)激肽1受體表達(dá)水平是正常對(duì)照組的1.3-100倍或更高，則可以判定該受試者患有白血病或具有患有白血病風(fēng)險(xiǎn)。例如，本專利技術(shù)所述的高表達(dá)是指是對(duì)照組(健康組)表達(dá)水平的1.3倍、1.31倍、1.32倍、1.33倍、1.34倍、1.35倍、1.36倍、1.37倍、1.38倍、1.39倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍或更高。本專利技術(shù)的再一方面提供了一種檢測(cè)受試者是否患有白血病或是否具有患有白血病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，其包括作為活性成分的神經(jīng)激肽1受體的抗體；以及包括該涉及抗體產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)。在本專利技術(shù)中，其中所述的神經(jīng)激肽1受體的抗體是指與神經(jīng)激肽1受體特異性結(jié)合的抗體，例如特異性與神經(jīng)激肽1受體結(jié)合的單克隆抗體或者多克隆抗體。對(duì)于本專利技術(shù)所述的受試者，其優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人。本專利技術(shù)的專利技術(shù)人出乎意料的發(fā)現(xiàn)，受試者外周血中神經(jīng)激肽1受體的表達(dá)水平與該受試者是否患有白血病或者是否具有患白血病的風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)。例如，如果受試者外周血中神經(jīng)激肽1受體的表達(dá)水平相對(duì)健康受試者是高表達(dá)的，則可診斷為該受試者患有白血病或者具有患白血病的風(fēng)險(xiǎn)。這對(duì)于早發(fā)現(xiàn)白血病并進(jìn)行及時(shí)治療贏得了時(shí)間。示例性地，本專利技術(shù)的試劑盒、檢測(cè)或者用途可以作為診斷白血病的輔助手段。也就是說(shuō)，醫(yī)生或者其他醫(yī)務(wù)人員可以結(jié)合受試者其他的理化指標(biāo)或影像結(jié)果給出受試者的診斷結(jié)果。如本文所使用的，“包含”、“包括”、“含有”或“特征在于”同義，并且是包括在內(nèi)的或開(kāi)放性的，并且不排除另外的未陳述的元件或方法步驟。術(shù)語(yǔ)“包含”在本文中的任何表述，特別是在描述本專利技術(shù)的方法、用途或產(chǎn)品時(shí)，應(yīng)理解為包括基本上由所述組分或元件或步驟組成和由所述組分或元件或步驟組成的那些產(chǎn)品、方法和用途。本文示例性描述的本專利技術(shù)適當(dāng)?shù)乜梢栽诓淮嬖诒疚奈淳唧w公開(kāi)的任何一種或多種元件、一種或多種限制的情況下進(jìn)行實(shí)踐。本文已采用的術(shù)語(yǔ)和表述用作描述性而不是限制性術(shù)語(yǔ)，并且在此種術(shù)語(yǔ)和表述的使用中不預(yù)期排除所示和所述特征或其部分的任何等價(jià)物，但應(yīng)認(rèn)識(shí)到各種修飾在請(qǐng)求保護(hù)的本專利技術(shù)的范圍內(nèi)是可能的。因此，應(yīng)當(dāng)理解盡管本專利技術(shù)已通過(guò)優(yōu)選實(shí)施方案和任選特征具體公開(kāi)，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以采用本文公開(kāi)的概念的修飾和變化，并且此類修飾和變化被視為在如由附加權(quán)利要求定義的本專利技術(shù)的范圍內(nèi)。附圖說(shuō)明圖1為受試者外周血中神經(jīng)激肽1受體表達(dá)水平的代表性Westernblotting圖片，其中P代表patient，指白血病患者；V代表volunteers，指健康志愿者。為更清楚地說(shuō)明本專利技術(shù)，現(xiàn)結(jié)合如下實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但這些實(shí)施例僅僅是對(duì)本專利技術(shù)的示例性描述，并不能解釋為對(duì)本申請(qǐng)的限制。實(shí)施例1.材料和方法1.1細(xì)胞株及抗體人慢性粒性白血病細(xì)胞K562購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤細(xì)胞庫(kù)。神經(jīng)激肽1受體的兔源一抗抗體購(gòu)自巴傲德生物科技有限公司，使用時(shí)按1：1000比例稀釋，辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的羊抗兔的二抗購(gòu)自巴傲德生物科技有限公司，使用時(shí)按1：5000稀釋。內(nèi)參抗體GAPDH同樣購(gòu)自巴傲德，使用時(shí)按1：10000稀釋。1.2白血病病人和正常人血液樣品白血病病人外周血取自浙江省人民醫(yī)院血液科。正常人外周血取自浙江省中醫(yī)院下沙院區(qū)體檢中心。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)將K562細(xì)胞培養(yǎng)于含10％FBS(Fetalbovineserum)的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)培養(yǎng)基中(含谷氨酰胺、10mMHEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonicacid)、1.0mM丙酮酸鈉、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素)，于37℃、5％CO2、飽和濕度下培養(yǎng)，每3天傳代一次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞制備蛋白樣品并于-80度保存，用于與白血病病人蛋白樣品以及健康志愿者蛋白樣品一起做Westernblotting檢測(cè)。1.2.2全血樣品中白細(xì)胞分離方法將正常人或白血病患者的外周血樣4℃,450g(約2300rpm)離心10min，取血清于干凈的1.5mL的EP管中，于—80℃下保存；往剩余血紅色沉淀中加約3倍體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕渦旋或顛倒搖勻后，冰上裂解15min，其間輕輕渦旋混勻兩本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
特異性結(jié)合神經(jīng)激肽1受體的抗體在制備用于檢測(cè)受試者是否患有白血病或是否具有患有白血病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒中的用途。

【技術(shù)特征摘要】
1.特異性結(jié)合神經(jīng)激肽1受體的抗體在制備用于檢測(cè)受試者是否患有白血病或是否具有患有白血病風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒中的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，所述的檢測(cè)是通過(guò)檢測(cè)受試者外周血中神經(jīng)激肽1受體表達(dá)水平而進(jìn)行的。3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的用途，其中所述的受試者為哺乳動(dòng)物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述的哺乳動(dòng)物為人。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述的抗體為單克隆抗體...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：付彩云，周涵薇，陳麒，施越，葛晨濤，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：浙江理工大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：浙江;33