檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的ELISA試劑盒制造技術(shù)

本實用新型專利技術(shù)涉及一種檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留量的酶聯(lián)免疫試劑盒。該試劑盒組成包括：96孔酶標板、酶標二抗、喹諾酮類藥物抗體工作液、喹諾酮類藥物6個濃度的標準品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液、高濃度標準品、蓋板膜、自封袋、說明書和質(zhì)檢報告。采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔中預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中含有的喹諾酮類藥物將和微孔中預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭結(jié)合抗喹諾酮類藥物抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中喹諾酮類藥物的殘留量。與儀器分析技術(shù)相比具有使用方便、高靈敏度等特點，可在水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的殘留量檢測中發(fā)揮重要作用。（*該技術(shù)在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本技術(shù)涉及檢測喹諾酮類藥物殘留量的試劑盒，特別是檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留量的酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)試劑盒，ELISA (Enzyme Linked ImmunosorbentAssay)是酶聯(lián)免疫吸附劑測定的簡稱，是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種酶免技術(shù)。
技術(shù)介紹
喹諾酮類抗菌藥(4-quinolones),又稱批酮酸類或批唳酮酸類，是一類較新的合成抗菌藥，該類藥物的開發(fā)可以追溯到1962年,Lesher從合成抗痕藥氯喹中分離出一種副產(chǎn)品-萘啶酸，喹諾酮類歷經(jīng)40多年的發(fā)展，共開發(fā)出了四代喹諾酮類藥物，共計50多種藥物。喹諾酮類抗菌藥以細菌的脫氧核糖核酸(DNA)為靶位，通過選擇性的抑制細菌DNA促旋酶與拓撲異構(gòu)酶IV而造成染色體的不可逆損害，而使細菌細胞不再分裂，主要作用于革蘭陰性菌的抗菌藥物，對革蘭陽性菌的作用較弱(某些品種對金黃色葡萄球菌有較好的抗菌作用)。已成為獸醫(yī)臨診和水產(chǎn)養(yǎng)殖中最重要的抗感染藥物之一，被大量用于治療、預(yù)防和促生長，由于其耐藥性和潛在的致癌性引起廣泛的關(guān)注。在組織中，恩諾沙星的標示殘留物為恩諾沙星和環(huán)丙沙星，其中以肝臟組織和腎臟組織中的殘留物濃度最高，其次是肌肉和脂肪附著的皮膚組織，恩諾沙星其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星(CIF)仍具有生物活性。氧氟沙星(OFL)其主要以原形藥物的形式存在于組織中；培氟沙星(PEF)在體內(nèi)代謝率接近100%，而其代謝產(chǎn)物是諾氟沙星(N0R)。本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測產(chǎn)品，與高效液相等儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等特點，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本技術(shù)所要解決的問題是提供一種小巧輕便的喹諾酮類藥物殘留量檢測試劑盒，其操作簡便，檢測快速、準確、靈敏度高，成本低，穩(wěn)定性好，需要的技術(shù)含量不高，可進行一次連續(xù)多個樣品中喹諾酮類藥物殘留量的測定，減少了檢測樣本所需要的時間。本技術(shù)的技術(shù)方案是一種檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留量的酶聯(lián)免疫試劑盒，試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔中預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中殘留的喹諾酮類藥物和微孔中預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗喹諾酮類藥物抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留喹諾酮類藥物的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中喹諾酮類藥物的殘留量。本技術(shù)所提供的一種檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的ELISA試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的一塊96孔的酶標板、14瓶試劑，其特征在于酶標板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔中預(yù)包被喹諾酮類藥物偶聯(lián)抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶3喹諾酮類藥物標準品溶液、酶標二抗、抗體工作液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。還包括一張蓋板膜和放試劑的下凹瓶位、一個自封袋、一份說明書和一份質(zhì)檢報告，盒體是硬紙盒；96孔試劑板為聚苯乙烯酶標板，放于真空鋁鉬袋內(nèi)；蓋板膜是塑料硬膜；標準品溶液和高濃度標準品溶液均用黑色帽的白色PE塑料瓶，酶標二抗用紅色帽的白色PE塑料瓶，抗體工作液用綠色帽的白色PE塑料瓶，顯色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，顯色液B液用紅色帽的黑色PE塑料瓶，終止液用黃色帽的白色PE塑料瓶，濃縮洗滌液用透明帽的半透明PE塑料瓶，濃縮復(fù)溶液用藍色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位共15個，由塑料泡沫制成。酶標板是由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標反應(yīng)微孔條組成，每個可拆裝酶標反應(yīng)微孔條有8個反應(yīng)孔，每個反應(yīng)孔預(yù)包被喹諾酮類藥物偶聯(lián)抗原；蓋板膜大小與酶標板橫切面大小一致；標準品溶液7瓶，Iml/瓶；酶標二抗I瓶，7ml ;抗體工作液I瓶，7ml ;顯色液A液I瓶，7ml ;顯色液B液I瓶，7ml ;終止液I瓶，7ml ;濃縮洗滌液I瓶，40ml ;濃縮復(fù)溶液I瓶，50ml。經(jīng)實驗表明本試劑盒具有很聞的靈敏度水廣品樣本的最低檢測限為l.Oyg/kg,回收率為80%±20%，相對于其他喹諾酮類藥物檢測方法，本試劑盒所需儀器較少，且所需儀器同類實驗室一般均有配備，所需成本較低。本技術(shù)的有益效果是能快速、簡便、靈敏、準確地用于水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留量的檢測。附圖說明圖圖圖圖圖圖圖I為本技術(shù)酶標板的側(cè)面縱剖面圖2為本技術(shù)酶標板的側(cè)面橫剖面圖3為本技術(shù)酶標板的俯視4為本技術(shù)蓋板膜平面5為本技術(shù)試劑瓶縱剖面平面6為本技術(shù)固定泡沫模具的俯視7為本技術(shù)盒體與固定泡沫模具的側(cè)視圖。(長為 8. 55cm)(長為 12. 8cm)具體實施方式一、試劑盒組裝酶標反應(yīng)微孔條(2)預(yù)包被喹諾酮類藥物偶聯(lián)抗原(3)固定于酶標板的外框支撐架(I)上，酶標反應(yīng)微孔條(2)可隨要求拆卸；蓋板膜(4)用于酶標板置水浴或恒溫箱內(nèi)反應(yīng)時封蓋酶標反應(yīng)微孔條(2);透明帽的半透明塑料試劑瓶(5)用于封裝40ml濃縮洗滌液；藍色帽的半透明塑料試劑瓶(5)用于封裝50ml濃縮復(fù)溶液；白色帽￠)的白色塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml顯色液A液，紅色帽￠)的黑色塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml顯色液B液，黃色帽(6)的白色塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml終止液，紅色帽的白色塑料試劑瓶(8)用于封裝7ml酶標二抗，綠色帽的白色塑料試劑瓶(8)用于封裝7ml喹諾酮類藥物抗體工作液，黑色帽的白色塑料試劑瓶(9)用于封裝Iml/瓶的標準品溶液；泡沫塑料模具(10)4有15個瓶位，放置位置依次為40ml濃縮洗滌液瓶位(18)，50ml濃縮復(fù)溶液(11)，7ml顯色液A液瓶位(14)，7ml顯色液B液瓶位(13)，7ml終止液瓶位(12)，7ml喹諾酮類藥物抗體工作液瓶位(16)，7ml酶標二抗瓶位(15)，7瓶Iml/瓶各種濃度的標準品溶液瓶位(17)，盒體為(19)是硬紙盒。二、樣本的前處理I.配液配液I :O. IM氫氧化鈉溶液稱取2. Og氫氧化鈉，加500ml去離子水溶解混勻配液2 復(fù)溶工作液用去離子水將5X濃縮復(fù)溶液按1:4體積比進行稀釋(I份5X濃縮復(fù)溶液+4份去離子水)用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶工作液在4°C環(huán)境下可保存一個月配液3 洗滌工作液用去離子水將20X濃縮洗滌液按1:19體積比進行稀釋(I份20X濃縮洗滌液+19份去離子水)用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4°C環(huán)境可保存一個月2.樣本處理步驟(I)取2. 0±0· 05g均質(zhì)樣本至50ml聚苯乙烯離心管中，加入Iml O. IM氫氧化鈉溶液，再加入7ml乙腈，用振蕩器充分振蕩5min ；3000g以上，室溫(20 25°C /68 77 °F)離心 IOmin ；(2)取2ml上清液于IOml玻璃試管中，于50 60°C水浴氮氣流下吹干；(3)加入Iml正已烷用渦旋儀渦動30s，再加入Iml復(fù)溶工作液，渦動30s，3000g以上，室溫(20 25°C /68 77 °F)離心5min ；(4)除去上層有機相，取下層50μ I用于分析。三、使用試劑盒的操作步驟I、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫(2(T25°C)平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放入自封袋，保存于疒8°C。3、洗滌工作液在使用前也需回溫。4本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的ELISA試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的一塊96孔的酶標板、14瓶試劑，其特征在于：酶標板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔中預(yù)包被喹諾酮類藥物偶聯(lián)抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶喹諾酮類藥物標準品溶液、酶標二抗、抗體工作液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物的ELISA試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的一塊96孔的酶標板、14瓶試劑，其特征在于酶標板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔中預(yù)包被喹諾酮類藥物偶聯(lián)抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶喹諾酮類藥物標準品溶液、酶標二抗、抗體工作液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ELISA試劑盒，其特征在于還包括一張蓋板膜和放試劑的下凹瓶位、一個自封袋、一份說明書和一份質(zhì)檢報告，盒體是硬紙盒；96孔試劑板為聚苯乙烯酶標板，放于真空鋁鉬袋內(nèi)；蓋板膜是塑料硬膜；標準品溶液和高濃度標準品溶液均用黑色帽的白色PE塑料瓶，酶標二抗用紅色帽的白色PE塑料瓶，抗體工作液用綠色帽的白色PE塑...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：萬宇平，陶光燦，馮靜，王禮貴，顧蓉蓉，楊昌松，韓京朋，石潔，
申請(專利權(quán))人：北京勤邦生物技術(shù)有限公司，
類型：實用新型
國別省市：