本發明專利技術公開了一種利用超高效液相色譜快速測定金柑中檸檬苦素和諾米林的測定方法，屬于化學分析檢測領域。該方法將金柑果實去籽，45℃熱風烘干至恒重，粉碎過40目篩，制得金柑粉末。稱取5.0g粉末置于燒瓶中，加入100mL二氯甲烷，50℃超聲波提取1h。提取液抽濾后取濾液，50℃真空旋轉蒸發至干，乙腈溶解殘渣并定容至100mL，混勻，經0.22μm濾膜過濾得清液，采用超高效液相色譜分析。該方法提取方法簡單、操作簡便、靈敏度高、重現性好，可同時快速測定金柑中檸檬苦素和諾米林的含量。本發明專利技術具有高效、合理、準確和重復性好等特點，適用于金柑中檸檬苦素和諾米林的微量分析。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及，屬于化學分析檢測領域。
技術介紹
金柑(Fortunella crassifolia Swingle)也稱金橘、金實、柑子、山橘、盧橘、四季橘，是蕓香科、柑橘亞科、金柑屬植物，為福建省特色水果之一。尤溪縣是福建省金柑主產區，也是我國金柑五大產區之一，2007年尤溪金柑獲得國家地理標志產品保護。近年來，金柑果實因其營養豐富，風味獨特，已漸漸被消費者接受。金柑鮮食通常無苦味，但經榨汁、殺菌等加工處理后就表現出苦味，這種現象稱之為“延遲苦味”。金柑汁出現“延遲苦味”的原因主要是在酸性條件和檸檬苦素D環內酯水解酶的催化下，果實中所存在的非苦味的檸檬苦素A-環內酯轉變成了具有強烈苦味的檸檬苦素類化合物所造成。檸檬苦素類化合物是一類高度氧化的四環三萜類植物次生代謝產物，主要存在于 蕓香科和楝科的植物組織中。金柑中含有較多朽1檬苦素(Limonin)和諾米林(Nomilin),這2種苷兀是引起金柑汁苦味的主要原因之一。據報道，有強烈苦味的朽1檬苦素和諾米林在果汁中含量超過6mg/L，那么果汁就不適合飲用。據相關研究報道，檸檬苦素在水溶液中的苦味閾值約為6mg/L，比柚皮苷要苦20倍。由于金柑中檸檬苦素類化合物等苦味物質的存在，大大影響了金柑加工產品的口感，限制了金柑的深加工和消費者的需求。檸檬苦素含量的高低直接影響金柑及其產品的品質，測定檸檬苦素的含量有利于控制金柑及其相關產品的質量。這些苦味物質雖影響金柑產品的口感，但具有抗菌、抗病毒、抗氧化和抗腫瘤等功能，應用價值很高。因此建立一種可靠的分析方法，分析金柑中檸檬苦素和諾米林的含量變化，不僅有利于金柑產品的深加工，也有利于開發利用金柑中的苦味物質。目前，檸檬苦素的提取方法主要有結晶分離法、索氏提取法、超臨界流體萃取法、樹脂吸附法、微波消解法和超聲波法等。其中超聲波法提取是一種新興的提取技術，此方法快速、高效，尤其適于易揮發、低沸點的有效成分提取。研究金柑中的苦味物質，需要一種能精確定量金柑苦味物質的分析方法。已報道的檢測方法很多，主要有HPLC法、Davis法、TLC法、UV法、RIA法等。以上方法中Davis法測定的步驟繁瑣，UV法僅適用于對檸檬苦素類化合物總量的測定，TLC法因依靠目測進行定量，測試結果誤差較大，RIA法檢測不僅需用到昂貴的計數器，而且還存在放射性保護和廢物處理等問題。目前多采用HPLC法檢測檸檬苦素類化合物，但是由于水果與果汁中檸檬苦素類化合物含量常超越該方法的線性范圍和檢出限，測定結果有誤差。同時相同流速下分析時間較長，通常為十幾分鐘，消耗流動相。隨著色譜柱填料技術的發展，超高效液相色譜(Ultra Performance LiquidChromatography, UPLC)技術比傳統的HPLC技術具有更高的分離能力，大大改善了分析速度、靈敏度和分離度。目前，對于應用超高效液相色譜法同時測定金柑中檸檬苦素和諾米林的方法未見文獻報道及專利公開。本方法旨在建立UPLC同時測定金柑中檸檬苦素和諾米林的分析方法，以實現檸檬苦素類化合物快速、準確的檢測，以豐富檸檬苦素類化合物的檢測手段。
技術實現思路
本專利技術目的為提供一種超高效液相色譜技術快速測定金柑中檸檬苦素和諾米林的定量分析方法，該方法提取方法簡單、操作簡便、靈敏度高、重現性好，可同時快速測定金柑中檸檬苦素和諾米林的含量。本專利技術的技術方案如下 利用超高效液相色譜快速測定金柑中檸檬苦素和諾米林的方法，步驟如下將金柑果實去籽，45°C熱風烘干至恒重，粉碎過40目篩，制得金柑粉末；稱取5. Og金柑粉末置于燒瓶中，加入IOOmL 二氯甲烷，50°C超聲波提取lh，提取液抽濾后取濾液，50°C真空旋轉蒸發至干，乙腈溶解殘渣并定容至IOOmL,經O. 22 μ m濾膜過濾得清液，采用超高效液相色譜分析，測定金柑中檸檬苦素和諾米林的含量；超高效液相色譜的分析條件為ACQUITY UPLC BEH C18規格為2. ImmX 100 mm、I. 7 μ m的色譜柱，流動相為體積比45 55的乙腈一/K，柱溫為35°C，流速為0. 3mL/min，進樣量2yL，檢測波長為215nm。所述超高效液相色譜的檢測器為PDA檢測器。所述金柑果實應挑選無病蟲害、無霉變、無腐爛的金柑果實作為加工原料。本專利技術的優點為 (I)本專利技術建立了一種同時檢測檸檬苦素和諾米林的分析方法，操作簡便、步驟較少。本專利技術通過優化色譜條件，使檸檬苦素和諾米林濃度范圍分別為I 1780μ g/mL和I 1720 μ g/mL時與色譜峰面積具有良好線性關系，滿足在日常檢測中柑橘類水果的檸檬苦素和諾米林的檢測要求，克服了傳統高效液相色譜對檸檬苦素和諾米林檢測范圍較低的不足。(2)本專利技術采用了超高效液相色譜技術有效減少了分析時間、節省了流動相用量。將常規液相色譜分析所需的幾十分鐘時間縮短為幾分鐘，流動相的消耗量不及傳統方法的十分之一。在保證分離度的同時，降低了分析成本，提高了分析效率。(3)本專利技術的檸檬苦素的加標回收率在97. 19 100. 06%之間，相對標準偏差(RSD)為O. 74 2. 25% ;諾米林的加標回收率在95. 35 99. 83%之間，相對標準偏差(RSD)為O. 8(Γ3. 36% ;方法的重復性較高，準確性較好。附圖說明圖I為檸檬苦素與諾米林的紫外掃描吸收圖；其中圖I(a)為檸檬苦素的紫外掃描吸收圖，圖I (b)為諾米林的紫外掃描吸收圖。圖2為標準品和提取樣品的UPLC色譜圖；其中圖2 Ca)為標準品中檸檬苦素、諾米林的UPLC色譜圖，峰I :檸檬苦素，峰2 :諾米林；圖2 (b)為提取樣品中檸檬苦素、諾米林的UPLC色譜圖，峰I :檸檬苦素，峰2 :諾米林。圖3為UPLC標準工作曲線；其中圖3 (a)為檸檬苦素的UPLC標準工作曲線，圖3(b)為諾米林的UPLC標準工作曲線。具體實施例方式通過以下具體實施步驟，進一步描述本專利技術，但是實施例僅用于說明，并不能限制本專利技術的范圍。測試儀器與色譜條件 ACQUITY UPLC超高效液相色譜儀(美國Waters公司);色譜柱型號ACQUITY UPLC BEH C18 柱(2. ImmX 100 mm, I. 7 μ m, Waters 公司，USA);流動相乙腈水(45 : 55);柱溫35°C;流速0. 3mL/min ;進樣體積:2 μ L ;檢測器=PDA檢測器；檢測波長215nm ;流動相梯度程序等度洗脫。輔助類儀器 高速組織搗碎機(天津市臺斯特儀器有限公司，FW135);超聲波振蕩器(上海生析超聲儀器有限公司，DS-8510 DTH);高速冷凍離心機(美國貝克曼公司，AvantiJ-E);分析天平(德國賽多利斯)；旋轉蒸發儀(上海亞榮儀器生化廠，RE-52AA)超純水純化系統·(美國Millipore公司)；渦旋混合器。試劑和樣品 乙腈(色譜純)；水為超純水；二氯甲烷(分析純)、乙醇(分析純)；檸檬苦素和諾米林標樣，購自SIGMA公司。標準品與樣品的制備 標準溶液配制分別準確稱取檸檬苦素和諾米林標準品O. 0178g和O. 0172g,用乙腈溶解并定容至10mL。分別配制成含朽1檬苦素I. 78mg/mL和諾米林I. 72mg/mL的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種利用超高效液相色譜快速測定金柑中檸檬苦素和諾米林的方法，其特征在于將金柑果實去籽，45℃熱風烘干至恒重，粉碎過40目篩，制得金柑粉末；稱取5.0g金柑粉末置于燒瓶中，加入100mL二氯甲烷，50℃超聲波提取1h，提取液抽濾后取濾液，50℃真空旋轉蒸發至干，乙腈溶解殘渣并定容至100mL，經0.22μm濾膜過濾得清液，采用超高效液相色譜分析，測定金柑中檸檬苦素和諾米林的含量；超高效液相色譜的分析條件為：?ACQUITY?UPLC?BEH?C18規格為2.1mm×100?mm、1.7μm?的色譜柱，流動相為體積比45∶55的乙腈??水，柱溫為：35℃，流速為：0.3mL/min，進樣量：2μL，檢測波長為：215nm。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭寶東，張怡，孟鵬，盧旭，曾紹校，
申請(專利權)人：福建農林大學，
類型：發明
國別省市：
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