本方法公開了一種同時檢測奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，包括以下步驟：利用無水乙醇超聲提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素，同時沉淀蛋白，提取液經離心過膜后，用碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。本方法具有前處理簡單、定性準確、定量快速等特點，適合于奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的同時檢測。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及了，具體涉及一種高效液相色譜法測定奶粉中香蘭素、乙基香蘭素含量的檢測方法。
技術介紹
香蘭素(3-甲氧基-4-羥基苯甲醛)、乙基香蘭素(3-乙氧基-4-羥基苯甲醛)均為合成香精，兩者均為白色或微黃色結晶性粉末，微溶于水，溶于乙醇、甘油、乙醚、氯仿及香料中。香蘭素具有香莢蘭香氣及濃郁的奶香，乙基香蘭素香氣是香蘭素的3-4倍，廣泛用于食品、巧克力、冰淇淋、飲料以及日用化妝品中起增香和定香作用。據歐盟專家委員會2000年報道，大劑量可導致頭痛、惡心、嘔吐、呼吸困難，甚至損傷肝、腎。 GB2760-2011《食品添加劑使用標準》中規定較大嬰兒和幼兒配方食品中可以使用香蘭素、乙基香蘭素和香莢蘭豆浸膏，最大使用量分別為5mg/100mL、5mg/100mL和按照生產需要適量使用，其中IOOmL以即食食品計，生產企業應按照沖調比例折算成配方食品中的使用量。我國禁止在0-6月的I階段嬰兒配方奶粉中添加。目前，香蘭素的檢測方法較多，主要包括高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法、液相色譜-質譜法、離子色譜法等，但提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的前處理方法不盡相同。李小運、史海良等采用50°C熱水溶解奶粉，超聲提取，經酸沉淀蛋白后，過濾，濾液分別采用高效液相色譜儀、液相色譜-串聯質譜儀分析。(李小運等，液相色譜-質譜聯用技術同時測定嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素，農業機械，2012(9) =126-127 ；史海良等，HPLC法測定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素，糧油加工，2012 (12) : 175-176)歐菊芳等將奶粉樣品加水，振蕩混勻后，轉移至分液漏斗，加稀硫酸溶液、乙醇、乙醚萃取，合并乙醚層于另一分液漏斗。用稀NaOH溶液分兩次洗滌乙醚液，棄乙醚層，合并水層，用稀硫酸調PH至酸性。再用乙醚分兩次萃取，收集乙醚層，旋轉蒸干，無水乙醇復溶，氣相色譜儀測定。(歐菊芳等，氣相色譜法測定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素和乙基香蘭素，江西科學，2011，29 (I) 23-26)經實驗得知，乙基香蘭素在熱水中的溶解性不好，在甲醇、乙醇中的溶解度較高，為實現兩種香精的同時檢測，迫切需要尋找一種簡便快速、準確度高的前處理方法，以滿足奶粉中兩種物質檢測工作的需要。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題在于尋找一種簡便、快速、有效的前處理方法，提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素，從而提聞檢測效率。本專利技術所述的的技術問題可通過以下技術方案得以解決(I)準確稱取l-2g奶粉樣品于50mL離心管中，加入10_20mL無水乙醇，超聲提取20_30min ；(2)提取液在8000-9000r/min條件下離心3-5min,取上清液過O. 22 μ m微孔濾月吳，濾液待測；(3)濾液經高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，定量分析。采用如下的高效液相色譜條件儀器=Agilent 1200液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器；色譜柱碳十八燒基鍵合娃膠為填充劑的色譜柱4. 6 X 150mm, 5 μ m ; 流動相乙腈O. 02mo 1/L磷酸二氫鈉溶液=25 75，v/v ；流速0.8-1. 2mL/min ;進樣量10-50yL;柱溫25-40O;檢測波長278nm。本專利技術的有益效果在于，所建立的奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的同時檢測方法，具有前處理簡單、基質干擾小、準確度高等特點，能夠滿足日常檢測工作的需要。說明書附I香蘭素、乙基香蘭素標準品的HPLC圖譜具體實施例方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步詳細說明，但本專利技術并不局限于具體實施例。實施例I某品牌幼兒配方奶粉(3段)中香蘭素、乙基香蘭素含量的測定I、分析步驟稱取奶粉樣品l.OOg，精確到O. OOOlg，于50mL離心管中，加入IOmL無水乙醇，混勻后超聲提取20min，8000r/min冷凍離心5min，上清液過0. 22 μ m微孔濾膜，待HPLC測定。2、高效液相色譜條件流動相乙腈:0. 02mol/L磷酸二氫鈉溶液=25 : 75, v/v ;流速:1. OmL/min ;進樣量=IOyL ;柱溫30°C ;檢測波長278nm。3、標準工作曲線將1000 μ g/mL 的標準儲備液逐級稀釋得 I. 00，2. 00，5. 00，10. O, 25. O μ g/mL 的標準工作液。按照上述儀器條件測定，香蘭素標準曲線方程為Y = 28. 3Χ+6. 8，相關系數R2 =O.9996 ;乙基香蘭素標準曲線方程為=Y = 15. 5Χ+4. 2，相關系數R2 = O. 9995。4、試樣測定及加標回收結果經3次平行實驗測定，該品牌幼兒奶粉中未檢出香蘭素和乙基香蘭素。采用該樣品進行加標實驗，加標回收率在77. 6-92. 4%之間，相對標準偏差在0. 6-4. 4%之間。實施例2某品牌幼兒配方奶粉(4段)中香蘭素、乙基香蘭素含量的測定該品牌幼兒配方奶粉(4段)食品標簽配料中有乙基香蘭素，采用同實施例I相同的方法，測定其香蘭素、乙基香蘭素的含量，實驗結果表明，該樣品中香蘭素未檢出，乙基香蘭素含量為129. 3mg/kg。上述實施例僅供說明本專利技術之用，而并非是對本專利技術專利的限制；應當指出的是，對于本領域的普通技術人員，在不脫離本專利技術構思范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，這些都屬于本專利技術的保護范圍 ；因此，凡跟本專利技術權利要求范圍所做的均等變化與修飾，均應屬于本專利技術權利要求的覆蓋范圍。權利要求1.，其特征包括如下步驟 (1)樣品加入有機溶劑，提取樣品中的香蘭素、乙基香蘭素，同時沉淀樣品中蛋白質； (2)提取液經離心處理后，取上清液過微孔濾膜； (3)濾液經高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量，計算奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的含量。2.根據權利要求書I所述的方法，其特征在于，所用的提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的有機溶劑為無水乙醇。3.根據權利要求書I所述的方法，其特征在于，所述的提取方式為超聲提取。全文摘要本方法公開了，包括以下步驟利用無水乙醇超聲提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素，同時沉淀蛋白，提取液經離心過膜后，用碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。本方法具有前處理簡單、定性準確、定量快速等特點，適合于奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的同時檢測。文檔編號G01N30/06GK102944616SQ201210388809公開日2013年2月27日 申請日期2012年10月15日 優先權日2012年10月15日專利技術者宋薇 申請人:青島譜尼測試有限公司本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種同時檢測奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，其特征包括如下步驟：(1)樣品加入有機溶劑，提取樣品中的香蘭素、乙基香蘭素，同時沉淀樣品中蛋白質；(2)提取液經離心處理后，取上清液過微孔濾膜；(3)濾液經高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量，計算奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的含量。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：宋薇，
申請(專利權)人：青島譜尼測試有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。