兩形真桿菌制劑及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及兩形真桿菌制劑及其應(yīng)用，具體涉及兩形真桿菌作為主要活性成份制成微生態(tài)制劑，及該微生態(tài)制劑在治療相關(guān)疾病中的應(yīng)用，該微生態(tài)制劑包括藥品組合物、保健品、飲品、獸藥和飼料添加劑。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及凸腹真桿菌和兩形真桿菌制劑及其應(yīng)用，具體涉及凸腹真桿菌和兩形真桿菌單獨或組合作為主要活性成份制成微生態(tài)制劑，及該微生態(tài)制劑在治療相關(guān)疾病中的應(yīng)用，屬于生物藥領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
目前，抗菌藥在臨床和養(yǎng)殖業(yè)等方面濫用的危害已引起重視，由于微生態(tài)制劑沒有副作用，利用微生態(tài)制劑治療相關(guān)疾病、保健及作為獸藥和飼料添加劑已得到廣泛應(yīng)用。目前的微生態(tài)制劑主要成份包括雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等，治療相關(guān)疾病療效不是非常理想。丁酸(酪酸)已經(jīng)被證實是結(jié)腸能量的首選來源，提供腸粘膜70%的能量，促進(jìn)腸粘膜細(xì)胞增殖生長及消化系統(tǒng)發(fā)育成熟，同時丁酸也是調(diào)節(jié)免疫的重要物質(zhì)。本專利技術(shù)微生態(tài)制劑進(jìn)入腸道由于能夠分泌大量酪酸，治療相關(guān)疾病療效顯著，并可作為保健品、獸藥和飼料添加劑應(yīng)用，社會意義巨大，且未見相關(guān)研究報道，特申請此專利技術(shù)專利。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種新型的微生態(tài)制劑，該微生態(tài)制劑中的主要活性成份進(jìn)入腸道能產(chǎn)生大量丁酸，修復(fù)腸粘膜，調(diào)節(jié)免疫，抑制炎癥因子過度表達(dá)，同時該微生態(tài)制劑還能恢復(fù)腸道菌群平衡和提高機(jī)體及粘膜免疫，有效治療消化系統(tǒng)疾病、營養(yǎng)吸收障礙性疾病、自身免疫性疾病、心腦血管疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、手足口病及提高免疫和抗癌。其中所述消化系統(tǒng)疾病包括腹瀉、腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、抗生素相關(guān)性腹瀉、偽膜性腸炎、小兒肺炎繼發(fā)性腹瀉、腸癌、腫瘤放化療輔助治療、腹脹和 消化不良、便秘、便臭、便臭中毒綜合征、肝膽疾病、病毒性腹瀉、喂養(yǎng)不耐受、壞死性小腸結(jié)腸炎、黃疸、口腔潰瘍、鵝口瘡、促進(jìn)小兒腸道發(fā)育成熟、促進(jìn)消化吸收、營養(yǎng)保健和生長發(fā)育；所述營養(yǎng)吸收障礙性疾病包括佝僂病；所述自身免疫性疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎；所述心腦血管疾病包括高脂血癥、高血壓、腦血栓、腦栓塞、腦缺血、心肌梗塞、冠心病、腦梗死、腦出血、心絞痛、心肌炎、動脈粥樣硬化；所述變態(tài)反應(yīng)性疾病包括濕疹；所述提高免疫包括治療反復(fù)呼吸道感染。本專利技術(shù)的微生態(tài)制劑的制備優(yōu)選是通過下述步驟實施的，但不局限于此制備工藝，公知的能實現(xiàn)的制備工藝均可以采取含凸腹真桿菌或兩形真桿菌的樣本，優(yōu)選人或動物糞便，更優(yōu)選健康嬰兒糞便，然后將樣品置于滅菌厭氧瓶內(nèi)，吹入氮氣同時充分混合，迅速從中取2克樣品加入ISmL滅菌的稀釋液中，吹入氮氣同時充分混勻，在無菌操作臺內(nèi)，進(jìn)行10' 10_2、10' 1θΛ 10_5，10_6，10_7梯度稀釋，取10_5，10_6，10_7三個稀釋梯度，分別涂布于凸腹真桿菌或兩形真桿菌選擇性單菌落分離固體培養(yǎng)基上，置于厭氧罐內(nèi)，厭氧37°c下培養(yǎng)48小時，選擇長勢良好的單菌落分別接種于液體擴(kuò)增培養(yǎng)基中，置于厭氧罐內(nèi)，厭氧37°C下擴(kuò)增培養(yǎng)48小時。將所得培養(yǎng)液離心(12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干燥，調(diào)制出各菌種的干燥菌粉，然后進(jìn)行菌種鑒定、產(chǎn)丁酸實驗和毒性試驗，將鑒定的無毒性凸腹真桿菌或兩形真桿菌干燥菌粉單獨或組合按需要比例添加輔料制成片劑、膠囊和散劑等各種劑型或獸 藥、飼料添加劑。凸腹真桿菌或兩形真桿菌選擇性單菌落分離固體培養(yǎng)基優(yōu)選但不局限于純化水IOOmL,胰蛋白胨Ig,酵母浸膏O. 5g,磷酸氫二鈉O. 4g,葡萄糖O. 15g,可溶性淀粉O. 05g,L-半胱氨酸O. 02g, L-半胱氨酸鹽酸鹽O. 05g,瓊脂I. 5g，調(diào)pH值7. 7，115°C，20分鐘高壓滅菌。滅菌后在冷卻到60°C后加入5mL脫纖維馬血，ES溶液4mL。其中ES溶液丙酸納30%，硫酸鏈霉素4*%，硫酸巴龍霉素2*%，硫酸多粘囷素BO. 02%。凸腹真桿菌或兩形真桿菌液體擴(kuò)增培養(yǎng)基優(yōu)選但不局限于絞碎的牛肉500g，蒸餾水11，IN NaOH 25. OmL，用精牛肉或馬肉，絞碎去除脂肪和連接組織，混合肉、水和氫氧化鈉煮沸，同時攪拌，冷卻至室溫，略去表面的脂肪并過濾，保留濾液，補(bǔ)充足夠的蒸餾水濾液恢復(fù)I升原體積。向每IOOmL濾液中添加蛋白胨2. Og、葡萄糖O. 5g、酵母浸膏I. Og、鹽酸半胱氨酸O. 05g、鹽溶液4. OmL,維生素Kl溶液O. lmL、5mg/mL氯化血紅素溶液O. 5mL，調(diào)pH至7. 2 士 O. 1，在厭氧管內(nèi)通入97%的氮，3%的氫，蓋緊丁基橡膠瓶塞帽，121°C高壓滅菌15min。其中1、鹽溶液的配制稱取無水氯化鈣O. 2g，硫酸鎂O. 2g，磷酸氫二鉀lg，磷酸二氫鉀lg，碳酸氫鈉IOg,氯化鈉2g,加蒸懼水至IOOOmL ;2、氯化血紅素溶液(5mg/mL)的配制稱取氯化血紅素0. 5g溶于lmol/L氫氧化鈉ImL中，加蒸餾水至lOOmL，121°C高壓滅菌15min，冰箱保存；3、維生素K1溶液的配制稱取維生素K1Ig加無水乙醇99mL，過濾除菌，放冷暗處保存。本專利技術(shù)優(yōu)選使用的凸腹真桿菌的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)I、菌落形態(tài)顯微鏡觀察長I. 5-2微米，寬0. 5微米，短桿，革蘭氏染色陽性。平板形態(tài)菌體呈圓形、凸起、周邊整齊、光滑；顏色灰色，不透明。2、生理生化鑒定石蕊牛奶_ ;脂酶_ ;明膠液化_ ;過氧化氫酶_ ;精氨酸產(chǎn)氨_ ;七葉苷水解+ ;吲哚-;硫化氫乙酰甲基甲醇試驗(V-P試驗)-;是否需氧厭氧性。3、糖酵解實驗鑒定纖維二糖_ ；D-果糖+ ；D-半乳糖+ ;匍萄糖+ ；D-甘露糖+ ；D-棉子糖-；鼠李糖;山梨糖_ ;松三糖_ ;蔗糖_ ;海藻糖_ ;木糖+ ;麥芽糖+ ;淀粉+ ;蜜二糖+ ;核糖+ ;甘油_ ;七葉靈+ ;阿拉伯糖_ ;果糖+。本專利技術(shù)優(yōu)選使用的兩形真桿菌的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)I、菌落形態(tài)顯微鏡觀察長2. 0-5微米，寬I. O微米，中長桿，革蘭氏染色陽性。平板形態(tài)菌體呈圓形、凸起、周邊整齊、光滑；顏色灰色，不透明。2、生理生化鑒定石蕊牛奶_ ;脂酶_ ;明膠液化_ ;過氧化氫酶_ ;精氨酸產(chǎn)氨_ ;七葉苷水解+ 引哚_;硫化氫_ ；v-p試驗-;是否需氧厭氧性。 3、糖酵解實驗鑒定纖維二糖-；D-果糖+ ；D-半乳糖+ ;匍萄糖+ ；D-甘露糖+ ；D-棉子糖-；鼠李糖;山梨糖_ ;松三糖_ ;蔗糖_ ;海藻糖+ ;木糖_ ;麥芽糖_ ;淀粉_ ;蜜二糖_ ;核糖_ ;七葉靈+ ;甘油_ ;阿拉伯糖_。專利技術(shù)人利用上述方法通過凸腹真桿菌或兩形真桿菌選擇性單菌落分離固體培養(yǎng)基分離鑒定出了凸腹真桿菌或兩形真桿菌。本專利技術(shù)所述凸腹真桿菌優(yōu)選但不限于凸腹真桿菌(Eubacterium ventriosum)、CGMCC、保存編號2465。本專利技術(shù)所述兩形真桿菌優(yōu)選但不限于兩形真桿菌(Eubacterium biforme)、CGMCC、保存編號2466。本專利技術(shù)所述的凸腹真桿菌或兩形真桿菌指活生物個體。 本專利技術(shù)是以有效劑量的上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌單獨或組合作為主要藥物活性成份，按照一定的制劑工藝，加入常規(guī)的賦形劑、調(diào)味劑、崩解劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤齊U、黏合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液體制劑、灌腸劑等劑型。本專利技術(shù)所述以有效劑量的上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌單獨或組合作為主要藥物活性成份制成活菌微生態(tài)制劑，也可以是上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌單獨或本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種新型微生態(tài)制劑，其特征在于該微生態(tài)制劑是用兩形真桿菌作為活性成份制成制劑。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：崔云龍，李洪福，王發(fā)合，
申請(專利權(quán))人：青島東海藥業(yè)有限公司，北京普爾康醫(yī)藥高科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：