OGP-AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株，它涉及一種融合蛋白轉基因工程菌株。解決目前尚無同時有效治療骨質疏松和血栓藥品的缺陷。OGP-AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株大腸桿菌BL21(DE3-OGP/AcAP5)按以下步驟制備：一、獲得融合蛋白DAN片段；二、雙酶切質粒；三、酶連接；四、轉化大腸桿菌BL21。本發明專利技術可用于醫藥制備領域。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種融合蛋白轉基因工程菌株。
技術介紹
老年人骨質疏松發病率較高，全球有2億骨質疏松患者，并且女性多于男性。根據世界衛生組織(WHO)的標準，美國國家健康和營養調查(NHANESIII，1988 1994年)結果表明，骨質疏松嚴重影響老年人生活質量，50歲以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他們的一生中都會出現骨質疏松性骨折，一旦患者經歷了第一次骨質疏松性骨折，繼發性骨折的危險明顯加大。中國老年人居于世界首位，現有骨質疏松癥患者9000萬，占總人口的7.1%。隨著社會老齡化的進程，骨質疏松癥的發病率呈上升趨勢，預計到2050年將增加到 2.21億，那時全世界一半以上的骨質疏松性骨折將發生在亞洲，絕大部分在中國。有學者對1995 1996年美國骨質疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年發生數進行調查顯示，每年發生骨質疏松性骨折150萬次，其中椎體骨折70萬次，腕部骨折20萬次，髖部骨折30萬次，其它骨折30萬次。血栓形成是一種涉及許多彼此相互作用的遺傳和環境因素的多因素變化的過程。而對于老年人其凝血系統又有其特殊性，老年人纖維蛋白原(FIB)含量、組織型纖溶酶原激活物增加以及纖溶酶原激活物抑制劑復合物的增加都導致老年人的高凝狀態，所以更容易形成血栓；其中研究發現絕經期后的女性的血栓發生率遠高于男性。對于老年人骨質疏松和血栓已成為常見多發病，且往往同時存在。如果患者服用多種藥物同時治療骨質疏松和血栓，容易產生藥物拮抗反應；若要錯開服藥時間一方面要靠考慮藥物的半衰期，另一方面還要考慮藥物有效濃度，而且給患者造成不便。目前缺乏一種可以同時有效治療骨質疏松和血栓的藥品。
技術實現思路
本專利技術要解決目前尚無同時有效治療骨質疏松和血栓藥品的缺陷，而提供的一種0GP-AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株。0GP-AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株名為大腸桿菌BL21 (DE3_0GP/AcAP5)，大腸桿菌BL21(DE3-0GP/AcAP5)按以下步驟制備一、將含有0GP-AcAP5融合蛋白基因的質粒載體pUC (0GP/AcAP5)用BamH I和EcoRI雙酶切，獲得0GP-AcAP5融合蛋白的DAN片段；二、用 BamHI 和 EcoR I 雙酶切質粒 pGEX_6P_l ；三、0GP-AcAP5融合蛋白的DAN片段與經過雙酶切的載體pGEX_6P_l進行酶連接，然后16°C放置連接過夜，得到載體pGEX-0GP/AcAP5 ；四、用載體PGEX-0GP/ACAP5轉化大腸桿菌BL21 (DE3)，選擇陽性重組子，即獲得0GP-AcAP5融合蛋白轉基因工程菌大腸桿菌BL21 (DE3_0GP/AcAP5)。本專利技術中0GP_AcAP5融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO 1所示。本專利技術中0GP_AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。本專利技術0GP-AcAP5融合蛋白轉基因工程菌大腸桿菌BL21 (DE3_0GP/AcAP5)發酵產生的0GP-AcAP5融合蛋白含有成骨生長肽(OGP)和犬鉤蟲抗凝血肽(AcAP5)，共94個氨基酸，成骨生長肽和犬鉤蟲抗凝血肽之間用GlyThr相連接。本專利技術0GP_AcAP5融合蛋白轉基因工程菌大腸桿菌BL21 (DE3-0GP/AcAP5)發酵產生的0GP_AcAP5融合蛋白可用于同時治療骨質疏松和血栓，適合同時患有這兩種疾病的患者使用。且0GP-AcAP5融合蛋白為微生物制劑，不產生拮抗反應，使用安全。本專利技術采用生物基因工程手段獲得大腸桿菌BL21 (DE3-0GP/AcAP5)。采用本專利技術基因工程菌大腸桿菌BL21 (DE3-0GP/AcAP5)可大規模發酵生產0GP_AcAP5融合蛋白，具有廣泛應用前景。本專利技術為治療骨質疏松和血栓奠定了物質基礎。 具體實施例方式本專利技術技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。具體實施方式一本實施方式0GP_AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株名為大腸桿菌BL21 (DE3-0GP/AcAP5)，大腸桿菌 BL21 (DE3_0GP/AcAP5)按以下步驟制備一、將含有0GP-AcAP5融合蛋白基因的質粒載體pUC (0GP/AcAP5)用BamH I和EcoRI雙酶切，獲得0GP-AcAP5融合蛋白的DAN片段；二、用 BamHI 和 EcoR I 雙酶切質粒 pGEX_6P_l ；三、0GP-AcAP5融合蛋白的DAN片段與經過雙酶切的載體pGEX_6P_l進行酶連接，然后16°C放置連接過夜，得到載體pGEX-0GP/AcAP5 ；四、用載體pGEX-0GP/AcAP5轉化大腸桿菌BL21 (DE3)，選擇陽性重組子，即獲得0GP-AcAP5融合蛋白轉基因工程菌大腸桿菌BL21 (DE3_0GP/AcAP5)。本實施方式步驟四采用電擊轉化法轉化大腸桿菌BL21 (DE3)。具體實施方式二 本實施方式與具體實施方式一的不同點在于步驟一中質粒載體pUC(0GP/AcAP5)酶切反應體系為pUC (OGP/AcAP5)20 μ IOXMbuffer6μ1BamHl3μ1EcoR I3μ1不含 DNA 酶的 ddH2028μ1ο其他步驟及參數與具體實施方式一相同。具體實施方式三本實施方式與具體實施方式一或二的不同點在于步驟三中質粒pGEX-6P-l酶切反應體系為載體 pGEX-6P-l20 μ IOXMbuffer6μ1BamHl3μ1EcoR I3μ1不含 DNA 酶的 ddH2028μ1。其他步驟及參數與具體實施方式一或二相同。具體實施方式四本實施方式與具體實施方式一、二或三的不同點在于步驟二中酶連接反應體系為· 雙酶切的載體pGEX-6P-l3 μ 融合蛋白的DNA片段13μ1 10 X Τ4 DNA 連接酶 buffer2μΙ Τ4 DNA連接酶2μ1。其他步驟及參數與具體實施方式一、二或三相同。具體實施方式五本實施方式與具體實施方式一至四之一的不同點在于步驟一中0GP-AcAP5融合蛋白的基因序列如SEQ ID Ν0:1所示。其他步驟及參數與具體實施方式一至四之一相同。本實施方式0GP_AcAP5融合蛋白的核酸序列由生物工程公司合成，并由生物工程公司制成含有融合蛋白的核酸的質粒載體pUC(0GP/AcAP5)。具體實施方式六本實施方式與具體實施方式一至五之一的不同點在于步驟一中0GP-AcAP5融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。其他步驟及參數與具體實施方式一至五之一相同O具體實施方式七本實施方式0GP_AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株名為大腸桿菌BL21(DE3-0GP/AcAP5)，大腸桿菌 BL21(DE3-0GP/AcAP5)按以下步驟制備一、將含有0GP_AcAP5融合蛋白基因的質粒載體pUC (0GP/AcAP5)用BamH I和EcoRI雙酶切，獲得0GP-AcAP5融合蛋白的DAN片段；二、用 BamHI 和 EcoR I 雙酶切質粒 pGEX_6P_l ；三、0GP_AcAP5融合蛋白的DAN片段與經過雙酶切的載體pGEX_6P_l進行酶連接，然后16°C放置連接過夜，得到載體pGEX-0GP/AcAP5 ；四、用載體pGEX-0本文檔來自技高網...
【技術保護點】
OGP？AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株，其特征在于OGP？AcAP5融合蛋白轉基因工程菌株名為大腸桿菌BL21(DE3？OGP/AcAP5)，大腸桿菌BL21(DE3？OGP/AcAP5)按以下步驟制備：一、將含有OGP？AcAP5融合蛋白基因的質粒載體pUC(OGP/AcAP5)用BamH？I和EcoRI雙酶切，獲得OGP？AcAP5融合蛋白的DAN片段；二、用BamHI和EcoR？I雙酶切質粒pGEX？6P？1；三、OGP？AcAP5融合蛋白的DAN片段與經過雙酶切的載體pGEX？6P？1進行酶連接，然后16℃放置連接過夜，得到載體pGEX？OGP/AcAP5；四、用載體pGEX？OGP/AcAP5轉化大腸桿菌BL21(DE3)，選擇陽性重組子，即獲得OGP？AcAP5融合蛋白轉基因工程菌大腸桿菌BL21(DE3？OGP/AcAP5)。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：余瓊，
申請(專利權)人：黑龍江大學，
類型：發明
國別省市：
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