本發明專利技術公開了一種禾草種子高效無菌苗獲得的方法。該方法包括如下步驟：將預處理過的禾本科草種子培養，得到所述無菌苗；所述預處理包括如下步驟：1)去稃：將禾本科草種子與濃硫酸混合1-3分鐘，去除所述濃硫酸；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到去稃后的禾本科草種子；2)滅菌：將去稃后的禾本科草種子與乙醇水溶液混合2-4分鐘，去除乙醇水溶液；然后將禾本科草種子與體積百分含量為8-12％的次氯酸鈉水溶液混合12-17分鐘，優選混合15分鐘，去除次氯酸鈉水溶液；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到滅菌后的禾本科草種子。本發明專利技術提供的高效率滅菌獲得禾草種子無菌苗和愈傷組織的方法在科研和實踐上有重要的意義。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及。
技術介紹
羊草(Leymuschinensis)、新麥草(Psathyrostachys juncea)、高羊茅(Testucaarundinacea)等禾本科草的種子外面有外稃和內稃包裹，用普通方法滅菌常常不徹底，在用種子誘導愈傷組織或種無菌苗方面存在困難。過去誘導無菌苗和愈傷組織多用幼穗做材料，受季節影響，只能在幼穗期進行。用成熟種子誘導需要人工剝去外稃和內稃，費時費力。因此如何高效率滅菌獲得禾草種子無菌苗和愈傷組織的方法在科研和實踐上有重要的意義。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種禾本科草的無菌苗獲得的方法，包括如下步驟將預處理過的禾本科草種子培養，得到所述無菌苗；所述預處理包括如下步驟I)去稃將禾本科草種子與濃硫酸混合1-3分鐘，優選混合2分鐘，去除所述濃硫酸；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到去稃后的禾本科草種子；2)滅菌將去稃后的禾本科草種子與乙醇水溶液混合2-4分鐘，優選混合3分鐘，去除乙醇水溶液；然后將禾本科草種子與體積百分含量為8-12%的次氯酸鈉水溶液混合12-17分鐘，優選混合15分鐘，去除次氯酸鈉水溶液；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到滅菌后的禾本科草種子。步驟I)中，所述濃硫酸的體積百分濃度為98% ;步驟2)中，所述乙醇水溶液的體積百分濃度為65% -75%，優選為70%，所述次氯酸鈉水溶液的體積百分濃度為10%。所述禾本科草種子、所述濃硫酸、所述乙醇水溶液和所述次氯酸鈉水溶液的配比是(6-10) g (80-120) ml (80-120) ml (80-120) ml ;優選配比是8g 100ml 100ml 100ml。進一步講，上述預處理還包括在步驟I)去稃之前的除雜，所述除雜包括如下步驟將禾本科草種子與65%-75% (體積百分含量)乙醇水溶液混合，去除不飽滿的種子和雜物。上述培養是指將預處理過的禾本科草種子置于誘導培養基中誘導培養，所述誘導培養基是在MS基本培養基的基礎上添加2，4-D形成的固體培養基，所述2，4-D在所述誘導培養基中的終濃度為l_3mg/L。所述2，4-D在所述MS誘導培養基中的終濃度為2mg/L。所述MS基本培養基的溶劑是水，溶質如表I所示。表I. MS基本培養基(pH5. 8)的溶質權利要求1.禾本科草的無菌苗獲得的方法，包括如下步驟將預處理過的禾本科草種子培養，得到所述無菌苗；所述預處理包括如下步驟 1)去稃將禾本科草種子與濃硫酸混合1-3分鐘，優選混合2分鐘，去除所述濃硫酸；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到去稃后的禾本科草種子； 2)滅菌將去稃后的禾本科草種子與乙醇水溶液混合2-4分鐘，優選混合3分鐘，去除乙醇水溶液；然后將禾本科草種子與體積百分含量為8-12%的次氯酸鈉水溶液混合12-17分鐘，優選混合15分鐘，去除次氯酸鈉水溶液；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到滅菌后的禾本科草種子。2.如權利要求I所述的方法，其特征在于步驟I)中，所述濃硫酸的體積百分濃度為98% ;步驟2)中，所述乙醇水溶液的體積百分濃度為65% -75%，優選為70%，所述次氯酸鈉水溶液的體積百分濃度為IO %。3.如權利要求I或2所述的方法，其特征在于所述禾本科草種子、所述濃硫酸、所述乙醇水溶液和所述次氯酸鈉水溶液的配比是(6_10)g (80-120)ml (80-120)ml (80-120)ml ;優選配比是 8g 100ml 100ml 100ml。4.如權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述預處理還包括在步驟I)去稃之前的除雜，所述除雜包括如下步驟將禾本科草種子與65%-75% (體積百分含量)乙醇水溶液混合，去除不飽滿的種子和雜物。5.如權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述培養是指將預處理過的禾本科草種子置于誘導培養基中誘導培養，所述誘導培養基是在MS基本培養基的基礎上添加2,4-D形成的固體培養基，所述2，4-D在所述誘導培養基中的終濃度為l-3mg/L。6.如權利要求5所述的方法，其特征在于所述2，4-D在所述MS誘導培養基中的終濃度為2mg/L。7.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于所述MS基本培養基的溶劑是水，溶質 如表I所示。8.如權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于所述培養的時間為7天以上，優選11天以上；所述培養的光照周期為每天16小時光照/8小時黑暗。9.如權利要求8所述的方法，其特征在于所述光照周期中光照時的光照強度為4000-120001UX，優選為80001ux，溫度為25_30°C，優選為28 V ;所述光照周期中黑暗時的溫度為18-22°C，優選為20°C。10.如權利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于所述禾本科草種子為羊草種子。全文摘要本專利技術公開了。該方法包括如下步驟將預處理過的禾本科草種子培養，得到所述無菌苗；所述預處理包括如下步驟1)去稃將禾本科草種子與濃硫酸混合1-3分鐘，去除所述濃硫酸；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到去稃后的禾本科草種子；2)滅菌將去稃后的禾本科草種子與乙醇水溶液混合2-4分鐘，去除乙醇水溶液；然后將禾本科草種子與體積百分含量為8-12％的次氯酸鈉水溶液混合12-17分鐘，優選混合15分鐘，去除次氯酸鈉水溶液；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到滅菌后的禾本科草種子。本專利技術提供的高效率滅菌獲得禾草種子無菌苗和愈傷組織的方法在科研和實踐上有重要的意義。文檔編號A01H4/00GK102870671SQ20111019269公開日2013年1月16日 申請日期2011年7月11日 優先權日2011年7月11日專利技術者劉公社, 馬興勇, 程麗琴, 李曉峰, 彭獻軍, 齊冬梅, 陳雙燕 申請人:中國科學院植物研究所本文檔來自技高網...
【技術保護點】
禾本科草的無菌苗獲得的方法，包括如下步驟：將預處理過的禾本科草種子培養，得到所述無菌苗；所述預處理包括如下步驟：1)去稃：將禾本科草種子與濃硫酸混合1？3分鐘，優選混合2分鐘，去除所述濃硫酸；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到去稃后的禾本科草種子；2)滅菌：將去稃后的禾本科草種子與乙醇水溶液混合2？4分鐘，優選混合3分鐘，去除乙醇水溶液；然后將禾本科草種子與體積百分含量為8？12％的次氯酸鈉水溶液混合12？17分鐘，優選混合15分鐘，去除次氯酸鈉水溶液；然后將所述禾本科草種子用水清洗，得到滅菌后的禾本科草種子。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉公社，馬興勇，程麗琴，李曉峰，彭獻軍，齊冬梅，陳雙燕，
申請(專利權)人：中國科學院植物研究所，
類型：發明
國別省市：
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