公開了一具有細胞穿透性，堿基序列特異性和核酸水解性的抗體、其制備方法及包含所述抗體的藥物組合物。所述抗體可通過改變無底物特異性的細胞穿透性，核酸水解性抗體的特定位點制備，不改變抗體的核酸水解能力并賦予其序列特異性。當該抗體自身滲透到細胞內或在細胞內異位表達時，其與單鏈或雙鏈目標核酸特異性結合并水解核酸，因此下調了目標基因的表達。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及一種具有細胞穿透能力和堿基序列特異性的核酸水解性抗體，其作為克服傳統SiRNA技術存在問題的新一代基因沉默技術。更特別的是，本專利技術涉及一種核酸水解性抗體，其通過改變無底物特異性的具有細胞穿透性、核酸水解性抗體的特定位點制備，而不改變抗體的核酸水解能力并賦予其序列特異性，當其自身滲透到細胞內或在細胞內異位表達時，其與單鏈或雙鏈目標核酸特異性結合并水解核酸，從而使目標基因的表達下降。本專利技術同樣涉及一種該抗體的制備方法及包含該抗體的藥物組合物。
技術介紹
在分子生物學的中心法則中，主要有三類生物聚合物起重要作用DNA、RNA和蛋白質。需要某些蛋白質和核糖體的幫助才能將DNA轉錄為RNA。這些蛋白質在特異位點與DNA結合以開始轉錄。轉錄得到的RNA在核糖體內翻譯成蛋白質。檢查蛋白質產物具有哪些功能的典型方法包括從生物系統中去除該蛋白質。生物體具有和不具有目標蛋白質所表現的不同解釋了該蛋白質在生物系統中起的作用。然而，很難控制目標蛋白質在生物體內隨意地表達水平。最近，已經建立了各種能夠特異性識別并水解目標RNA (包括 mRNA)特定區域的控制蛋白質表達的以核酸為基礎的方法，其包括反義寡聚核苷酸、RNA干擾(RNAi)、核酶、DNA 酶等(Scherer 等，NatureBiotechnology, 21:1457-1465，2003 ； Tafech 等，Current Medical Chemistry, 13:863-881，2006)。尤其是，發現于 1998年的 RNA干擾，現在隨時可獲得，且與現有技術相比更容易實現RNA敲除(Fire A等，Nature， 391:806-811, 1998 ;Scherer 等，Nature Biotechnology, 21:1457-1465，2003)。所謂的siRNA(小分子干擾RNA)，21-23堿基長度的雙鏈(ds)RNA，是RNA干擾的核心。這些有特定序列的小分子RNA，不管其產生于內部還是來自于外部轉移，能結合并水解特異性mRNA 以下調目標蛋白質在細胞內的表達(稱為基因敲除)。雖然其原理的建立還不到10年，但 siRNA技術是目前在降低植物/動物細胞中蛋白質表達水平方面應用最廣泛的。然而，RNA 干擾的實際應用存在幾個問題。一個典型的例子是脫靶效應，在當即使21堿基長度的RNA， 不能與目標配對時發生。此外，如果siRNA與目標只有1或2個堿基對不同時，則siRNA誘導的基因敲除顯著降低或不引起干擾。此外，RNA干擾可能在一靶基因的特定區域有效運作，但在多數例子中在其他區域不工作。此外，包括不需要的免疫反應，不恰當的細胞運送， 核酸酶敏感性等作為siRNAs實際應用中的抑制因子(Scherer LJ等，Nat Biotechnol, 21:1457-1465，2003 ;Tafech A 等，CurrMedChem, 13:863-881，2006)。1957年首次發現于系統性紅斑狼瘡(SLE)病人的血清中有核酸(DNA/RNA)結合抗體，其是一種自身抗體，在自身免疫性疾病的患者或小鼠中被檢測到(Robbins W等， Proc. Soc. Exp. Biol. Med.，96(3) 575-9，1957)。許多抗核酸自身抗體實際上發現于系統性紅斑狼瘡或多發性硬化癥患者中。通常，它們與缺乏序列特異性的核酸結合(Jang YJ 等·，Cell. Mol. Life Sci. , 60 (2) 309-20，2003 ；Marion TN 等，Methods 11:3-11，1997)。據報道，SLE患者和SLE小鼠模型的血清具有高濃度的抗核酸抗體，并且主要在自身免疫性疾病的患者中進行自身抗體的研究(Dubrivskaya V等，Biochemistry (Mosc)，68(10) 1081-8，2003)。在1992年，首次發現了一種能夠水解核酸的核酸結合抗體(Shuster A等， Science, 256 (5057) 665-7，1992)。從那時起，生物化學研究集中于此(Nevinsky G等， J. Immunol. Methods, 269 (1-2) 235-49，2002)。因此，核酸水解抗體的研究在生物化學方面處于領先，但是卻仍然處于抗體工程方面的初級階段，如在各種應用中抗體穩定性、 親和力和特異性仍需改善(Cerutti M 等，J. Biol. Chem. , 276(16) 12769-73，2001 ； Kim YR 等，J. Biol. Chem. , 281 (22) 15287-95，2006)。多份報告中公開了抗體與核酸的結合及非抗體蛋白與核酸的結合。首先，鋅指結構，非抗體蛋白，是自然發生的DNA結合基序的代表，如亮氨酸拉鏈和螺旋_轉角-螺旋(Jamieson A 等，Nat. Rev. Drug Discov. , 2(5) 361-8, 2003)。鋅指結構，由大約 20-30個氨基酸殘基組成的小蛋白結構域，使鋅離子(Zn2+)與4個不同方向的2個半胱氨酸和2個組氨酸殘基的常見組合物配位結合。作為DNA實際結合的原因，鋅指結構的α-螺旋與DNA的大溝結合且與3個堿基相互作用。DNA三級結構的不同取決于鋅指結構的氨基酸序列。因此，當α-螺旋改變但不發生構象變化時，鋅指結構可識別不同于之前的新堿基序列。自1999年，成功改變了 16 GNN三級結構的特定指結構(Segal D等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96 (6) 2758-63，1999)，開展了廣泛研究以建立改變底物特異性的方法 (Caroll D等，Nat. Protoc. 1 (3) 1329-41，2006)。因為，它們只有結合核酸的能力，然而，改性后的鋅指結構還需要用于與核酸水解酶結合的其他改變(Mani M.等，Biochem. Biophys. Res. Commun·，334(4)1191-7，2005)。第二種方法是一種經驗方法，其充分利用人乳頭狀瘤病毒(HPV) E2蛋白(E2C)的 DNA 結合域與靴 DNA 結合(M. Laura 等，J. Bio. Chem. , 276(16) 12769-73，2001)。 將DNA-E2C復合物注入小鼠，通過體細胞高頻突變產生抗DNA抗體。在這方面，小鼠將DNA 識別為抗原。為此，首先，DNA-蛋白(E2C)復合物通過內部腹腔注射進入小鼠以引起免疫反應。當DNA-E2C復合物在一定時間內被重復注射以增強免疫應答時，通過體細胞高頻突變產生了注入的DNA-E2C復合物DNA的特異性抗體。擴增后，從小鼠中分離所產生的抗體。 從這些能夠與DNA特異性結合的分離物中，通過使其與目的DNA作用選擇對DNA親和性最高的抗體。—個合理設計提供了描述抗體與核酸結合的第三種方法。在這種方法中，使用人類Y-B-晶狀體的折疊，通過根據結構和序列分析選擇的溶劑暴露氨基酸殘基的不規則分布，產生一通用的結合位點(Hilmar Ε.等，J. Mol. Biol. , 372:172-85，2007)。 作為一般規則，抗體被結構性地分為閱讀框和靈活的、序本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．一種核酸水解性抗體，其能夠滲透進入細胞并特異性結合特定堿基序列的單鏈或雙鏈核酸靶標，且水解該靶標核酸。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：金容星，
申請(專利權)人：亞州大學校產學協力團，
類型：發明
國別省市：KR
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。