克倫特羅快速半定量檢測(cè)試紙制造技術(shù)

克倫特羅快速半定量檢測(cè)試紙，含有背襯、樣液吸收部分、膠體金標(biāo)記部分、檢測(cè)反應(yīng)部分及吸水部分，樣液吸收部分、膠體金標(biāo)記部分、檢測(cè)反應(yīng)部分及吸水部分，依次粘貼在背襯上，其特征在于：膠體金標(biāo)記部分標(biāo)記的物質(zhì)為第二種屬動(dòng)物蛋白與克倫特羅抗體的混合物，或第二種屬動(dòng)物蛋白與克倫特羅檢測(cè)用抗原的混合物，檢測(cè)反應(yīng)部分上面包被有克倫特羅檢測(cè)用抗原１－３條作為檢測(cè)線、或包被有克倫特羅抗體１－３條作為檢測(cè)線，同時(shí)包被有抗第二種屬動(dòng)物蛋白的ＩｇＧ１－３條作為參考線，檢測(cè)線和參考線不能同時(shí)多于１條，組合線數(shù)為２－４條。（*該技術(shù)在2013年保護(hù)過期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
?克倫特羅快速半定量檢測(cè)試紙??????????????????
本技術(shù)涉及一種檢測(cè)試紙，特別涉及一種克倫特羅(clenbuterol，CLB)檢測(cè)試紙。??????????????????
技術(shù)介紹
克倫特羅又稱鹽酸克倫特羅，或克喘素，俗稱“瘦肉精”，本用于治療哮喘等疾病，在發(fā)現(xiàn)它能顯著提高動(dòng)物的產(chǎn)量和瘦肉率之后，曾一度作為飼料添加劑廣泛用于畜牧業(yè)。但是，它毒性大，易在動(dòng)物組織中殘留，人們常因食入其動(dòng)物食品而引起中毒。我國(guó)雖繼歐美之后，1997年禁止它在飼料中使用，但由于受經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)使，違法濫用現(xiàn)象仍然存在。據(jù)農(nóng)業(yè)部在網(wǎng)上公布的資料，一些不法商販把克倫特羅制成小包裝零售或與飼料搭配銷售，違法銷售轉(zhuǎn)入地下，更趨隱蔽。因此，在抓緊源頭控制的同時(shí)，必須加強(qiáng)其安全檢測(cè)。對(duì)克倫特羅殘留的檢測(cè)目前主要采用高效液相色譜法(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)。GC-MS法和HPLC法靈敏、準(zhǔn)確，檢測(cè)下限可達(dá)0.25ng/mL，但由于這兩種方法需要貴重儀器、樣品前處理繁瑣、分析速度慢，需要幾小時(shí)至幾十小時(shí)、檢測(cè)樣品量少，難以對(duì)批量樣品進(jìn)行檢測(cè)，需受過專門訓(xùn)練的人員才能操作、檢測(cè)費(fèi)用高，幾百上千元/樣，所以應(yīng)用面窄，僅以一些重要的衛(wèi)生防疫和質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)督部門采用為主，通常對(duì)初步檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品確認(rèn)時(shí)采用。ELISA法是目前研究較多的克倫特羅檢測(cè)方法，具有靈敏度高，檢測(cè)量大，樣品前處理簡(jiǎn)單，比儀器分析時(shí)間短、成本低，檢測(cè)下限可達(dá)0.09ng/mL以下。歐美多家公司已有ELISA試劑盒投放市場(chǎng)，如英國(guó)Randox公司的試劑盒銷-->往全球。但該方法仍需酶標(biāo)儀等部分設(shè)備，分析時(shí)間1-3小時(shí)，難以在現(xiàn)場(chǎng)采用。為克服其缺點(diǎn)，使對(duì)克倫特羅的檢測(cè)更方便、時(shí)間更短、成本更低，一些單位開展了膠體金檢測(cè)試紙研究，并有“鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試紙條”、“一種免疫層析一步法檢測(cè)腎上腺素激動(dòng)劑類藥物的方法及試紙的制備”的報(bào)道，這兩則報(bào)道所描述的技術(shù)只能定性檢測(cè)，不能半定量檢測(cè)，且組合線只有2條，而本申請(qǐng)所描述的試紙，為半定量試紙，加有延長(zhǎng)部分或增厚部分，組合線數(shù)2-4條。另外也有“半定量快速檢測(cè)鹽酸克倫特羅的膠體金試紙條及生產(chǎn)和使用方法”的報(bào)道，其與本申請(qǐng)不同之處在于：第一、其無參考線；第二、在使用方法上，其樣品中鹽酸克倫特羅含量越高，檢測(cè)線顯色條數(shù)多，而本申請(qǐng)的所描述的試紙，樣品中克倫特羅含量越高，檢測(cè)線顏色越淺，檢測(cè)線顯色條數(shù)越少。以上幾則其他研究者的報(bào)道，在膠體金標(biāo)記部分和檢測(cè)反應(yīng)部分之間都無任何其他材料，而本申請(qǐng)所描述的試紙?jiān)谀z體金標(biāo)記部分和檢測(cè)反應(yīng)部分之間加有延長(zhǎng)部分，或在膠體金標(biāo)記部分之下或之上加有增厚部分。因此，本申請(qǐng)克服了上述幾則報(bào)道的缺點(diǎn)，研制出了克倫特羅半定量檢測(cè)試紙。??????????????????
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本設(shè)計(jì)的目的：研制出簡(jiǎn)便、靈敏、價(jià)格低廉的克倫特羅快速半定量檢測(cè)試紙。現(xiàn)結(jié)合附圖對(duì)本技術(shù)進(jìn)行說明：附圖1為本技術(shù)的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中1為樣液吸收部分、2為膠體金標(biāo)記部分、3為檢測(cè)反應(yīng)部分、4為檢測(cè)線、5為參考線、6為吸水部分。它們按照下列次序粘貼在背襯上：樣液吸收部分、膠體金標(biāo)記部分、檢測(cè)反應(yīng)部分、吸水部分。膠體金標(biāo)記部分為玻-->璃纖維或醋酸纖維或尼龍膜，其上標(biāo)記的物質(zhì)為第二種屬動(dòng)物蛋白與克倫特羅抗體的混合物，或第二種屬動(dòng)物蛋白與克倫特羅檢測(cè)用抗原的混合物。混合物的混合方法：第二種屬動(dòng)物蛋白與克倫特羅抗體或抗原的混合比例：以標(biāo)準(zhǔn)的克倫特羅樣品為標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)陰性樣品檢測(cè)時(shí)，參考線和檢測(cè)線剛好出現(xiàn)肉眼可見的紅色為準(zhǔn)。檢測(cè)反應(yīng)部分上面包被有克倫特羅檢測(cè)用抗原1～3條作為檢測(cè)線，或包被有克倫特羅抗體1～3條作為檢測(cè)線，同時(shí)還包被有抗第二種屬動(dòng)物蛋白的IgG?1～3條作為參考線。檢測(cè)線和參考線組合時(shí)不能同時(shí)多于1條，組合線條數(shù)為2～4條，組合方式為1條檢測(cè)線和1條參考線、1條檢測(cè)線和2條參考線、1條檢測(cè)線和3條參考線、2條檢測(cè)線和1條參考線、3條檢測(cè)線和1條參考線五種形式。根據(jù)半定量檢測(cè)的準(zhǔn)確度要求，組合線數(shù)越多，半定量越準(zhǔn)確。當(dāng)膠體金標(biāo)記部分標(biāo)記對(duì)象為第二種屬動(dòng)物蛋白和克倫特羅抗體混合物時(shí)，為了提高檢測(cè)試紙的靈敏度，在膠體金標(biāo)記部分和檢測(cè)反應(yīng)部分之間用玻璃纖維紙或?yàn)V紙或吸水紙加有延長(zhǎng)部分或在膠體金標(biāo)記部分之上或之下加有增厚部分。其中檢測(cè)用抗原是指克倫特羅與蛋白質(zhì)類物質(zhì)或多糖類物質(zhì)形成的偶合物，所說蛋白質(zhì)為牛血清白蛋白、匙孔血、藍(lán)蛋白、卵清白蛋白。多糖為葡聚糖、殼聚糖、纖維素。在用膠體金標(biāo)記抗原時(shí)此混合物作為標(biāo)記的對(duì)象，或在用膠體金標(biāo)記抗體時(shí)此混合物作為檢測(cè)線上的包被物質(zhì)；第二種屬動(dòng)物蛋白指非抗體來源屬動(dòng)物的蛋白。本技術(shù)所描述的試紙的各部分處理與功能如下：背襯：為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，起固定支持試紙其他組成部分的作用。樣液吸收部分制備：將濾紙或玻璃纖維紙浸入pH7.0～8.4的PBS中2min，取出，80℃烘干或其他方式干燥，即作為樣液吸收部-->分，檢測(cè)時(shí)起吸收樣品溶液的作用，便于樣品溶液向上移動(dòng)。膠體金標(biāo)記部分的制備：該部分起固定膠體金標(biāo)記的抗原或抗體的作用。制備步驟包括膠體金溶膠的制備、膠體金標(biāo)記克倫特羅抗體或克倫特羅抗原、膠體金標(biāo)記部分處理。(1)膠體金溶膠的制備：將氯金酸(HAuCL4)用超純水配置成1％的母液，取1mL的母液，用超純水定容到100mL，配成0.01％的溶液，加熱至沸騰，加入1～5mL的1％檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)加熱到出現(xiàn)透明的橙紅色為止，即為膠體金溶膠。(2)膠體金標(biāo)記克倫特羅抗體：將克倫特羅單克隆抗體或多克隆抗體和第二種屬動(dòng)物蛋白分別用PBS(0.01mol/L，pH7.0～7.5)溶解稀釋至2～4mg/mL，每100mL膠體金溶膠加入1～3mL?2～4mg/mL的克倫特羅抗體和1～1.5mL?2～4mg/mL第二種屬動(dòng)物蛋白，震蕩2min，用0.2mol/L的K2CO3調(diào)節(jié)pH至8.4，振蕩5min，加入11％PEG-10000?2mL，振蕩5min，8000～15000r/min離心15min，除去上清，用PBS(0.01mol/L，pH7.0～7.5)復(fù)溶，以6000～13000r/min離心15min，除去上清，將沉淀用PBS(0.01mol/L，pH7.0～7.5)稀釋500～2000倍，產(chǎn)物作為金標(biāo)克倫特羅抗體(GAb)。(3)膠體金標(biāo)記克倫特羅抗原：將克倫特羅檢測(cè)用抗原和第二種屬動(dòng)物蛋白分別用PBS(0.01mol/L，pH7.0～8.4)溶解稀釋至2～4mg/mL，每100mL膠體金溶膠加入1～3mL?2～4mg/mL的檢測(cè)用抗原和1～1.5mL?2～4mg/mL第二種屬動(dòng)物蛋白，震蕩2min，用0.2mol/L的K2CO3調(diào)節(jié)pH至8.4，振蕩5min，加入11％PEG-10000?2mL，振蕩5min，8000~15000r/min離心15min，除去上清，用PBS(0.01mol/L，pH7.0～7.5)復(fù)溶，以6000～13000r/min離心15min，除去上清，將沉淀用PBS(0.01mol/L，pH7.0～7.5)稀釋500～2000倍，產(chǎn)物作為金標(biāo)記的本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1、克倫特羅快速半定量檢測(cè)試紙含有背襯、樣液吸收部分、膠體金標(biāo)記部分、檢測(cè)反應(yīng)部分及吸水部分，樣液吸收部分、膠體金標(biāo)記部分、檢測(cè)反應(yīng)部分及吸水部分，依次粘貼在背襯上，其特征在于：膠體金標(biāo)記部分標(biāo)記的物質(zhì)為第二種屬動(dòng)物蛋白與克倫特羅抗體的混合物，或第二種屬動(dòng)物蛋白與克倫特羅檢測(cè)用抗原的混合物，檢測(cè)反應(yīng)部分上面包被有克倫特羅檢測(cè)用抗原1-3條作為檢測(cè)線、或包被有克倫特羅抗體1-3條作為檢測(cè)線，同時(shí)包被有抗第二種屬動(dòng)物蛋白的IgG?1-3條作為參考線，檢測(cè)線和參考線不能同時(shí)多于1條，組合線數(shù)為2-4條。2、根據(jù)權(quán)利要求1所說的試紙，其特征在于：克倫特羅檢測(cè)用抗原為克倫特羅與蛋白質(zhì)類物質(zhì)或多糖類物質(zhì)形成的偶合物。3、根據(jù)權(quán)利要求1...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孫遠(yuǎn)明，雷紅濤，潘科，黃麗，黃曉鈺，諶國(guó)蓮，吳青，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：實(shí)用新型
國(guó)別省市：