一種豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法技術

本發明專利技術公開了一種豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，步驟為：(1)樣品的提取；(2)樣品的凈化；(3)儀器檢測；(4)鹽酸克倫特羅的定量檢測。該提取方法不需要酶解，前處理時間短，采用液相色譜串聯質譜儀(LC/MS/MS)進行檢測，能夠降低該方法的檢出限，同時有效的節約時間。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于產品質量檢測領域，具體涉及一種豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法。
技術介紹
鹽酸克倫特羅(Clenbuterol，簡寫CLB)，是一種β受體激動劑，具有松弛氣管平滑肌作用，用于治療哮喘，所以鹽酸克倫特羅又稱氨哮素、克喘素。20世紀80年代初，科學家發現鹽酸克倫特羅進入體內后，可明顯促進動物生長，并增加瘦肉率，所以又稱其為“瘦肉精”。但因其在動物體內代謝緩慢，人食用含有鹽酸克倫特羅的畜產品，可引起蓄積中毒，導致嘔吐、心跳驟然加速等異常生理反應，嚴重者會造成死亡，因此我國禁止使用。早在1987年，歐盟、美國已宣布禁止使用CLB作為獸用飼料添加劑，中國農業部及藥品檢查管理局于2000年明令禁止生產、銷售和應用此藥作飼料添加劑飼喂家畜。由于鹽酸克倫特羅在動物生產中有明顯的促生長和提高瘦肉率的作用，受此利益驅使國內外CLB在養殖業中濫用問題非常嚴重。又因CLB在生產中的用量是治療量的5～10倍，而且持續添加時間(3周以上)和在體內消除半衰期(25～39h)都很長，所以極易在動物組織中蓄積殘留。但如果作為飼料添加劑，使用劑量是人用藥劑量的10倍以上，才能達到提高瘦肉率的效果。它用量大、使用的時間長、代謝慢，所以在屠宰前到上市，在豬體內的殘留量都很大。這個殘留量通過食物進入人體，就使人體漸漸地中毒(積蓄中毒)。如果一次攝入量過大，就會產生異常生理反應的中毒現象，因此而被禁用。在機體的各個組織中，CLB在眼和毛發中殘留的濃度最高，其他器官的殘留情況是:肺、肝、腎約為血漿濃度的20～90倍，肌肉和脂肪為3～15倍。如果在屠宰前沒有休藥期，則殘留量將更高。雖然鹽酸克倫特羅的毒性并不是很強，小鼠、豚鼠靜脈注射的半數致死量分別是每公斤體重27.6mg和12.6mg。但是由于它的半衰期長，在體內代謝慢，極易蓄積殘留于動物體內。自上世紀80年代中期歐美國家發現瘦肉精的毒副作用以來，至今世界范圍內已有數以千計甚至萬計因食用殘留有瘦肉精的動物源食品而中毒的人員。CLB中毒的患者群中，對患心、腦血管疾病、糖尿病、甲狀腺亢進、青光眼、前列腺肥大者可造成威脅生命的惡果。孕婦中毒又可導致癌變、胎兒致畸的嚴重危害性。歐盟成員國已將CLB殘留作為肉品進口必檢項目，因而這也成了WTO成員國之間進行國際貿易的技術壁壘。由此可見，CLB的非法使用及殘留不但嚴重地威脅著消費者的健康，而且也影響著一個國家的對外貿易和聲譽。現有國家標準、農業部標準及地方標準檢測鹽酸克倫特羅的方法穩定，但是很多檢測方法均需要酶解的檢測時間較長。因而有必要建立關于關于豬肉中鹽酸克倫特羅的檢測方法，以便更好地發現和監管鹽酸克倫特羅在養殖中非法使用的情況。
技術實現思路
為了克服現有
存在的上述問題，本專利技術的目的在于，提供一種豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，本專利技術提供的豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，它包括如下具體步驟：(1)樣品的提取：從所取豬肉樣品中取出部分有代表性樣品，經高速組織搗碎機搗碎，用四分法縮分出不少于500g試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內，加封后作出標記，一份作試樣，一份作留樣；豬肉樣品于-20℃保存，稱取約5g試樣，精確至0.01g，放入50mL離心管中，加入20mL乙腈，均質提取1min；離心3500rpm，5min；(2)樣品的凈化：收集上清液過SAX/PSA凈化柱(柱活化：乙腈10mL)，上清液注入活化后的SAX/PSA凈化柱，乙腈洗脫20mL，收集上清液及洗脫液到150mL旋蒸瓶中，用旋轉蒸發儀于50℃下旋蒸至近干；用0.1％甲酸乙腈水(1:1)溶解液2mL，5ml正己烷，渦旋1min，靜置5min；(3)儀器檢測：取下層溶液過0.2μm濾膜后，用液相色譜-串聯質譜儀測定；(4)鹽酸克倫特羅的定量檢測：以豬肉等空白基質制備濃度系列分別為0.01、0.05、0.1、0.5、1ng/mL，并繪制校準曲線，外標法定量。本專利技術提供的豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，其有益效果在于，該提取方法不需要酶解，前處理時間短，采用液相色譜串聯質譜儀(LC/MS/MS)進行檢測，能夠降低該方法的檢出限，同時有效的節約時間。以豬肉等空白基質制備濃度系列分別為0.01、0.05、0.1、0.5、1ng/mL，并繪制校準曲線附圖說明圖1是本專利技術實施例的以豬肉等空白基質制備濃度系列校準曲線圖。具體實施方式下面參照附圖，結合實施例，對本專利技術提供的豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，進行詳細的說明。實施例本實施例的豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，包括如下步驟：1.1樣品的提取稱取約5g試樣，精確至0.01g，放入50mL離心管中，加入20mL乙腈，均質提取1min；離心3500rpm，5min；1.2樣品的凈化：收集上清液過SAX/PSA凈化柱(柱活化：乙腈10mL)，上清液注入活化后的SAX/PSA凈化柱，乙腈洗脫20mL，收集上清液及洗脫液到150mL旋蒸瓶中，用旋轉蒸發儀于50℃下旋蒸至近干；用0.1％甲酸乙腈水(1:1)溶解液2mL，5ml正己烷，渦旋1min，靜置5min；1.3儀器檢測：取下層溶液過0.2μm濾膜后，用液相色譜-串聯質譜儀測定。1.3.1液相色譜參考條件表1、液相梯度洗脫條件：1.3.2質譜參考條件離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多重反應監測；電噴霧電壓：5500V；霧化氣壓力：0.258MPa；氣簾氣壓力：0.096MPa；輔助氣流速：0.252MPa；離子源溫度：500℃；定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量和去簇電壓，見表2。表2、鹽酸克倫特羅的保留時間和質譜參數Q1Q2TimeIDDPCEEPCXP1st277.2203.150Clenbuterol1561023102nd277.2259.250Clenbuterol2561017143rd277.2168.150Clenbuterol356104184th277.2132.150Clenbuterol4561039241.4鹽酸克倫特羅的定量檢測：以豬肉等空白基質制備濃度系列分別為0.01、0.本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，其特征在于：它包括如下具體步驟：(1)樣品的提取：從所取豬肉樣品中取出部分有代表性樣品，經高速組織搗碎機搗碎，用四分法縮分出不少于500g試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內，加封后作出標記，一份作試樣，一份作留樣；豬肉樣品于?20℃保存，稱取約5?g試樣，精確至0.01g，放入50?mL離心管中，加入20mL乙腈，均質提取1min；離心3500rpm，5min；(2)樣品的凈化：收集上清液過SAX/PSA?凈化柱（柱活化：乙腈10mL），上清液注入活化后的SAX/PSA?凈化柱，乙腈洗脫20mL，收集上清液及洗脫液到150mL旋蒸瓶中，用旋轉蒸發儀于50℃下旋蒸至近干；用0.1%甲酸乙腈水（1:1）溶解液2mL，5ml正己烷，渦旋1min，靜置5min；(3)儀器檢測：取下層溶液過0.2μm濾膜后，用液相色譜?串聯質譜儀測定；(4)鹽酸克倫特羅的定量檢測：以豬肉等空白基質制備濃度系列分別為0.01、0.05、0.1、0.5、1ng/mL，并繪制校準曲線，外標法定量。

【技術特征摘要】
1.一種豬肉中鹽酸克倫特羅的提取方法，其特征在于：它包括如下具體步驟：
(1)樣品的提取：從所取豬肉樣品中取出部分有代表性樣品，經高速組織搗碎機搗碎，
用四分法縮分出不少于500g試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內，加封后作出標記，一份作
試樣，一份作留樣；豬肉樣品于-20℃保存，稱取約5g試樣，精確至0.01g，放入50mL離心管
中，加入20mL乙腈，均質提取1min；離心3500rpm，5min；
(2)樣品的凈化：收集上清液過SAX/PSA凈化柱（柱活化：乙腈1...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊秀梅，劉曼，張莉，
申請(專利權)人：青島康大食品有限公司，
類型：發明
國別省市：山東;37