一種新的多肽——人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62和編碼這種多肽的多核苷制造技術

本發(fā)明專利技術公開了一種新的多肽－人含ＡＴＰ／ＧＴＰ結合結構域的ＥＦ－手型鈣結合蛋白６２，編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)ＤＮＡ重組技術產(chǎn)生這種多肽的方法。本發(fā)明專利技術還公開了此多肽用于治療多種疾病的方法，如惡性腫瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各類炎癥等。本發(fā)明專利技術還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明專利技術還公開了編碼這種新的人含ＡＴＰ／ＧＴＰ結合結構域的ＥＦ－手型鈣結合蛋白６２的多核苷酸的用途。（*該技術在2019年保護過期，可自由使用*）

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，具體地說，本專利技術描述了一種新的多肽--人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。細胞液中鈣離子濃度的變化引起了廣泛的細胞反應。細胞內的鈣結合蛋白是通過酶反應或蛋白與蛋白相互作用調節(jié)來傳導鈣信號中的關鍵分子。它們中的一些在細胞周期中作用，或作用于細胞分化。被第二信號分子(如肌醇三磷酸)刺激后，它們短暫地從內質網(wǎng)釋放到周圍的細胞質中。相似的生理過程在核膜破裂和有絲分裂后期的染色單體分離中亦發(fā)生。許多鈣結合蛋白均屬于同一進化家族，且含有一共同的鈣結合結構域，即EF-手型結構域。這些蛋白構成了一很大的蛋白家族，即EF-手型鈣結合蛋白家族。該蛋白家族的成員分布非常廣泛，這些蛋白均在細胞生長及分化過程中起重要的作用，調控著細胞循環(huán)及控制著生物體的新陳代謝過程。EF-手型結構域包含一個12個氨基酸殘基組成的環(huán)，這個環(huán)通過一個12個氨基酸殘基的α螺旋區(qū)域向兩邊伸展，組成約成90度的角。在EF-hand環(huán)中，鈣離子結合于一個五邊形的雙錐狀的構象中。涉及結合的6個殘基在1，3，5，7，9和12位。12位上保守的Glu或Asp提供與Ca配位的兩個氧原子(雙配位基配體)。EF-手型鈣結合蛋白在該家族中的分布較多，該類鈣結合蛋白具有如下保守的一致性序列片段(2)-X(2)--D-X(3)--X(3)---X---X(2)--；所有EF-手型鈣結合蛋白均具有這一一致性序列片段，而非EF-手型的蛋白中不含有這一序列片段。該序列片段包含有EF-手型的高親和區(qū)域，但這一位點不具備鈣結合特征。其不是蛋白與鈣結合的中心位點，但在生物體內調節(jié)著蛋白與鈣離子的親和作用。ATP或GTP結合基序是各種ATP/GTP結合蛋白中普遍存在的結構域，一些連接ATP或GTP的蛋白都或多或少含有這一保守的motif序列，該基序具有保守的特征性序列片段-X(4)-G-K-(其中X為任意氨基酸殘基)。這些motif中最為保守的是glycine富集區(qū)域，這一區(qū)域在β線與α螺旋之間形成一個易彎曲的環(huán)。這一彎曲環(huán)通常與核苷酸上的某一磷酸基團反應，該motif序列通常被稱為“A”共有序列或P環(huán)。該基序在生物體內通常負責與ATP、GTP結合，為蛋白發(fā)揮生物學功能提供所需的能量及穩(wěn)定蛋白在生物體內的結構，協(xié)助蛋白完成其正常的生理學功能。其表達異常將直接導致一些蛋白的異常表達及功能異常，從而引發(fā)各種相關的疾病，如發(fā)育紊亂、腫瘤及癌癥的發(fā)生等。本專利技術的新的人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62也含有EF-手型鈣結合蛋白的保守的EF-手型一致性序列片段，同時，還含有ATP/GTP結合結構域，因而，其為人鈣結合蛋白家族的新成員，且與該蛋白家族的其它成員具有相似的生物學功能。該蛋白在生物體內調控著細胞的生長及分化，并調節(jié)著生物體的新陳代謝過程。其表達異常將引發(fā)各種相關的發(fā)育紊亂癥、各組織的代謝紊亂癥及一些神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。由于如上所述人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62蛋白在機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術的一個目的是提供分離的新的多肽--人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62的多核苷酸的重組載體。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。本專利技術的另一個目的是提供生產(chǎn)人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62的方法。本專利技術的另一個目的是提供針對本專利技術的多肽--人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62的抗體。本專利技術的另一個目的是提供了針對本專利技術多肽--人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本專利技術的另一個目的是提供診斷治療與人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62異常相關的疾病的方法。本專利技術涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No. 2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本專利技術還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No. 2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO1中163-1857位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2846位的序列。本專利技術另外涉及一種含有本專利技術多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細胞和回收表達產(chǎn)物的制備本專利技術多肽的方法。本專利技術還涉及一種能與本專利技術多肽特異性結合的抗體。本專利技術還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術的多肽。本專利技術還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術還涉及一種體外檢測與人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本專利技術多肽的量或生物活性。本專利技術也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。本專利技術還涉及本專利技術的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療發(fā)育紊亂癥、各組織的代謝紊亂癥及一些神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或其它由于人含ATP/GTP結合結構域的EF-手型鈣結合蛋白62表達異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。本說明書和權利要求書中使用的下列術語除非特別說明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術語“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質序列及其片段或部分。當本專利技術中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質分子的氨基酸序列時，這種“多肽”或“蛋白質”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質分子相關的完整的天然氨基酸。蛋白質或多核苷酸“變體”是指一種具有一個或多個氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的多核苷酸序列。所述改變可包括氨基酸序列或核苷酸本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種分離的多肽－人含ＡＴＰ／ＧＴＰ結合結構域的ＥＦ－手型鈣結合蛋白６２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：毛裕民，謝毅，秦義龍，申曉東，林盛蔭，
申請(專利權)人：上海博容基因開發(fā)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：31[中國|上海]